Идентификация покоящихся клеток в модели острого лимфобластного лейкоза Т-клеток данио-рерио с использованием окрашивания пролиферацией клеток

Клеточный покой — это состояние остановки роста или замедления пролиферации, которое описывается в нормальных и раковых стволовых клетках (ОСК). Состояние покоя может защитить ЦСК от антипролиферативных химиотерапевтических препаратов. В мышиных моделях ксенотрансплантата (PDX) с Т-клеточным острым лимфобластным лейкозом (Т-ОЛЛ) покоящиеся клетки связаны с резистентностью к лечению и стволовостью. Красители для пролиферации клеток являются популярными инструментами для отслеживания деления клеток. Флуоресцентный краситель ковалентно закреплен в аминогруппах на мембране и макромолекулах внутри клетки. Это позволяет отслеживать меченые клетки до 10 делений, которые могут быть разрешены с помощью проточной цитометрии.

В конечном счете, клетки с самыми высокими темпами пролиферации будут иметь низкое удержание красителя, так как он будет разбавляться при каждом делении клетки, в то время как спящие, медленно делящиеся клетки будут иметь наибольшее удержание. Использование красителей для пролиферации клеток для выделения спящих клеток было оптимизировано и описано в мышиных моделях T-ALL. В дополнение к существующим моделям мышей, модель T-ALL рыбок данио-рерио rag2:Myc обеспечивает прекрасную площадку для изучения самообновления в T-ALL благодаря высокой частоте лейкемических стволовых клеток (LSC) и удобству рыбок данио для крупномасштабных экспериментов по трансплантации.

В этой статье мы описываем рабочий процесс окрашивания клеток T-ALL рыбок данио с помощью красителя для пролиферации клеток, оптимизацию концентрации красителя для клеток рыбок данио, пассирование успешно окрашенных клеток in vivo и сбор клеток с различными уровнями удержания красителя путем сортировки живых клеток от трансплантированных животных. Учитывая отсутствие хорошо зарекомендовавших себя создателей клеточной поверхности для LSC в T-ОЛЛ, этот подход предоставляет функциональные средства для опроса неактивных клеток in vivo. Для получения репрезентативных результатов мы описываем эффективность приживления и частоту LSC для клеток с высоким и низким уровнем удержания красителя. Этот метод может помочь исследовать дополнительные свойства спокойных клеток, включая реакцию на лекарственные препараты, профили транскрипции и морфологию.