Identifikasjon av hvilende celler i en sebrafisk T-celle akutt lymfatisk leukemimodell ved bruk av celleproliferasjonsfarging

Cellulær hvile er en tilstand av vekststans eller redusert spredning som er beskrevet i normale stamceller og kreftstamceller (CSC). Hvile kan beskytte CSC mot antiproliferative kjemoterapimedisiner. I T-celle akutt lymfatisk leukemi (T-ALL) pasientavledet xenograft (PDX) musemodeller, er hvilende celler assosiert med behandlingsresistens og stamme. Celleproliferasjonsfargestoffer er populære verktøy for sporing av celledeling. Det fluorescerende fargestoffet er kovalent forankret i amingrupper på membranen og makromolekyler inne i cellen. Dette gjør det mulig å spore merkede celler i opptil 10 divisjoner, som kan løses ved flowcytometri.

Til syvende og sist vil celler med de høyeste spredningshastighetene ha lav fargestoffretensjon, da den vil bli fortynnet med hver celledeling, mens sovende, langsommere delende celler vil ha den høyeste retensjonen. Bruken av celleproliferasjonsfargestoffer for å isolere sovende celler er optimalisert og beskrevet i T-ALL-musemodeller. Komplementært til de eksisterende musemodellene, gir rag2:Myc-avledede sebrafisk T-ALL-modellen et utmerket sted for å undersøke selvfornyelse i T-ALL på grunn av den høye frekvensen av leukemiske stamceller (LSC) og bekvemmeligheten til sebrafisk for storskala transplantasjonseksperimenter.

Her beskriver vi arbeidsflyten for farging av sebrafisk T-ALL-celler med et celleproliferasjonsfargestoff, optimalisering av konsentrasjonen av fargestoffet for sebrafiskceller, passering av vellykket fargede celler in vivo, og innsamling av celler med varierende nivåer av fargestoffretensjon ved sortering av levende celler fra transplanterte dyr. Gitt fraværet av veletablerte celleoverflateprodusenter for LSC-er i T-ALL, gir denne tilnærmingen et funksjonelt middel til å avhøre hvilende celler in vivo. For representative resultater beskriver vi engraftmenteffektiviteten og LSC-frekvensen til celler med høyt og lavt fargestoff. Denne metoden kan bidra til å undersøke ytterligere egenskaper til hvilende celler, inkludert medikamentrespons, transkripsjonsprofiler og morfologi.