Fare Akciğerlerinden Nadir Antijene Özgü T Hücrelerinin Peptit ile Tanımlanması: Majör Histouyumluluk Kompleksi Tetramerleri

Sağlık ve hastalık sırasında antijene özgü T hücrelerinin tanımlanması ve karakterizasyonu, immün patofizyoloji anlayışımızı geliştirmenin anahtarı olmaya devam etmektedir. Endojen T hücresi repertuarı içinde antijene özgü T hücresi popülasyonlarının izlenmesinin teknik zorlukları, peptit: MHC tetramer reaktiflerinin geliştirilmesiyle büyük ölçüde ilerlemiştir. Antijenik peptit epitoplarına kompleks oluşturan MHC sınıf I veya sınıf II moleküllerin bu floresan olarak etiketlenmiş çözünür multimerleri, karşılık gelen T hücresi reseptörü (TCR) özgüllüğü ile doğrudan T hücrelerine bağlanır ve bu nedenle, ex vivo tarafından indüklenen fonksiyonel bir yanıta gerek kalmadan antijene özgü T hücresi popülasyonlarını doğal durumlarında tanımlayabilir Uyarım. Son derece nadir popülasyonlar için, tetramere bağlı T hücreleri, tespitin hassasiyetini ve güvenilirliğini artırmak için manyetik olarak zenginleştirilebilir.

Dokuda yerleşik T hücresi bağışıklığının araştırılması derinleştikçe, lenfoid olmayan dokulara giden ve bu dokularda bulunan antijene özgü T hücrelerinin tanımlanması için acil bir ihtiyaç vardır. Bu protokolde, fare akciğerlerinde bulunan antijene özgü T hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir talimat seti sunuyoruz. Bu, T hücrelerinin sindirilmiş akciğer dokusundan izole edilmesini, ardından genel bir T hücresi manyetik zenginleştirme adımını ve akış sitometrisi analizi ve sıralaması için tetramer boyamayı içerir. Bu protokolde vurgulanan adımlar, ortak teknikleri ve hazır reaktifleri kullanır, bu da onu fare T hücresi immünolojisi ile uğraşan hemen hemen her araştırmacı için erişilebilir kılar ve akciğerlerde bulunan herhangi bir düşük frekanslı antijene özgü T hücresi popülasyonunun çeşitli aşağı akış analizleri için oldukça uyarlanabilir.