Inoculação foliar in vivo: um método alternativo para avaliar a resistência a doenças de clones híbridos no melhoramento genético de choupo da doença do cancro do caule

Summary

Fornecemos um protocolo passo a passo para avaliar a resistência do choupo aos patógenos do cancro do caule usando um método de inoculação de folhas in vivo . Este método é especialmente adequado para avaliação em larga escala da resistência à doença do cancro de Cytospora chrysosperma e Botryosphaeria dothidea na progênie reprodutora de choupo na China.

Abstract

Doenças do cancro do caule causadas pelo patógeno Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) e Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. são as duas principais doenças florestais nas plantações de choupo na China, às vezes que podem destruir todas as mudas de choupo ou danificar severamente as florestas de choupo maduras. A reprodução híbrida é o método mais direto e eficiente de controle e manejo de doenças de árvores. No entanto, avaliar a resistência a doenças ou selecionar clones de resistência a doenças com base na inoculação in vitro do caule é ineficiente, demorado e caro, limitando o desenvolvimento da reprodução híbrida da doença do cancro do caule do choupo. Neste estudo, propusemos um método alternativo para avaliar a resistência a doenças patogênicas do cancro do caule por meio da inoculação in vivo de folhas. Os materiais de teste usados neste método podem ser em mudas de choupo de 1 ano ou nos ramos anuais de choupos perenes na estufa ou no campo. A etapa crítica deste método alternativo é a seleção de folhas inoculantes: as 5-7ª folhas recém-amadurecidas podem ser as mais adequadas. A segunda etapa crítica do método de inoculação foliar é fazer feridas nas folhas das plantas por meio de perfurações de agulha, fornecendo lesões suficientes para medir a gravidade da doença. Para o número adequado de folhas produzidas no estágio inicial da reprodução do choupo, esta inoculação de folhas in vivo contribui para a triagem rápida, precisa e em larga escala dos clones de choupo resistentes a doenças para patógenos do cancro do caule. Além disso, este método de inoculação foliar também servirá como um método eficiente para a triagem de patótipos do patógeno da doença do cancro do caule C. chrysosperma, B.dothidea ou outros patógenos do cancro do caule do choupo.

Introduction

Doenças do cancro do caule do choupo, causadas principalmente por dois patógenos necrotróficos, Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. e Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Ameaçam severamente o desenvolvimento e a sobrevivência das plantações de choupo no Nordeste, Norte e Noroeste (Três Nortes) da China. A reprodução híbrida é o método mais direto e eficiente para controlar e manejar doenças de árvores; No entanto, em comparação com o progresso na reprodução de clones híbridos de álamo de alto rendimento, crescimento rápido ou outros clones híbridos de choupo, a pesquisa sobre a reprodução de resistência para a....

Protocol

1. Cultura fúngica para o patógeno do cancro

1. Prepare o meio de cultura em ágar batata dextrose (BDA; extração de batata 6,0 g, dextrose 20,0 g, ágar 20,0 g) para cepas de fungos; dissolva os materiais acima em água até 1000 mL, dissolva completamente o meio a 100 °C por 10 min.
2. Despeje o meio PDA em tubos de 25 mL (cada um contendo 15,0 mL); esterilize todos os tubos a 121,1 °C por 30 min. Despeje o meio em placas de cultura (9,0 cm de diâm.......

Discussion

Este protocolo fornece um método de inoculação rápido e eficiente para patógenos resistentes ao cancro do choupo, adequado para os campos de pesquisa que requerem triagem de resistência a doenças em larga escala, como reprodução híbrida de resistência ao cancro do choupo e triagem de patogenicidade de patógenos do cancro do caule.

O primeiro ponto-chave do método é avaliar a resistência a doenças por inoculação de folhas recém-amadurecidas .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves