中性コメットアッセイによる分裂中のヒト細胞におけるDNA切断の検出

DNA複製は、DNAを損傷する可能性のあるさまざまな内因性および外因性のストレッサーによって常に挑戦されています。ゲノム重複中に遭遇するこのような病変は、レプリソームを失速させ、複製フォークを二本鎖切断に変換する可能性があります。修復せずに放置すると、これらの有毒なDNA切断が染色体再配列を引き起こし、ゲノムの不安定性を高め、細胞形質転換の可能性を高める可能性があります。さらに、がん細胞は持続的な複製ストレスを示すため、腫瘍細胞の複製フォークの脆弱性を標的とすることは、化学療法の魅力的な戦略となっています。複製中のDNA切断を研究するための非常に汎用性が高く強力な手法は、コメットアッセイです。このゲル電気泳動技術は、シングルセルレベルでのDNA切断の誘導と修復を確実に検出します。ここでは、研究者が複数の細胞タイプにわたるフォークストール剤を使用してヒト細胞を有糸分裂する際のDNA損傷の程度を測定できるようにするプロトコルが概説されています。これを自動コメットスコアリングと組み合わせることで、迅速な分析が容易になり、DNA切断の誘導研究の信頼性が向上します。