Multiplex cyklisk fluorescerande immunhistokemi

Tumörens mikromiljö involverar interaktioner mellan värdceller, tumörceller, immunceller, stromaceller och kärl. Att karakterisera och rumsligt organisera immuncellers undergrupper och målproteiner är avgörande för prognostiska och terapeutiska ändamål. Detta har lett till utvecklingen av multiplexerade immunhistokemiska färgningsmetoder. Multiplex fluorescensimmunhistokemi möjliggör samtidig detektion av flera markörer, vilket underlättar en omfattande förståelse av cellfunktion och intercellulära interaktioner. I den här artikeln beskriver vi ett arbetsflöde för multiplex cyklisk fluorescerande immunhistokemianalys och dess tillämpning i kvantifieringsanalys av lymfocytundergrupper. Den multiplexa cykliska fluorescerande immunhistokemiska färgningen följer liknande steg och reagenser som standardimmunhistokemi, vilket involverar antigenhämtning, cyklisk antikroppsinkubation och färgning på ett formalinfixerat paraffininbäddat (FFPE) vävnadsglas. Under antigen-antikroppsreaktionen framställs en blandning av antikroppar från olika arter. Förhållanden, såsom antigenhämtningstid och antikroppskoncentration, optimeras och valideras för att öka signal-brusförhållandet. Denna teknik är reproducerbar och fungerar som ett värdefullt verktyg för immunterapiforskning och kliniska tillämpningar.