חיסון עלי Vivo: שיטה חלופית להערכת עמידות המחלה של שיבוטים היברידיים בגידול צפצפה של מחלת אפטות גזע

Summary

אנו מספקים פרוטוקול שלב אחר שלב להערכת עמידות צפצפה לפתוגנים של אפטות גזע באמצעות שיטת חיסון עלי in vivo . שיטה זו מתאימה במיוחד להערכה בקנה מידה גדול של עמידות למחלת Cytospora chrysosperma ו- Botryosphaeria dothidea canker בצאצאי גידול צפצפה בסין.

Abstract

מחלות אפטות גזע הנגרמות על ידי הפתוגן Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) ו - Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. ודה נוט הן שתי מחלות היער העיקריות במטעי הצפצפה בסין, שלעיתים יכולות להרוס את כל שתילי הצפצפה או לפגוע קשות ביערות צפצפה בוגרים. השבחה היברידית היא השיטה הישירה והיעילה ביותר לשליטה וניהול מחלות עצים. עם זאת, הערכת עמידות למחלות או בחירת שיבוטים עמידים למחלות המבוססים על חיסון גזע חוץ גופי אינה יעילה, גוזלת זמן ויקרה, ומגבילה את התפתחות הרבייה ההיברידית של מחלת אפטות גזע הצפצפה. במחקר זה, הצענו שיטה חלופית להערכת עמידות המחלה לפתוגנים של אפטות גזע באמצעות חיסון עלי in vivo . חומרי הבדיקה המשמשים בשיטה זו יכולים להיות על שתילי צפצפה בני שנה או על ענפים שנתיים של צפצפה רב שנתית בחממה או בשדה. השלב הקריטי בשיטה חלופית זו הוא בחירת העלים המחוסנים: 5-7 העלים^החדשים שהבשילו עשויים להיות המתאימים ביותר. השלב הקריטי השני של שיטת חיסון העלים הוא יצירת פצעים על עלי הצמח דרך פירסי מחט, מתן נגעים מספיקים כדי למדוד את חומרת המחלה. עבור המספר המספיק של עלים המיוצרים בשלב המוקדם של גידול הצפצפה, חיסון זה של עלי in vivo תורם לסריקה מהירה, מדויקת ובקנה מידה גדול של שיבוטי צפצפה עמידים למחלות כדי לעצור פתוגנים של אפטות אפטות. יתר על כן, שיטת חיסון עלים זו תשמש גם כשיטה יעילה לסינון פתוטיפים של מחלת אפטות גזע C. chrysosperma, B.dothidea, או פתוגנים אחרים של אפטות גזע צפצפה.

Introduction

מחלות אפטות גזע צפצפה, הנגרמות בעיקר על ידי שני פתוגנים נקרוטרופיים, Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. ו- Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. &דה נוט., מאיימים קשות על התפתחותם והישרדותם של מטעי צפצפה בצפון-מזרח, צפון וצפון-מערב (שלושה צפון) של סין. גידול היברידי הוא השיטה הישירה והיעילה ביותר לשליטה וניהול מחלות עצים; עם זאת, בהשוואה להתקדמות ברבייה של שיבוטים היברידיים צפצפה בעלי תפוקה גבוהה, גידול מהיר או שיבוטים היברידיים אחרים של צפצפה, המחקר על גידול עמידות למחלת אפטות צפצפה הוא נדיר. רק מחקרים מוגבלים על רבייה היברידית עמידה למחלות דווחו ^1,2,3....

Protocol

1. תרבות פטרייתית לפתוגן אפטות

1. מכינים את אגר דקסטרוז תפוחי אדמה (PDA; מיצוי תפוחי אדמה 6.0 גרם, דקסטרוז 20.0 גרם, אגר 20.0 גרם) מדיום תרבית לזנים פטרייתיים; ממיסים את החומרים הנ"ל במים עד 1000 מ"ל, ממיסים לחלוטין את המדיום ב 100 ° C למשך 10 דקות.
2. יוצקים מדיום PDA לתוך צינ.......

Discussion

פרוטוקול זה מספק שיטת חיסון מהירה ויעילה לפתוגנים של עמידות לאפטות צפצפה, המתאימה לתחומי המחקר הדורשים בדיקות סקר עמידות למחלות בקנה מידה גדול, כגון רבייה היברידית של עמידות לאפטות צפצפה ובדיקת פתוגניות של פתוגנים של אפטות גזע.

נקודת המפתח הראשונה של הש?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves