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V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting

The western blot is a very useful and widely adopted lab technique, but its execution is challenging. The workflow is often characterized as a &#34;black ...

Bio-Rad Laboratories

&#x867D;&#x7136;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x591A;&#x80BD;&#x548C;&#x6838;&#x9178;&#x591A;&#x80BD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x5B9A;&#x6027;&#x5B9A;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F80;&#x5F80;&#x662F;&#x7E41;&#x7410;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x51C6;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x80BD;&#x4FE1;&#x6807; (PBs) &#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;PBs &#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x57FA;&#x4E8E;&#x89C2;&#x5BDF;&#xFF0C;&#x77ED;&#x80BD;&#x662F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x907F;&#x514D;&#x5730;&#x5C55;&#x5F00;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x800C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6210;&#x4E3A;&#x521A;&#x6027;&#x65F6;&#x7EDC;&#x5408;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6298;&#x53E0;&#x9694;&#x79BB;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8298;&#x5076;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x6291;&#x5236;&#x51C6;&#x5206;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E86;&#x9488;&#x5BF9;&#x6297; hiv &#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x53CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x53CD;&#x5E94; (TAR) RNA &#x53D1;&#x5939;&#x7684; PBs&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x591A;&#x80BD;&#xFF0C;&#x76EE;&#x6807;&#x8BC6;&#x522B;&#x88AB;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x51C6;&#x5206;&#x5B50;&#x6392;&#x653E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4F7F;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A; nanomolar &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E8C;&#x6298;&#x8DCC;&#x5E45;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x51C6;&#x5206;&#x5B50;&#x6392;&#x653E;&#x8981;&#x6C42;&#x7684;&#x7D27;&#x7EF7;&#xFF0C;&#x6B63;&#x662F;&#x9762;&#x5411;&#x8298;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7410;&#x788E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9694;&#x79BB;&#x4F1A;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; PB &#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x5C06;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x51C6;&#x5206;&#x5B50;&#x7684; PBs &#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x5229;&#x7528;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684; pyrenes &#x4E2D;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x5F97;&#x975E;&#x5E38;&#x9002;&#x5408;&#x7528;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5E38;&#x89C4;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x51C6;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x80BD;&#x4FE1;&#x6807;&#xFF1A; &#x76D1;&#x6D4B;&#x591A;&#x80BD;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x591A;&#x80BD;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x4FBF;&#x5229;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

While protein-polypeptide and nucleic acid-polypeptide interactions are of significant experimental interest, quantitative methods for the characterization of such interactions are often cumbersome. Here we described a relatively simple means of optically monitoring such interactions using excimer-based peptide beacons (PBs). The design of PBs is based on the observation that, whereas short peptides are almost invariably unfolded and highly dynamic, they become rigid when complexed with macromolecular targets. Using this binding-induced folding to segregate two pyrene moieties and therefore inhibit excimer formation, we have produced PBs directed against both anti-HIV antibodies and the retroviral transactive response (TAR) RNA hairpin. For both polypeptides, target recognition is accompanied by a roughly 2-fold decrease in excimer emission, thus allowing the detection of their respective targets at concentrations of a few nanomolar. Because excimer emission requires the formation of a tight, precisely oriented pyrene dimer, even relatively trivial binding-induced segregation reduces fluorescence significantly. This suggests that the PB approach will be suitable for monitoring a wide range of peptide-macromolecule recognition events. Moreover, the synthesis of excimer-based PBs utilizes commercially available modified pyrenes in a simple and well-established protocol, making the approach well suited for routine laboratory applications.

Excimer-based peptide beacons: a convenient experimental approach for monitoring polypeptide-protein and polypeptide-oligonucleotide interactions.

Tandis que les prot&#xE9;ines polypeptidiques et l&#x26;#39;acide nucl&#xE9;ique de polypeptides interactions sont d&#x26;#39;un int&#xE9;r&#xEA;t exp&#xE9;rimental important, des m&#xE9;thodes quantitatives pour la caract&#xE9;risation de ces interactions sont souvent lourdes. Ici, nous avons d&#xE9;crit un moyen relativement simple de surveillance optique de telles interactions &#xE0; l&#x26;#39;aide de balises peptidiques excim&#xE8;re &#xE0; base (PBS). La conception de PBS est bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;observation que, alors que les peptides courts sont presque toujours d&#xE9;pli&#xE9; et tr&#xE8;s dynamique, ils deviennent rigides lorsqu&#x26;#39;ils sont complex&#xE9;s avec des objectifs macromol&#xE9;culaires. L&#x26;#39;utilisation de ce pliage de liaison induite par de s&#xE9;parer les deux moiti&#xE9;s pyr&#xE8;ne et donc inhiber la formation de excimer, nous avons produit PB dirig&#xE9;e contre les anticorps anti-VIH et la r&#xE9;ponse transactive r&#xE9;troviral (TAR) en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux d&#x26;#39;ARN. Pour les deux polypeptides, de reconnaissance de cible est accompagn&#xE9;e d&#x26;#39;une diminution d&#x26;#39;environ 2 fois en &#xE9;mission excim&#xE8;re, permettant ainsi la d&#xE9;tection de leurs cibles respectives, &#xE0; des concentrations d&#x26;#39;un petit nombre nanomolaire. Parce excim&#xE8;re &#xE9;mission oblige la formation d&#x26;#39;un &#xE9;tanche, dim&#xE8;re pyr&#xE8;ne pr&#xE9;cis&#xE9;ment orient&#xE9;e, m&#xEA;me relativement insignifiante liaison s&#xE9;gr&#xE9;gation induite r&#xE9;duit la fluorescence de mani&#xE8;re significative. Ceci sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;approche PB sera adapt&#xE9; pour la surveillance d&#x26;#39;un large &#xE9;ventail d&#x26;#39;&#xE9;v&#xE9;nements de reconnaissance peptide-macromol&#xE9;cules. En outre, la synth&#xE8;se de excim&#xE8;re &#xE0; base de PB utilise commercialement disponibles pyr&#xE8;nes modifi&#xE9;s dans un protocole simple et bien &#xE9;tablie, ce qui rend l&#x26;#39;approche bien adapt&#xE9;e pour les applications de laboratoire de routine.

Beacons peptidiques Excimer base: une approche pratique exp&#xE9;rimentale pour le suivi des interactions polypeptide-prot&#xE9;ine et le polypeptide-oligonucl&#xE9;otide

W&auml;hrend der Protein-Polypeptid und Nukleins&auml;ure-Polypeptid Interaktionen erhebliche experimentelle interessant sind, sind quantitative Methoden zur Charakterisierung von solchen Interaktionen oft umst&auml;ndlich. Hier beschrieben wir relativ einfache Weise optisch &Uuml;berwachung solcher Aktivit&auml;ten, die mit Excimer-basierte Peptid-Leuchtfeuer (PBs). Das Design der PBs basiert auf der Beobachtung, dass kurze Peptide sind nahezu ausnahmslos entfaltet und hochdynamische, sie starren, wenn komplexiert mit Makromolekulare Zielen geworden. Mit dieser Bindung-induzierte Falten trennen zwei pyren Adsorptionseigenschaften und daher Excimer-Bildung zu hemmen, haben wir gegen Anti-HIV-Antik&ouml;rper und der Retroviren Transaktions-Antwort (TAR) RNA-Haarnadel PBs produziert. F&uuml;r beide Polypeptiden ist ein etwa 2-fold R&uuml;ckgang der Excimer-Emission, so dass die Erkennung von ihre jeweiligen Ziele bei Konzentrationen von wenigen Nanomolar Zielerfassung begleitet. Da Excimer-Emission die Bildung eines engen, genau ausgerichtete pyren-Dimer erfordert, wird auch relativ trivialen Bindung induziert Rassentrennung Fluoreszenz erheblich reduziert. Dies deuten an, dass der PB-Ansatz f&uuml;r die &Uuml;berwachung einer Vielzahl von Peptid-Makromolek&uuml;l Anerkennung Veranstaltungen geeignet. Dar&uuml;ber hinaus nutzt die Synthese von Excimer-basierte PBs kommerziell erh&auml;ltliche modifizierte Pyrenes in einem einfachen und bew&auml;hrten Protokoll, gut geeignet f&uuml;r Routine Laboranwendungen-Ansatz.

Excimer-basierte Peptid Leuchtt&uuml;rme: ein passender experimentellen Ansatz zur &Uuml;berwachung der Polypeptid-Protein und Polypeptid-Oligonukleotid-Interaktionen.

Mentre le interazioni della proteina-polipeptide e acido nucleico-polipeptide sono di rilevante interesse sperimentale, metodi quantitativi per la caratterizzazione di tali interazioni sono spesso ingombrante. Qui abbiamo descritto un mezzo relativamente semplice di monitoraggio otticamente tali interazioni usando i fari ad eccimeri-basato del peptide (PBs). Il design di PBs si basa sull&#39;osservazione che, mentre brevi peptidi sono quasi invariabilmente dispiegata e altamente dinamico, diventano rigide quando complessato con bersagli macromolecolari. Utilizzando questo pieghevole associazione-indotta a separare due moiety pirene e quindi inibiscono la formazione di eccimeri, abbiamo prodotto PBs diretto contro entrambi gli anticorpi anti-HIV e la risposta transactive retrovirale hairpin RNA (TAR). Per entrambi i polipeptidi, riconoscimento di destinazione &egrave; accompagnata da una diminuzione di circa 2 volte in emissione ad eccimeri, consentendo cos&igrave; l&#39;individuazione dei loro rispettivi bersagli a concentrazioni nanomolari pochi. Perch&eacute; emissione ad eccimeri richiede la formazione di un dimero di pirene stretto, appunto orientato, anche relativamente banale segregazione indotta da associazione riduce significativamente la fluorescenza. Questo suggerisce che l&#39;approccio di PB sar&agrave; adatto per il monitoraggio di una vasta gamma di eventi di riconoscimento del peptide-macromolecola. Inoltre, la sintesi di base ad eccimeri PBs utilizza commercialmente disponibile Pirenei modificati in un protocollo semplice e consolidato, rendendo l&#39;approccio adatto per applicazioni di laboratorio di routine.

Beacon ad eccimeri-basato del peptide: un comodo approccio sperimentale per il monitoraggio di interazioni proteina-polipeptide e polipeptide-oligonucleotide.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6838;&#x9178;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x5FC3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x7169;&#x96D1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#xFF08;PBS&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PBS&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306F;&#x3001;&#x77ED;&#x3044;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x5E38;&#x306B;&#x7E70;&#x308A;&#x5E83;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x525B;&#x6027;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6297;HIV&#x6297;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;transactive&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;TAR&#xFF09;&#x306E;RNA&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;PBS&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x767A;&#x5149;&#x306E;&#x7D04;2&#x500D;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x767A;&#x5149;&#x304C;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x200B;&#x200B;&#x306B;&#x6307;&#x5411;&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x8A98;&#x8D77;&#x504F;&#x6790;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;PB&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; - &#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;PBS&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3082;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x691C;&#x67FB;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x5B9A;&#x8A55;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3067;&#x5E02;&#x8CA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#xFF1A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; - &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FBF;&#x5229;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;

Polypeptide &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD575; &#xC0B0; polypeptide &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAD00;&#xC2EC; &#xBC18;&#xBA74;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC591;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95; &#xC131;&#xAC00;&#xC2E0; &#xB9CE;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAD11;&#xD559; &#xC5D1; &#xAE30;&#xBC18; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xBE44;&#xCF58; (PBs)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pbs&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;, &#xC9E7;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAC70;&#xC758; &#xBCC0;&#xD568;&#xC5C6;&#xC774; &#xD3BC;&#xCE5C; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xBC18;&#xBA74; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xB420; &#xB54C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; complexed &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC811;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC720;&#xBC1C;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; pyrene moieties &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC5D1; &#xD615;&#xC131; &#xC5B5;&#xC81C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PBs anti-HIV &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC0F; retroviral &#xC591;&#xC790;&#xAC00; &#xC751;&#xB2F5; (&#xD0C0;&#xB974;) RNA &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xBAA8;&#xB450; polypeptides&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC778;&#xC2DD; &#xD568;&#xAED8; &#xC5D1; &#xBC29;&#xCD9C;, &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; nanomolar&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC01;&#xAC01; &#xBAA9;&#xD45C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xBBC0;&#xB85C; &#xB300;&#xB7B5; 2-fold &#xAC10;&#xC18C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D1; &#xBC29;&#xCD9C;, &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC9C0;&#xD5A5; pyrene &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xB3C4; &#xBCC4;&#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC720;&#xB3C4; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD615;&#xAD11; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; PB &#xC811;&#xADFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC778;&#xC2DD; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xB420; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC5D1;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; Pbs&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; pyrenes&#xB97C; &#xC77C;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC798; &#xC124;&#xB9BD; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5D1; &#xAE30;&#xBC18; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xC7A5;&#xCE58;: polypeptide &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; polypeptide oligonucleotide &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD3B8;&#xB9AC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;.

