Моделирование in vitro отложения жира при стеатозном заболевании печени, ассоциированном с метаболической дисфункцией

Резюме

В данной статье описывается использование клеток HepG2, индуцированных олеиновой кислотой, в качестве модели стеатотического заболевания печени, связанного с метаболической дисфункцией.

Аннотация

Распространенность стеатотической болезни печени, связанной с метаболической дисфункцией (MASLD), резко возросла из-за изменений в экономических моделях и образе жизни, что привело к серьезным проблемам со здоровьем. В предыдущих отчетах изучалось создание животных и клеточных моделей для MASLD, подчеркивая различия между ними. В этом исследовании клеточная модель была создана путем индуцирования накопления жира в MASLD. Клетки HepG2 стимулировали ненасыщенной жирной кислотой олеиновой кислотой в различных концентрациях (0,125 мМ, 0,25 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ) для эмуляции MASLD. Эффективность модели оценивали с помощью анализа набора для подсчета клеток-8, окрашивания Oil Red O и анализа содержания липидов. Это исследование было направлено на создание простой в эксплуатации клеточной модели для клеток MASLD. Результаты анализа набора для подсчета клеток-8 показали, что выживаемость клеток HepG2 зависела от концентрации олеиновой кислоты с ГИ₅₀ 1,875 мМ. Жизнеспособность клеток в группах 0,5 мМ и 1 мМ была достоверно ниже, чем в контрольной группе (P < 0,05). Кроме того, с помощью окрашивания Oil Red O и анализа содержания липидов изучалось отложение жира при различных концентрациях олеиновой кислоты (0,125 мМ, 0,25 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ) на клетках HepG2. Содержание липидов в группах 0,25 мМ, 0,5 мМ и 1 мМ было достоверно выше, чем в контрольной группе (P < 0,05). Кроме того, уровни триглицеридов в группах ОА были значительно выше, чем в контрольной группе (P < 0,05).

Введение

Стеатозное заболевание печени, ассоциированное с метаболической дисфункцией (MASLD), включает в себя целый ряд состояний, включая простой стеатоз, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному ^1,2,3,4,5,6, все они связаны с факторами, отличными от употребления алкоголя⁷. MASLD является наиболее распространенным заболеванием печени, вызванным метаболическим повреждением печени, поражающим почти четверть населения мир....

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Подробную информацию обо всех материалах, инструментах и реагентах, используемых в данном протоколе, см. в Таблице материалов .

1. Культура клеток

1. Культивирование клеток HepG2 в колбах для культивирования, содержащих модифицированную среду Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (содержащую 10% фетальной бычьей сыворотки [FBS], 100 единиц/мл пенициллина и 100 μг/мл стрептомицина). Поддерживайте температуру колб с культуральными культурами при температуре 37 °C в инкубаторе с 5% содержанием_CO2 .

2. Влияние олеиновой кислоты на жизнеспос....

Результаты

Влияние олеиновой кислоты на жизнеспособность клеток
Клетки HepG2 подвергались воздействию различных концентраций ОА (0 мМ, 0,125 мМ, 0,25 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ), что приводило к снижению выживаемости клеток при 0,125 мМ, 0,25 мМ, 0,5 мМ и 1 мМ по сравнению с 0 мМ. Статистическая значимость наблюдалас?.......

Обсуждение

MASLD является клинико-патологическим синдромом, характеризующимся чрезмерным внутриклеточным отложением жира в гепатоцитах из-за факторов, выходящих за рамки алкоголя и других установленных агентов, повреждающих печень¹⁸. MASLD неразрывно связан с приобретенным метаболичес.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm filter	Millex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTA	Gibco	25200-056
0.45 µm filter	Millex
2 mL Crygenic Vials	CORNING	430659
25 cm2 Cell Culture Flask	CORNING	430639
6-well cell culture plate	CORNING	3516
96-well cell culture plate	CORNING	3599
Blood Count Plate	Shanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.	02270113
Cell Counting Kit-8 assays	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	CA1210-1000T
CO2 incubator	NUAIRE	NU-5710E
DMSO Dimethyl sulfoxide	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	D8371
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	8122691
Enzyme Labeling Equipment	Tecan	Spark
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	10099141
HepG2 cells line	Beijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)	221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instruction	Nanjing Jiacheng Bioengineering Institute	20170301
Inverted Microscope for Cell Culture	Leica	DMi1
Isopropanol	Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.	2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured Cells	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	G1262
Oleic acid	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A502071
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
SPSS 24.0		Statistics software