A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Описана простая процедура выращивания аксенической Делии антиква с помощью полуферментированных стерильных рационов. С помощью ПЦР в каждом возрасте аксенической D. antiqua был обнаружен только один штамм Wolbachia.
Аксенические насекомые получают из стерильных систем искусственного выращивания с использованием стерильных сред. Эти насекомые, отличающиеся небольшими размерами, коротким циклом роста и низкой потребностью в корме, идеально подходят для изучения взаимоотношений между микроорганизмами и хозяевами. Микробиота кишечника оказывает существенное влияние на физиологические характеристики насекомых-хозяев, и введение специфических штаммов аксеническим насекомым обеспечивает метод проверки микробных функций кишечника. Delia antiqua, опасный вредитель отряда Diptera, семейства Anthomyiidae и рода Delia, в основном питается луком, чесноком, луком-пореем и другими овощами семейства Лилейные. Его личинки питаются луковицами, вызывая гниение, увядание и даже гибель целых растений. При выращивании личинок аксенических растений можно проводить последующие исследования для наблюдения за влиянием кишечной микрофлоры на рост и развитие D. antiqua. В отличие от метода, предполагающего уничтожение антибиотиками ассоциированных микробов, в данной статье представлен малозатратный и высокоэффективный подход к выращиванию аксенической D. antiqua. После поверхностной стерилизации яиц D. antiqua для выращивания личинок использовали полуферментированные стерильные диеты, а аксеническое состояние D. antiqua проверяли с помощью культурально-зависимых и культурно-независимых анализов. В заключение следует отметить, что сочетание стерилизации яиц насекомых и приготовления стерильных рационов для культивирования личинок позволило разработать эффективный и простой метод получения аксенической D. antiqua. Этот метод обеспечивает мощный подход к изучению взаимодействия насекомых и микрофлоры.
Аксенические животные, определяемые как животные, у которых не могут быть обнаружены жизнеспособные микроорганизмы или паразиты, являются ценными экспериментальными моделями для изучения взаимодействий между хозяином и микроорганизмом 1,2. Насекомые, самая многочисленная группа беспозвоночных, могут образовывать симбиотические отношения с микроорганизмами3. Аксенические насекомые могут быть использованы для изучения взаимодействий между хозяином и симбионтом в симбиотических системах4. Например, Nishide et al.5 разработали практическую сте....
D. antiqua добывают с месторождения Фаньчжэнь, Тайань.
1. Приготовление стерильных рационов
Этапы жизни D. antiqua изображены на рисунке 4. Полный жизненный цикл включает яйца, личинки, куколку (рис. 4C) и взрослых особей (рис. 4D). Их культивируют в стерильных центрифужных пробирках, и их внешний вид и выживаемость неотличимы от D. a.......
Насекомые обладают очень сложной микробиотой кишечника20,21, что обуславливает необходимость использования аксенических насекомых, инокулированных специфическими штаммами кишечной микрофлоры, для изучения взаимодействия насекомых и микроорганизмов. ?.......
Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (32272530), проектом «Новые двадцать стратегий для университетов в Цзинане» (2021GXRC040), крупными проектами научно-технических инноваций в провинции Шаньдун (2021TZXD002) и Проектом интеграции науки и образования Технологического университета Цилу (2022PYI009, 2022PY016, 2022PT105).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.22 μM filter bottle | Thermo Scientific | 450-0045 | |
0.22 μM Syringe Filter | Biosharp | BS-QT-011 | |
100-mesh sieve | Zhejiang Shangyu Jinding Standard Sieve Factory | No Catalog numbers | |
1x PBS solution | Solarbio | P1020 | |
2x Taq PCR Master Mix | GENVIEW | GR1113-1ML | |
5.2% NaClO solution | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 80010428 | |
500 mL Conical flask | Thermo Scientific | 4103-0500 | |
50 mL vented centrifuge tube | JET BIOFIL | BRT-011-050 | |
50x TAE buffer | GENVIEW | GT1307 | |
Agar powder | Ding Guo | DH010-1.1 | |
Biochemical incubator | STIK | 21040121500010 | |
Cell sieve | SAINING | 5022200 | |
Choline chloride | Sangon Biotech | A600299-0100 | |
ddH2O | Ding Guo | PER018-2 | |
Disposable grinding pestle | JET BIOFIL | CSP-003-002 | |
DNA extraction kit | Sangon Biotech | B518221-0050 | |
DNA Marker | Sangon Biotech | B600335-0250 | |
Ethanol absolute | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10009218 | |
Filter paper | NEWSTAR | 1087309025 | |
Food processor | Guangdong Midea Life Electric Appliance Manufacturing Co., Ltd. | WBL25B26 | |
Illuminated incubator | Shanghai ESTABLISH Instrumentation Co., Ltd. | A16110768 | |
L-Ascorbic acid | Sangon Biotech | A610021-0100 | |
L-shaped spreader | SAINING | 6040000 | |
Nutrient agar medium | Hope Bio | HB0109 | |
Scissors | Bing Yu | BY-103 | Purchase on Jingdong |
Shock incubator | Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd. | 2020000014 | |
Sucrose | GENVIEW | CS326-500G | |
Super Green nucleic acid dye | Biosharp | BS355A | |
Super-clean table | Heal Force | AC130052 | |
TSB | Hope Bio | HB4114 | |
Vacuum pump | Zhejiang Taizhou Seeking Precision Vacuum Pump Co., Ltd. | 22051031 | |
Yeast extract | Thermo Scientific | LP0021B |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved