Identificazione di cellule quiescenti in un modello di leucemia linfoblastica acuta a cellule T di pesce zebra mediante colorazione della proliferazione cellulare

La quiescenza cellulare è uno stato di arresto della crescita o di proliferazione rallentata descritto nelle cellule staminali normali e tumorali (CSC). La quiescenza può proteggere le CSC dai farmaci chemioterapici antiproliferativi. Nei modelli murini di xenotrapianto di pazienti derivati da pazienti con leucemia linfoblastica acuta a cellule T (T-ALL), le cellule quiescenti sono associate alla resistenza al trattamento e alla staminalità. I coloranti per la proliferazione cellulare sono strumenti popolari per il monitoraggio della divisione cellulare. Il colorante fluorescente è ancorato in modo covalente in gruppi amminici sulla membrana e sulle macromolecole all'interno della cellula. Ciò consente il tracciamento delle cellule marcate per un massimo di 10 divisioni, che possono essere risolte mediante citometria a flusso.

In definitiva, le cellule con i più alti tassi di proliferazione avranno una bassa ritenzione del colorante, poiché verrà diluito ad ogni divisione cellulare, mentre le cellule dormienti, che si dividono più lentamente, avranno la ritenzione più alta. L'uso di coloranti di proliferazione cellulare per isolare le cellule dormienti è stato ottimizzato e descritto in modelli murini T-ALL. Complementare ai modelli murini esistenti, il modello T-ALL di zebrafish derivato da rag2:Myc offre un'eccellente sede per interrogare l'autorinnovamento nella T-ALL grazie all'alta frequenza di cellule staminali leucemiche (LSC) e alla convenienza del zebrafish per esperimenti di trapianto su larga scala.

Qui, descriviamo il flusso di lavoro per la colorazione delle cellule T-ALL di zebrafish con un colorante di proliferazione cellulare, l'ottimizzazione della concentrazione del colorante per le cellule di zebrafish, il passaggio di cellule colorate con successo in vivo e la raccolta di cellule con vari livelli di ritenzione del colorante mediante selezione di cellule vive da animali trapiantati. Data l'assenza di produttori di superfici cellulari ben consolidati per le LSC nella T-ALL, questo approccio fornisce un mezzo funzionale per interrogare le cellule quiescenti in vivo. Per ottenere risultati rappresentativi, descriviamo l'efficienza di attecchimento e la frequenza LSC delle cellule ad alta e bassa ritenzione del colorante. Questo metodo può aiutare a studiare ulteriori proprietà delle cellule quiescenti, tra cui la risposta ai farmaci, i profili trascrizionali e la morfologia.