זיהוי תאים שקטים במודל לוקמיה לימפובלסטית חריפה של תאי T של דג זברה באמצעות צביעת התפשטות תאים

שקט תאי הוא מצב של עצירת גדילה או התפשטות איטית המתואר בתאי גזע נורמליים וסרטניים (CSC). שקט עשוי להגן על CSCs מפני תרופות כימותרפיות נוגדות שגשוג. במודלים של עכברי מסוג T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) שמקורם בחולה xenograft (PDX), תאים שקטים קשורים לעמידות לטיפול ולגזע. צבעי התפשטות תאים הם כלים פופולריים למעקב אחר חלוקת התא. הצבע הפלואורסצנטי מעוגן באופן קוולנטי לקבוצות אמין על הממברנה ומקרומולקולות בתוך התא. זה מאפשר מעקב אחר תאים מסומנים עבור עד 10 חלוקות, אשר ניתן לפתור על ידי ציטומטריית זרימה.

בסופו של דבר, תאים עם שיעורי ההתרבות הגבוהים ביותר יהיו בעלי שימור צבע נמוך, מכיוון שהוא ידולל עם כל חלוקת תא, בעוד שתאים רדומים המתחלקים לאט יותר יהיו בעלי השימור הגבוה ביותר. השימוש בצבעי התרבות תאים כדי לבודד תאים רדומים עבר אופטימיזציה ותואר במודלים של עכברי T-ALL. מודל T-ALL של דג הזברה שמקורו ב-rag2:Myc, המשלים את דגמי העכברים הקיימים, מספק מקום מצוין לחקור התחדשות עצמית ב-T-ALL בשל התדירות הגבוהה של תאי גזע לוקמיים (LSCs) והנוחות של דגי זברה לניסויי השתלה בקנה מידה גדול.

במאמר זה אנו מתארים את תהליך העבודה לצביעה של תאי T-ALL של דגי זברה באמצעות צבע להתרבות תאים, אופטימיזציה של ריכוז הצבע עבור תאי דגי זברה, העברת תאים מוכתמים בהצלחה in vivo, ואיסוף תאים עם רמות שונות של שימור צבע על ידי מיון תאים חיים מבעלי חיים מושתלים. בהתחשב בהיעדרם של יצרני משטחי תאים מבוססים היטב עבור LSCs ב- T-ALL, גישה זו מספקת אמצעי פונקציונלי לחקור תאים שקטים in vivo. לקבלת תוצאות מייצגות, אנו מתארים את יעילות הקליטה ואת תדר LSC של תאים שומרי צבע גבוהים ונמוכים. שיטה זו יכולה לסייע בחקירת תכונות נוספות של תאים שקטים, כולל תגובה לתרופות, פרופילי שעתוק ומורפולוגיה.