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In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Um novo método de injeção intraperitoneal (IP) em peixe-zebra adulto é descrito. Ao manusear compostos tóxicos como a doxorrubicina, esse procedimento é mais eficaz do que os dois métodos de IP relatados anteriormente. A técnica foi projetada para ser facilmente adotada por pesquisadores com experiência limitada no modelo de peixe-zebra.

Abstract

O peixe-zebra adulto (Danio rerio), que é geneticamente acessível, está sendo empregado como um valioso modelo de vertebrado para estudar doenças humanas, como a cardiomiopatia. A injeção intraperitoneal (IP) é um método importante que fornece compostos ao corpo para testar efeitos terapêuticos ou gerar modelos de doenças, como a cardiomiopatia induzida por doxorrubicina (CIVD). Atualmente, existem dois métodos de injeção de IP. Ambos os métodos têm limitações ao lidar com compostos tóxicos como a doxorrubicina, que resultam em efeitos colaterais que se manifestam como danos graves à forma do corpo e morte de peixes. Embora essas deficiências possam ser superadas por um extenso treinamento do investigador, é desejável um novo método de injeção de IP que tenha efeitos colaterais mínimos. Aqui, é relatado um método exclusivo de injeção de IP capaz de lidar com compostos tóxicos. A função cardíaca consistentemente reduzida pode resultar sem incorrer em morte significativa de peixes. A técnica pode ser facilmente dominada por pesquisadores que têm experiência mínima com peixes-zebra adultos.

Introduction

O peixe-zebra (Danio rerio) tem ganhado atenção como modelo experimental para o estudo de doenças humanas, pois esse animal engloba alta homologia gênica e orgânica em relação aos humanos, fertilização externa, facilidade de manipulação genética e transparência corporal até a maturidade precoce, o que facilita uma infinidade de aplicações de imagem1. Ao contrário do processo direto de entrega de medicamentos diretamente na água para embriões e larvas de peixe-zebra, a administração de medicamentos a peixes-zebra adultos apresenta um esforço mais intrincado e desafiador2.

Em peixes adu....

Protocol

Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Mayo Clinic, aderindo aos padrões descritos no 'Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório' (National Academies Press, 2011). Todos os peixes-zebra do estudo pertencem à cepa Wild Indian Karyotype (WIK). Os detalhes dos reagentes e do equipamento usado para o estudo estão listados na Tabela de Materiais.

1. Preparação e armazenamento da solução-m?.......

Representative Results

Anteriormente, dois métodos intraperitoneais (IP) foram empregados para a administração de doxorrubicina em peixes-zebra adultos 4,10. No método I, também conhecido como método clássico de injeção IP, conforme descrito por Kinkel et al.4, a agulha foi inserida em um ângulo de 45° em relação à linha média entre as nadadeiras pélvicas com o abdome voltado para cima. No método II, ou no método de injeção IP alternativo des.......

Discussion

Diferente dos dois métodos de injeção de IP existentes 4,10, o novo método de injeção de IP é caracterizado pelas seguintes características distintas. Em primeiro lugar, é usado um ângulo de penetração da agulha exclusivo (próximo a zero); em segundo lugar, a agulha penetra no peixe através de um local único, ou seja, um orifício natural na superfície ventral de um peixe, o que facilitaria a injeção; e, finalmente, o movimento da agulh.......

Acknowledgements

Este estudo foi apoiado pelo NIH (HL107304 e HL081753) e pela Fundação Mayo (Centro de Descoberta Biomédica e Centro de Pesquisa Cardiovascular) para X.X. J.L. é financiado pelos Fundos de Pesquisa Fundamental para as Universidades Centrais da Universidade Central do Sul, nº 56021702. Agradecimentos especiais a Beninio Gore e Quentin Stevens por gerenciar a instalação de peixe-zebra.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
10 μL NanoFil-syringeWorld Precision Instruments, IncNANOFILinjection tool
34 G needleWorld Precision Instruments, IncNI34BV-2injcetion tool
60 mm Petri dishfisher scientific/fisherbrandFB0875713Aplacing the sponge 
Dissecting microscopeNikonSMZ800Injceting the Dox
Doxorubicin hydrochlorideSigmaD1515-10MGdrug for creating DIC model 
EchocardiographyVISUAL SONICSVevo 3100measuring cardiac function
Foam SpongeJaece IndustriesL800-Dplacing the fish
Hank's balanced salt solution (HBBS)Thermo Fisher14025076Vehicle for Dox
Microcentrifuge southernlabwareMyFuge/C1012collect the Dox solution 
Precision Balance ScaleTorbalAD60Digital scales
TricaineArgentMS-222Anesthetizing fish
TubeEppendorf1.5 mLstorage 
vevo LAB  softwareFUJIFILM VISUAL SONICS 5.6.0quantification of the heart

References

  1. Tavares, B., Lopes, S. S. The importance of Zebrafish in biomedical research. Acta Medica Portuguesa. 26 (5), 583-592 (2013).
  2. Dang, M., Henderson, R. E., Garraway, L. A., Zon, L. I. Long-term drug adm....

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Palavras chave Inje o intraperitonealpeixe zebra adultodano corporal minimizadomortalidade reduzidacardiomiopatia induzida por doxorrubicinamodelo de vertebradoscompostos t xicosfun o card aca

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