Identifikation af hvilende celler i en zebrafisk T-celle akut lymfoblastisk leukæmimodel ved hjælp af celleproliferationsfarvning

Cellulær hvile er en tilstand af vækststop eller langsommere spredning, der er beskrevet i normale stamceller og kræftstamceller (CSC'er). Hvile kan beskytte CSC'er mod antiproliferativ kemoterapi. I T-celle akut lymfoblastisk leukæmi (T-ALL) patientafledt xenograft (PDX) musemodeller er hvilende celler forbundet med behandlingsresistens og stamme. Celleproliferationsfarvestoffer er populære værktøjer til sporing af celledeling. Det fluorescerende farvestof er kovalent forankret i amingrupper på membranen og makromolekyler inde i cellen. Dette giver mulighed for sporing af mærkede celler i op til 10 divisioner, som kan løses ved flowcytometri.

I sidste ende vil celler med de højeste spredningshastigheder have lav farvestofretention, da den vil blive fortyndet med hver celledeling, mens sovende, langsommere delende celler vil have den højeste retention. Brugen af celleproliferationsfarvestoffer til at isolere sovende celler er blevet optimeret og beskrevet i T-ALL-musemodeller. Som supplement til de eksisterende musemodeller giver rag2:Myc-afledte zebrafisk T-ALL-modellen et glimrende sted at undersøge selvfornyelse i T-ALL på grund af den høje frekvens af leukæmiske stamceller (LSC'er) og zebrafiskens bekvemmelighed til store transplantationseksperimenter.

Her beskriver vi arbejdsgangen for farvning af zebrafisk T-ALL-celler med et celleproliferationsfarvestof, optimering af koncentrationen af farvestoffet til zebrafiskceller, passaging af vellykkede farvede celler in vivo og indsamling af celler med varierende niveauer af farvestofretention ved sortering af levende celler fra transplanterede dyr. I betragtning af fraværet af veletablerede celleoverfladeproducenter til LSC'er i T-ALL, giver denne tilgang et funktionelt middel til at afhøre hvilende celler in vivo. For repræsentative resultater beskriver vi indgravningseffektiviteten og LSC-frekvensen af celler med høj og lav farvetilbageholdelse. Denne metode kan hjælpe med at undersøge yderligere egenskaber ved hvilende celler, herunder lægemiddelrespons, transkriptionsprofiler og morfologi.