Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Децеллюляризованный матрикс селезенки (DSM) имеет многообещающее применение в области тканевой инженерии печени. В этом протоколе описана процедура подготовки DSM крысы, которая включает в себя сбор селезенки крысы, децеллюляризацию их с помощью перфузии и оценку полученного DSM для подтверждения его характеристик.

Abstract

Трансплантация печени является основным методом лечения терминальной стадии заболевания печени. Однако нехватка и недостаточное качество донорских органов обусловливают необходимость разработки альтернативных методов лечения. Биоискусственная печень (БАЛ), использующая децеллюляризованный матрикс печени (DLM), стала многообещающим решением. Однако поиск подходящих DLM остается сложной задачей. Использование децеллюляризованной матрицы селезенки (DSM) было изучено в качестве основы для БАЛ, предлагая легкодоступную альтернативу. В этом исследовании селезенка крыс была собрана и децеллюляризирована с использованием комбинации циклов замораживания-оттаивания и перфузии с реагентами децеллюляризации. Протокол сохранил микроструктуры и компоненты внеклеточного матрикса (ECM) в DSM. Полный процесс децеллюляризации занял около 11 часов, в результате чего в DSM образовалась неповрежденная ВКМ. Гистологический анализ подтвердил удаление клеточных компонентов при сохранении структуры и состава ВКМ. Представленный протокол обеспечивает комплексный метод получения DSM, предлагая потенциальные приложения в тканевой инженерии печени и клеточной терапии. Эти результаты способствуют разработке альтернативных подходов к лечению терминальной стадии заболевания печени.

Introduction

Трансплантация печени остается единственным окончательным методом лечения терминальной стадии заболевания печени 1,2,3. Однако критическая нехватка и снижение качества донорских органов повысили потребность в альтернативных методах лечения4. В области регенеративной медицины биоискусственная печень (БАЛ) с использованием децеллюляризованного матрикса печени (ДЛМ) стала многообещающим решением 5,6,7. DLM сохраняет исходную структуру печени, включая ее сложную м....

Protocol

Это исследование было одобрено Комитетом по этике экспериментов на животных Сианьского университета Цзяотун и проведено в соответствии с руководящими принципами по уходу за лабораторными животными и их использованию.

1. Забор селезенки

  1. Используют самцов.......

Representative Results

В этом протоколе использовалась комбинация повторяющихся циклов замораживания-оттаивания и перфузии с децеллюляризирующими реагентами для децеллюляризации селезенки крыс. Полная децеллюляризация селезенки была достигнута примерно через 11 ч (рис. 2A). На протяжении вс.......

Discussion

БАЛ представляют собой эффективный подход к лечению терминальной стадии заболевания печени, особенно в тех случаях, когда трансплантация печени затруднена из-за текущей нехватки донорских органов6. Многообещающим вариантом создания БАЛ является использование ДЛМ, котор?.......

Acknowledgements

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (82000624), Программой фундаментальных исследований в области естественных наук провинции Шэньси (2022JQ-899 и 2021JM-268), Программой поддержки инновационного потенциала провинции Шэньси (2023KJXX-030), Совместным проектом Университета ключевых исследований и разработок провинции Шэньси (2021GXLH-Z-047), Институциональным фондом Первой аффилированной больницы Сианьского университета Цзяотун (2021HL-42 & 2021HL-21).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Anesthesia MachineHarvard Apparatustabletopanimal anesthesia
bubble trapShandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.pore diameter: 5 μmprevent air bubbles
BuprenorphineTIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltdan analgesic
Hemostatic ForcepsShanghai Medical Instruments  Co., LtdJ31020surgical tool
Heparinized SalineSPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD prevent the formation of thrombosis 
IsofluraneRWD life Science Co.anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia
Penicillin-Streptomycin Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0222antibiotics in vitro to prevent microbial contamination
Peristaltic PumpBaoding Longer Precision Pump Co., Ltd.BT100-1L
Phosphate-Buffered SalineShanghai Titan Scientific Co., Ltd.4481228phosphoric acid buffer salt solution
Silicone TubeBaoding Longer Precision Pump Co., Ltd.2.4×0.8mm
Silk SutureYangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory6-0 and 3-0ligate blood vessels
Sodium Dodecyl SulfateShanghai Titan Scientific Co., Ltd.151-21-3ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes
Syringe PumpShenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., LtdBeneFusion SP5intravenous infusion
Triton X-100Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.9002-93-1non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions
Venous CatheterB. Braun Company24Ginserting the spleen artery

References

  1. Xu, X. State of the art and perspectives in liver transplantation. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 22 (1), 1-3 (2023).
  2. Hautz, T., et al. Immune cell dynamics deconvoluted by single-ce....

Explore More Articles

JoVE204

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved