Выращивание Axenic Delia antiqua с помощью полуферментированных стерильных рационов

Summary

Описана простая процедура выращивания аксенической Делии антиква с помощью полуферментированных стерильных рационов. С помощью ПЦР в каждом возрасте аксенической D. antiqua был обнаружен только один штамм Wolbachia.

Abstract

Аксенические насекомые получают из стерильных систем искусственного выращивания с использованием стерильных сред. Эти насекомые, отличающиеся небольшими размерами, коротким циклом роста и низкой потребностью в корме, идеально подходят для изучения взаимоотношений между микроорганизмами и хозяевами. Микробиота кишечника оказывает существенное влияние на физиологические характеристики насекомых-хозяев, и введение специфических штаммов аксеническим насекомым обеспечивает метод проверки микробных функций кишечника. Delia antiqua, опасный вредитель отряда Diptera, семейства Anthomyiidae и рода Delia, в основном питается луком, чесноком, луком-пореем и другими овощами семейства Лилейные. Его личинки питаются луковицами, вызывая гниение, увядание и даже гибель целых растений. При выращивании личинок аксенических растений можно проводить последующие исследования для наблюдения за влиянием кишечной микрофлоры на рост и развитие D. antiqua. В отличие от метода, предполагающего уничтожение антибиотиками ассоциированных микробов, в данной статье представлен малозатратный и высокоэффективный подход к выращиванию аксенической D. antiqua. После поверхностной стерилизации яиц D. antiqua для выращивания личинок использовали полуферментированные стерильные диеты, а аксеническое состояние D. antiqua проверяли с помощью культурально-зависимых и культурно-независимых анализов. В заключение следует отметить, что сочетание стерилизации яиц насекомых и приготовления стерильных рационов для культивирования личинок позволило разработать эффективный и простой метод получения аксенической D. antiqua. Этот метод обеспечивает мощный подход к изучению взаимодействия насекомых и микрофлоры.

Introduction

Аксенические животные, определяемые как животные, у которых не могут быть обнаружены жизнеспособные микроорганизмы или паразиты, являются ценными экспериментальными моделями для изучения взаимодействий между хозяином и микроорганизмом ^1,2. Насекомые, самая многочисленная группа беспозвоночных, могут образовывать симбиотические отношения с микроорганизмами³. Аксенические насекомые могут быть использованы для изучения взаимодействий между хозяином и симбионтом в симбиотических системах⁴. Например, Nishide et ^al.5 разработали практическую сте....

Protocol

D. antiqua добывают с месторождения Фаньчжэнь, Тайань.

1. Приготовление стерильных рационов

1. Снимите внешние слои зеленого лука и выбросьте зеленые листья. Сохраните белую часть зеленого лука (рисунок 1А) и промойте их стерильной водой, повто.......

Discussion

Насекомые обладают очень сложной микробиотой кишечника^20,21, что обуславливает необходимость использования аксенических насекомых, инокулированных специфическими штаммами кишечной микрофлоры, для изучения взаимодействия насекомых и микроорганизмов. ?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 μM filter bottle	Thermo Scientific	450-0045
0.22 μM Syringe Filter	Biosharp	BS-QT-011
100-mesh sieve	Zhejiang Shangyu Jinding Standard Sieve Factory	No Catalog numbers
1x PBS solution	Solarbio	P1020
2x Taq PCR Master Mix	GENVIEW	GR1113-1ML
5.2% NaClO solution	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	80010428
500 mL Conical flask	Thermo Scientific	4103-0500
50 mL vented centrifuge tube	JET BIOFIL	BRT-011-050
50x TAE buffer	GENVIEW	GT1307
Agar powder	Ding Guo	DH010-1.1
Biochemical incubator	STIK	21040121500010
Cell sieve	SAINING	5022200
Choline chloride	Sangon Biotech	A600299-0100
ddH2O	Ding Guo	PER018-2
Disposable grinding pestle	JET BIOFIL	CSP-003-002
DNA extraction kit	Sangon Biotech	B518221-0050
DNA Marker	Sangon Biotech	B600335-0250
Ethanol absolute	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	10009218
Filter paper	NEWSTAR	1087309025
Food processor	Guangdong Midea Life Electric Appliance Manufacturing Co., Ltd.	WBL25B26
Illuminated  incubator	Shanghai ESTABLISH Instrumentation Co., Ltd.	A16110768
L-Ascorbic acid	Sangon Biotech	A610021-0100
L-shaped spreader	SAINING	6040000
Nutrient agar medium	Hope Bio	HB0109
Scissors	Bing Yu	BY-103	Purchase on Jingdong
Shock incubator	Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd.	2020000014
Sucrose	GENVIEW	CS326-500G
Super Green nucleic acid dye	Biosharp	BS355A
Super-clean table	Heal Force	AC130052
TSB	Hope Bio	HB4114
Vacuum pump	Zhejiang Taizhou Seeking Precision Vacuum Pump Co., Ltd.	22051031
Yeast extract	Thermo Scientific	LP0021B