Identificatie van zeldzame antigeenspecifieke T-cellen uit muizenlongen met peptide: belangrijke histocompatibiliteitscomplextetrameren

De identificatie en karakterisering van antigeenspecifieke T-cellen tijdens gezondheid en ziekte blijft een sleutel tot het verbeteren van ons begrip van immuunpathofysiologie. De technische uitdagingen van het volgen van antigeenspecifieke T-celpopulaties binnen het endogene T-celrepertoire zijn enorm verbeterd door de ontwikkeling van peptide:MHC-tetrameerreagentia. Deze fluorescerend gelabelde oplosbare multimeren van MHC klasse I- of klasse II-moleculen gecomplexeerd tot antigene peptide-epitopen binden rechtstreeks aan T-cellen met overeenkomstige T-celreceptor (TCR) specificiteit en kunnen daarom antigeenspecifieke T-celpopulaties in hun oorspronkelijke staat identificeren zonder dat een functionele respons vereist is die wordt geïnduceerd door ex vivo stimulatie. Voor uiterst zeldzame populaties kunnen tetrameergebonden T-cellen magnetisch worden verrijkt om de gevoeligheid en betrouwbaarheid van de detectie te vergroten.

Naarmate het onderzoek naar de immuniteit van weefselresidente T-cellen zich verdiept, is er een dringende behoefte om antigeenspecifieke T-cellen te identificeren die naar niet-lymfoïde weefsels reizen en zich daarin bevinden. In dit protocol presenteren we een gedetailleerde reeks instructies voor de isolatie en karakterisering van antigeenspecifieke T-cellen die aanwezig zijn in de longen van muizen. Dit omvat de isolatie van T-cellen uit verteerd longweefsel, gevolgd door een algemene magnetische verrijkingsstap van T-cellen en tetrameerkleuring voor flowcytometrie, analyse en sortering. De stappen die in dit protocol worden benadrukt, maken gebruik van gangbare technieken en gemakkelijk verkrijgbare reagentia, waardoor het toegankelijk is voor bijna elke onderzoeker die zich bezighoudt met immunologie van T-cellen van muizen, en zijn zeer aanpasbaar voor een verscheidenheid aan stroomafwaartse analyses van elke laagfrequente antigeenspecifieke T-celpopulatie die zich in de longen bevindt.