A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
הפרוטוקול מציג שתי מתודולוגיות לשיפור הבידוד של חיידקי מעיים אנאירוביים. הראשון מתמקד בבידוד של מגוון רחב של חיידקים באמצעות אמצעי תרבית שונים. השני מתמקד בשלבי הטיפוח של קבוצת חיידקים מסוימת, אולי הטמעת מיו-אינוסיטול, כדי להבין באופן מלא את משמעותה האקולוגית.
מערכת העיכול של עוף (GIT) היא מערכת אקולוגית מורכבת המכילה טריליוני מיקרובים הממלאים תפקיד מרכזי בפיזיולוגיה של הפונדקאי, בעיכול, בספיגת חומרים מזינים, בהבשלת מערכת החיסון ובמניעת חדירת פתוגנים. עבור בריאות אופטימלית של בעלי חיים ופרודוקטיביות, זה הכרחי לאפיין מיקרואורגניזמים אלה ולהבין את תפקידם. בעוד GIT של עופות מחזיק מאגר של מיקרואורגניזמים עם יישומים פרוביוטיים פוטנציאליים, רוב המגוון עדיין לא נחקר. כדי לשפר את הבנתנו את מגוון המיקרואורגניזמים הבלתי מתורבתים, נדרשים מאמצים מרוכזים להביא את המיקרואורגניזמים האלה לתרבית. בידוד וטיפוח של מיקרואורגניזמים המתיישבים ב-GIT מניבים חומרים הניתנים לשחזור, כולל תאים, דנ"א ומטבוליטים, ומציעים תובנות חדשות על תהליכים מטבוליים בסביבה. ללא טיפוח, תפקידם של אורגניזמים אלה בסביבתם הטבעית נותר לא ברור ומוגבל לרמה תיאורית. מטרתנו היא ליישם אסטרטגיות גידול שמטרתן לשפר את הבידוד של מגוון רחב של חיידקים אנאירוביים מה-GIT של התרנגולת, תוך מינוף ידע רב-תחומי מפיזיולוגיה של בעלי חיים, תזונת בעלי חיים, מטגנומיקה, ביוכימיה של מזון ואסטרטגיות גידול מודרניות. בנוסף, אנו שואפים ליישם שימוש בשיטות עבודה נכונות לדגימה, שינוע והכנה תקשורתית, הידועות כמשפיעות על הצלחת הבידוד. מתודולוגיות מתאימות צריכות להבטיח סביבה עקבית נטולת חמצן, תנאים אטמוספריים אופטימליים, טמפרטורת דגירה מתאימה של המאכסן ומתן דרישות תזונתיות ספציפיות בהתאם לצרכים הייחודיים שלהם. על ידי ביצוע מתודולוגיות אלה, גידול לא רק יניב תוצאות ניתנות לשחזור עבור בידוד, אלא גם יקל על הליכי בידוד, ובכך לטפח הבנה מקיפה של המערכת האקולוגית המיקרוביאלית המורכבת בתוך GIT של תרנגולת.
תחיית הטיפוח בחקר מיקרואורגניזמים השלימה תובנות ממחקרים מטאגנומיים בכך שסיפקה חומר לבדיקת השערות מטבוליות שתוארו וכומתו בעבר רק באופן חלקי. גידול חיידקי מעיים מספק חומר כדי לקיים מחקר עתידי על אינטראקציות מיקרוביאליות-מארחות, להקל על מחקרי קולוניזציה ממוקדים, ולשפר את מחקרי האינטראקציה המולקולרית 1,2,3. הידע שנצבר על מיקרואורגניזמים במערכת העיכול שיפר את התזונה והרווחה של בעלי החיים על ידי השפעה על נוסחאות תזונה ושיפור זמינות החומרים המזינים4. הבנה זו תרמה לשיפור הביצועים בשימוש באינטראקציה פרה-ביוטית ופרוביוטית. עם זא....
הפרוטוקול מחולק לארבעה חלקים: דגימה, בידוד חיידקים, זיהוי ושימור המיקרואורגניזמים המתקבלים. הרשאות מאושרות לשימוש בבעלי חיים הונפקו על ידי הוועדה האתית של Regierungspräsidium Tübingen, גרמניה עם מספרי האישור HOH50/17 TE ו- HOH67-21TE.
1. קבלת דגימות לטיפוח חיידקים אנאירוביי?.......
ניטור תנאים אנאירוביים במהלך התחבורה
בשל תוספת של resazurin, השינוי בצבע של פתרון הובלה לוורוד לפני העברת הדגימה לתוך הצינור מצביע על הפרעה או כישלון בשמירה על תנאים אנאירוביים. לפיכך, הצינור שהראה שינוי צבע נמנע משימוש במהלך ההובלה ורק הצינורות שלא הראו שינוי צב?.......
מטרת מתודולוגיה זו היא לשפר את הגידול של חיידקי מעיים אנאירוביים על ידי שיפור איכות תנאי הדגימה, עיבוד הדגימות, ניסוח מדיה והכנה. יש לקחת בחשבון את התנאים הפיזיקוכימיים של הדגימות (pH, זמינות פחמן, חנקן וקו-פקטורים) בעת גיבוש אמצעי התרבית. בהשוואה לאוספי תרביות חיידקים שהת.......
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים או אישיים מתחרים הקשורים לעבודה המדווחת בתסריט זה.
המחברים מודים לתוכנית השותפות רחובות-הוהנהיים ול-Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) SE 2059/7-2. פרויקט זה פותח במסגרת יחידת המחקר P-FOWL (עבור 2601).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acetic acid | VWR | 20104.334 | |
Agar | VWR | 97064-332 | |
Ammonium chloride | Carl Roth | P726.1 | |
Anaerobic station | Don Whitley Scientific | A35 HEPA | |
Butyric acid | Merck | 8.0045.1000 | |
Calcium chloride dihydrate | VWR | 97061-904 | |
Centrifuge | Eppendorf | 5424R | |
Chicken lysozyme (Muramidase) | VWR | 1.05281.0010 | |
Cysteine | VWR | 97061-204 | |
Dextrose | VWR | 90000-908 | |
Di-potassium hydrogen phosphate | Carl Roth | P749.1 | |
EDTA | Carl Roth | 8043.2 | |
Legehennen/ Junghennenfutter | Deutsche Tiernahrung Cremer GmbH & Co. KG, Düsseldorf, Germany | - | |
MagAttract HMW DNA Kit | Qiagen | 67563 | |
Magnesium chloride | Carl Roth | 2189.1 | |
Mixed gas (80% N2 (quality level 5.0), 15% CO2 (quality level 3.0) and 5% H2 (quality level 5.0)) | Westfalen Gase GmbH, Germany | - | |
Mutanolysin, recombinant (lyophilisate) | A&A Biotechnology | 1017-10L | |
Myo-inositol | Carl Roth | 4191.2 | |
PBS 1X | ChemSolute | 8418.01 | |
Potassium dihydrogen phosphate | Carl Roth | 3904.2 | |
Propionic acid | Carl Roth | 6026.1 | |
QuantiFluor dsDNA System | Promega | E2671 | |
RNAse A | QIAGEN Ribonuclease A (RNase A) | 19101 | |
Sodium chloride | VWR | 27800.291 | |
Sodium resazurin | VWR | 85019-296 | |
Sodium thioglycolate | Sigma-Aldrich | 102933 | |
Soy Peptone, GMO-Free, Animal-Free | VWR | 97064-186 | |
Thermocycler | Bio-Rad | T100 | |
Tryptone | Carl Roth | 8952.1 | |
Tween80 | Carl Roth | 9139.2 | |
Vitamin mix (supplement) | VWR | 968290NL | |
Vortex | Star Lab | 07127/92930 | |
Yeast Extract | Carl Roth | 9257.05 | |
β-D-Fructose | VWR | 53188-23-1 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved