Identifiering av sällsynta antigenspecifika T-celler från muslungor med peptid: Tetramerer av histokompatibilitetskomplex

Identifiering och karakterisering av antigenspecifika T-celler under hälsa och sjukdom är fortfarande en nyckel till att förbättra vår förståelse av immunpatofysiologi. De tekniska utmaningarna med att spåra antigenspecifika T-cellspopulationer inom den endogena T-cellsrepertoaren har utvecklats kraftigt genom utvecklingen av peptid:MHC-tetramerreagenser. Dessa fluorescerande märkta lösliga multimerer av MHC klass I eller klass II-molekyler komplexerade till antigena peptidepitoper binder direkt till T-celler med motsvarande T-cellsreceptorspecificitet (TCR) och kan därför identifiera antigenspecifika T-cellspopulationer i deras ursprungliga tillstånd utan krav på ett funktionellt svar inducerat av ex vivo stimulering. För ytterst sällsynta populationer kan tetramerbundna T-celler anrikas magnetiskt för att öka känsligheten och tillförlitligheten i detektionen.

I takt med att undersökningen av vävnadsresidenta T-cellsimmunitet fördjupas, finns det ett akut behov av att identifiera antigenspecifika T-celler som trafikerar till och finns i icke-lymfoida vävnader. I detta protokoll presenterar vi en detaljerad uppsättning instruktioner för isolering och karakterisering av antigenspecifika T-celler som finns i muslungor. Detta innebär isolering av T-celler från smält lungvävnad följt av ett allmänt T-cellsmagnetiskt anrikningssteg och tetramerfärgning för analys och sortering av flödescytometri. Stegen som beskrivs i detta protokoll använder vanliga tekniker och lättillgängliga reagenser, vilket gör det tillgängligt för nästan alla forskare som är engagerade i mus-T-cellsimmunologi, och är mycket anpassningsbara för en mängd olika nedströmsanalyser av alla lågfrekventa antigenspecifika T-cellspopulationer som finns i lungorna.