Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Значение миниатюрных колоний в лекарственной устойчивости Candida spp. до конца не изучено. Антимикробная фотодинамическая терапия (аФДТ) предлагает многообещающую стратегию против лекарственно-устойчивых грибковых инфекций. Это исследование демонстрирует, что аФДТ, опосредованная бенгальской розой, эффективно деактивирует Candida glabrata и индуцирует миниатюрные колонии, представляя собой уникальную процедуру.

Abstract

Сталкиваясь с 40% смертностью у пациентов с кандидемией, лекарственно-устойчивые Candida и их миниатюрные мутанты остаются серьезной проблемой лечения. Антимикробная фотодинамическая терапия (аФДТ) нацелена на несколько грибковых структур, в отличие от антибиотиков/противогрибковых препаратов, потенциально препятствуя резистентности. Традиционные методы индуцирования миниатюрных колоний основаны на бромиде этидия или флуконазоле, которые могут влиять на чувствительность к лекарствам и реакцию на стресс. В этом исследовании изучалось применение зеленого света (пик 520 нм) и фотосенсибилизатора розовой бенгалии (RB) для борьбы с лекарственно-устойчивым изолятом Candida glabrata . Результаты показали, что лечение аФДТ значительно ингибировало рост клеток (снижение на ≥99,9%) и эффективно индуцировало образование миниатюрных колоний, о чем свидетельствует уменьшение размера и потеря окрашивания митохондриальных окислительно-восстановительных индикаторов. Это исследование предоставляет первоначальные доказательства того, что аФДТ может индуцировать миниатюрные колонии в штамме C. glabrata с множественной лекарственной устойчивостью in vitro, предлагая потенциально трансформационный подход к борьбе с устойчивыми грибковыми инфекциями.

Introduction

Грибковые инфекции, особенно вызванные Candida albicans и все более устойчивой к лекарствам Candida glabrata, представляют серьезную глобальную угрозу1. Эти инфекции могут быть смертельными, особенно для госпитализированных пациентов и людей с ослабленной иммунной системой. Растущая устойчивость к противогрибковым препаратам угрожает борьбе с инвазивным кандидозом, тяжелой грибковой инфекцией с высокой смертностью, особенно от Candida albicans2. Резистентные штаммы препятствуют эффективному лечению, потенциально увеличивая как сложность, так и смертность. В округе Аламеда, штат Калифорния, США,....

Protocol

1. Культивирование C. glabrata

Примечание: Для экспериментов используется C. glabrata с множественной лекарственной устойчивостью (C2-1000907), устойчивый к большинству противогрибковых агентов, включая флуконазол. Экспериментальные условия, возможно, придется адап?.......

Representative Results

Данные представлены в виде среднего значения со стандартной погрешностью ± и были получены из трех независимых экспериментов, по крайней мере, с тройками в каждой группе. Экспериментальные данные, включая количество колоний, измерения OD600 и результаты окрашивания TTC, были построе.......

Discussion

Это исследование раскрывает ФДТ как первый зарегистрированный метод индуцирования образования миниатюрных колоний у Candida, превосходящий установленные эффекты бромида этидия и флуконазола. Это новое наблюдение требует дальнейших исследований, чтобы разгадать его последствия как для.......

Acknowledgements

Эта работа получила финансирование от Министерства науки и технологий Тайваня [MOST 110-2314-B-006-086-MY3], Национального университета Ченг Кун [K111-B094], [K111-B095], Национальной больницы Университета Чэн Кун, Тайвань [NCKUH-11204031], [NCKUMCS2022057].

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 μm filterMerck, Taipei, TaiwanMillex, SLGVR33RS
1.5 mL microfuge tubeNeptune, San Diego, USA#3745
20% Triphenyltetrazolium chloride (TTC)Sigma-Aldrich, MO, USAT8877
5 mL polypropylene round bottom tubeCorning, AZ, USA352059
5 mL round-bottom tube with cell strainer capCorning, AZ, USAFalcon, #352235
96-well plateAlpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan#16196
AgarBRS, Tainan, TaiwanAG012
Blank diskAdvantec, Tokyo, Japan49005040
CentrifugeEppendorf, UK5415R
Ethidium bromide solutionSigma-Aldrich, MO, USAE1510
Fluconazole, 2 mg/mLPfizer, NY, USABC18790248
GraphPad PrismGraphPad SoftwareVersion 7.0
Green light emitting diode (LED) stripNanyi electronics Co.,Ltd, Tainan, Taiwan5050Excitation wave: 500~550 nm
Low Temperature. shake IncubatorsYihder, Taipei, TaiwanLM-570D (R)
Mouth care cotton swabsGood Verita Enterprise, Taipei, Taiwan161357
Muller Hinton II agarBD biosciences, California, USA211438
Multimode microplate readerMolecular DevicesSpectraMax i3x
OD600 spectrophotometerBiochrom, London, UKUltrospec 10
Rose BengalSigma-Aldrich, USA330000stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tubeSunmei, Tainan, TaiwanAK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose MediumHIMEDIA, IndiaM1363

References

  1. Soriano, A., et al. Invasive candidiasis: current clinical challenges and unmet needs in adult populations. J Antimicrob Chemother. 78 (7), 1569-1585 (2023).
  2. Pappas, P. G., Lionakis, M. S., Arendrup, M. C., Ostrosky-Zeichner, L., Kullberg, B. J.

Explore More Articles

JoVE205

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved