Longa 大脑中动脉闭塞方法的优化

Summary

该协议为研究人员提供了使用改良的 Longa 颈外动脉方法对小鼠进行大脑中动脉闭塞手术的分步指南。本文中介绍的改良旨在提高大脑中动脉闭塞的准确性并确保完全再灌注。

Abstract

大脑中动脉闭塞模型是研究缺血性中风的主要动物模型。尽管在研究中使用了三十多年，但其标准化仍然不足。该程序主要在大鼠和小鼠身上进行，由于小鼠的体积更小、更脆弱，因此带来了挑战。与 Koizumi 颈总动脉方法不同，Longa 颈外动脉是唯一确保缺血后完全再灌注的腔内细丝卒中模型。这方面对于研究再灌注现象具有至关重要的意义。本文中演示的手术修改可确保在整个缺血期和再灌注开始后从颈总动脉连续流血。这些修改的目标是在缺血期间，通过在大脑中动脉近端的分支中保持灌注不间断，选择性地闭塞大脑中动脉。此外，再灌注的发生是突然的，可以精确控制，从而更准确地模拟人类医学中的血管内血栓切除术。我们展示这篇全面的视频文章的目的是简化新外科医生的培训，并促进科学界外科手术的标准化。

Introduction

中风是第二大死亡原因，也是导致死亡和残疾的第三大原因¹。就其原因而言，中风可以是缺血性或出血性，缺血性中风在临床实践中明显更为普遍。缺血性中风是由于向脑组织供血的动脉阻塞引起的，导致缺血、细胞死亡和炎症。自溶栓和机械血栓切除术等再灌注疗法问世以来，中风的治疗取得了长足的进步。然而，所有再灌注疗法都存在导致通常所说的再灌注损伤而加剧患者病情的风险²。再灌注损伤的确切机制尚不清楚，需要进行临床前研究来确定潜在原因和预防措施。为此，为缺血性卒中后的再灌注损伤开发一个相关的动物模型变得至关重要。

大脑中动脉闭塞 （MCAO） 是研究缺血性卒中最常用的动物模型。它主要在啮齿动物中进行，到目前为止，科学文献中描述了许多不同的变体 ^3,4。两种主要类型，小泉和 Longa，被称为颈总动脉 （CCA） 和颈外动脉 （ECA） 变体，在技术上区别在于细丝插入的动脉切开部位 ^5,6。在我们最近的文章中，通过血管灌注的体内监测，我们表明只有 Longa 方法可以真正被视为脑缺血/再灌注模....

Protocol

所有动物处理和程序均已获得萨格勒布大学医学院伦理许可委员会和克罗地亚共和国农业部用于科学目的的动物保护伦理委员会的批准。根据克罗地亚动物保护法 （NN 102/17， 32/19）、动物保护法修正案 （NN 37/13） 和用于科学目的的动物保护指南 （NN 55/13） 进行实验程序，这些指南符合欧洲实验动物护理和使用指南（指令 2010/63/EU）。

1. 动物和?.......

Discussion

MCAO 对操作者来说是一个要求很高的程序，对动物来说是一个使人衰弱的程序。出于这个原因，研究人员拥有一个标准操作程序至关重要，该程序可以最大限度地减少中风的严重程度，减少手术失败，并改善动物术后的健康状况。该 MCAO 协议强调了在鼠标上执行此过程时需要考虑的一些关键方面。

MCAO 细丝的选择会影响诱发的中风病变的大小和位置?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Betadine cutaneous solution 10g/100ml	Alkaloid Skopje	N/A
Braided silk suture	Fine Science Tools	18020-60
Dafilon suture 5/0 DS16	B. Braun	C0936154
Dolokain 20 mg/g gel	Jadran-Galenski Laboratorij	N/A
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11251-20	2 pieces
Dumont #7 forceps	Fine Science Tools	11271-30
Dumont N0 self-closing forceps	Fine Science Tools	11480-11
Durapore Surgical Tape 1,25cm x 9,1m	3M	7100057169
Durapore Surgical Tape 2,5cm x 9,1m	3M	7100057168
External thermostat	Petnap	1012536
Halsey needle holders	Fine Science Tools	12500-12
Hot bead sterilizer	Fine Science Tools	18000-50
Iris scissors	Fine Science Tools	14060-10
Isoflurane USP	Piramal critical care	N/A
Laser Doppler Monitor	Moor	MOORVMS-LDF2
Metal Pet Heat Pad	Petnap	1012525
Micro Vannas spring scissors	Fine Science Tools	15000-00
Mini-colibri retractor	Fine Science Tools	17000-01
Recugel eye ointment	Bausch&Lomb	N/A
S&T B-1 vessel micro clamp	Fine Science Tools	00396-01	2 pieces
S&T micro clamp applying forceps	Fine Science Tools	00071-14
Schwartz micro serrefines	Fine Science Tools	18052-01
Stemi DV4 Spot stereo microscope	Zeiss	000000-1018-453
Steri-Strip Reinforced Adhesive Skin Closures 3 mm x 75 mm	3M	7100236545
Straight tissue forceps	Fine Science Tools	11023-10
SZX Stand Arm	Olympus	SZ2-STS
Tec III 300 series calibrated vaporizer	Vaporizer Sales and Service inc.	N/A
Universal Stand Type 2	Olympus	SZ2-STU2
VetFlo Six Channel Anesthesia Stand	Kent Scientific	VetFlo-1225	Modified for O2/N2 mixing