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* These authors contributed equally
Um novo método de injeção intraperitoneal (IP) em peixe-zebra adulto é descrito. Ao manusear compostos tóxicos como a doxorrubicina, esse procedimento é mais eficaz do que os dois métodos de IP relatados anteriormente. A técnica foi projetada para ser facilmente adotada por pesquisadores com experiência limitada no modelo de peixe-zebra.
O peixe-zebra adulto (Danio rerio), que é geneticamente acessível, está sendo empregado como um valioso modelo de vertebrado para estudar doenças humanas, como a cardiomiopatia. A injeção intraperitoneal (IP) é um método importante que fornece compostos ao corpo para testar efeitos terapêuticos ou gerar modelos de doenças, como a cardiomiopatia induzida por doxorrubicina (CIVD). Atualmente, existem dois métodos de injeção de IP. Ambos os métodos têm limitações ao lidar com compostos tóxicos como a doxorrubicina, que resultam em efeitos colaterais que se manifestam como danos graves à forma do corpo e morte de peixes. Embora essas deficiências possam ser superadas por um extenso treinamento do investigador, é desejável um novo método de injeção de IP que tenha efeitos colaterais mínimos. Aqui, é relatado um método exclusivo de injeção de IP capaz de lidar com compostos tóxicos. A função cardíaca consistentemente reduzida pode resultar sem incorrer em morte significativa de peixes. A técnica pode ser facilmente dominada por pesquisadores que têm experiência mínima com peixes-zebra adultos.
O peixe-zebra (Danio rerio) tem ganhado atenção como modelo experimental para o estudo de doenças humanas, pois esse animal engloba alta homologia gênica e orgânica em relação aos humanos, fertilização externa, facilidade de manipulação genética e transparência corporal até a maturidade precoce, o que facilita uma infinidade de aplicações de imagem1. Ao contrário do processo direto de entrega de medicamentos diretamente na água para embriões e larvas de peixe-zebra, a administração de medicamentos a peixes-zebra adultos apresenta um esforço mais intrincado e desafiador2.
Em peixes adu....
Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Mayo Clinic, aderindo aos padrões descritos no 'Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório' (National Academies Press, 2011). Todos os peixes-zebra do estudo pertencem à cepa Wild Indian Karyotype (WIK). Os detalhes dos reagentes e do equipamento usado para o estudo estão listados na Tabela de Materiais.
1. Preparação e armazenamento da solução-m?.......
Anteriormente, dois métodos intraperitoneais (IP) foram empregados para a administração de doxorrubicina em peixes-zebra adultos 4,10. No método I, também conhecido como método clássico de injeção IP, conforme descrito por Kinkel et al.4, a agulha foi inserida em um ângulo de 45° em relação à linha média entre as nadadeiras pélvicas com o abdome voltado para cima. No método II, ou no método de injeção IP alternativo des.......
Diferente dos dois métodos de injeção de IP existentes 4,10, o novo método de injeção de IP é caracterizado pelas seguintes características distintas. Em primeiro lugar, é usado um ângulo de penetração da agulha exclusivo (próximo a zero); em segundo lugar, a agulha penetra no peixe através de um local único, ou seja, um orifício natural na superfície ventral de um peixe, o que facilitaria a injeção; e, finalmente, o movimento da agulh.......
Nenhum.
Este estudo foi apoiado pelo NIH (HL107304 e HL081753) e pela Fundação Mayo (Centro de Descoberta Biomédica e Centro de Pesquisa Cardiovascular) para X.X. J.L. é financiado pelos Fundos de Pesquisa Fundamental para as Universidades Centrais da Universidade Central do Sul, nº 56021702. Agradecimentos especiais a Beninio Gore e Quentin Stevens por gerenciar a instalação de peixe-zebra.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10 μL NanoFil-syringe | World Precision Instruments, Inc | NANOFIL | injection tool |
34 G needle | World Precision Instruments, Inc | NI34BV-2 | injcetion tool |
60 mm Petri dish | fisher scientific/fisherbrand | FB0875713A | placing the sponge |
Dissecting microscope | Nikon | SMZ800 | Injceting the Dox |
Doxorubicin hydrochloride | Sigma | D1515-10MG | drug for creating DIC model |
Echocardiography | VISUAL SONICS | Vevo 3100 | measuring cardiac function |
Foam Sponge | Jaece Industries | L800-D | placing the fish |
Hank's balanced salt solution (HBBS) | Thermo Fisher | 14025076 | Vehicle for Dox |
Microcentrifuge | southernlabware | MyFuge/C1012 | collect the Dox solution |
Precision Balance Scale | Torbal | AD60 | Digital scales |
Tricaine | Argent | MS-222 | Anesthetizing fish |
Tube | Eppendorf | 1.5 mL | storage |
vevo LAB software | FUJIFILM VISUAL SONICS | 5.6.0 | quantification of the heart |
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