Mientras polipept&#xED;dicas de prote&#xED;nas y &#xE1;cidos nucleicos de polip&#xE9;ptidos interacciones son de inter&#xE9;s experimental importante, los m&#xE9;todos cuantitativos para la caracterizaci&#xF3;n de estas interacciones son a menudo inc&#xF3;modas. Aqu&#xED; se describe una forma relativamente sencilla de vigilar &#xF3;pticamente estas interacciones con excimer-a base de balizas de p&#xE9;ptidos (PBS). El dise&#xF1;o de PBS se basa en la observaci&#xF3;n de que, mientras que los p&#xE9;ptidos cortos son, casi invariablemente, desplegada y altamente din&#xE1;mica, se vuelven r&#xED;gidos cuando se compleja con objetivos macromoleculares. El uso de este plegamiento vinculante inducida para separar dos mitades pireno y por lo tanto inhibe la formaci&#xF3;n de exc&#xED;mero, hemos producido PP dirigida contra los dos anticuerpos anti-VIH y la respuesta transactivo retroviral (TAR) horquilla de ARN. Para ambos polip&#xE9;ptidos, de reconocimiento del objetivo est&#xE1; acompa&#xF1;ado por una disminuci&#xF3;n aproximadamente 2 veces en la emisi&#xF3;n de exc&#xED;mero, permitiendo as&#xED; la detecci&#xF3;n de sus respectivos objetivos en concentraciones de un nanomolar pocos. Debido exc&#xED;mero emisi&#xF3;n requiere la formaci&#xF3;n de un d&#xED;mero apretado, pireno precisamente orientado, incluso relativamente trivial uni&#xF3;n inducida por segregaci&#xF3;n reduce significativamente la fluorescencia. Esto sugiere que el enfoque PB ser&#xE1; adecuado para el seguimiento de una amplia gama de eventos de reconocimiento de p&#xE9;ptido-macromol&#xE9;cula. Por otra parte, la s&#xED;ntesis de excimer basado en PP utiliza pirenos modificados disponibles en el mercado en un protocolo simple y bien establecida, por lo que el enfoque adecuado para aplicaciones de laboratorio de rutina.

Basados &#x200B;&#x200B;en Excimer-Beacons p&#xE9;ptido: un enfoque pr&#xE1;ctico experimental para la Supervisi&#xF3;n de las interacciones prote&#xED;na-polip&#xE9;ptido y el polip&#xE9;ptido de oligonucle&#xF3;tidos

&#x6297;&#x539F;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7C07;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4F53;&#x5916;&#x9009;&#x62E9;&#x6280;&#x672F;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E25;&#x683C;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x77ED;&#x80BD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x591A;&#x80BD;&#x8F6C;&#x6362;&#x5149;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x4E00;&#x822C;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x80BD;&#x4FE1;&#x6807;&#x7684;&#x9065;&#x611F;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x4E8E;&#x89C2;&#x5BDF;&#xFF0C;&#x77ED;&#x80BD;&#x662F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x907F;&#x514D;&#x5730;&#x5C55;&#x5F00;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x800C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6210;&#x4E3A;&#x521A;&#x6027;&#x65F6;&#x7EDC;&#x5408;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x6548;&#x679C;&#x4EE5;&#x5206;&#x9694;&#x7535;&#x5B50;&#x4ECE;&#x957F;&#x5BFF;&#x8367;&#x5149;&#x4F20;&#x8F93;&#x57FA;&#x7840;&#x3001; &#x63A5;&#x89E6;&#x6DEC;&#x706B; &#xFF08;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x80BD;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E86;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x6297; hiv &#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8367;&#x5149;&#x6DEC;&#x706B;&#x5BF9;&#x5206;&#x5DE5;&#x751F;&#x4EA7;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6392;&#x653E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x968F;&#x65F6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F4E;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 250 &#x83B2;&#x84EC;&#x5934;&#x589E;&#x52A0;&#x76EE;&#x6807;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4E0B;&#x5348;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x53EF;&#x89C1;&#x5149;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5177;&#x6709;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x553E;&#x6DB2;&#x548C;&#x8840;&#x6DB2;&#x7B49;&#x590D;&#x6742;&#x3001; &#x5145;&#x6EE1;&#x6C61;&#x67D3;&#x7269;&#x7684;&#x91C7;&#x6837;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;

&#x591A;&#x80BD;&#x4FE1;&#x6807;&#xFF1A; &#x57FA;&#x4E8E;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x65B0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;

Both epitope mapping and other in vitro selection techniques produce short polypeptides that tightly and specifically bind to any of a wide range of macromolecular targets. Here, we demonstrate a potentially general means of converting such polypeptides into optical biosensors. The sensing architecture we have developed, termed peptide beacons, is based on the observation that, whereas short peptides are almost invariably unfolded and highly dynamic, they become rigid when complexed to a macromolecular target. Using this effect to segregate a long-lived fluorophore from an electron transfer based, contact quencher (both covalently attached to the peptide), we have produced a robust optical sensor for anti-HIV antibodies. The binding-induced segregation of the fluorophore-quencher pair produces a 6-fold increase in sensor emission, thus allowing us to readily detect as low as approximately 250 pM of the target antibody. Because the sensor is based on binding-induced folding and a visible-light fluorophore, it is sufficiently selective to work directly in complex, contaminant-ridden samples such as saliva and blood.

Peptide beacons: a new design for polypeptide-based optical biosensors.

Les deux cartographie des &#xE9;pitopes et autres techniques de s&#xE9;lection in vitro produire des polypeptides courts serr&#xE9; et se lier sp&#xE9;cifiquement &#xE0; un quelconque d&#x26;#39;un large &#xE9;ventail de cibles macromol&#xE9;culaires. Ici, nous d&#xE9;montrons un moyen potentiellement g&#xE9;n&#xE9;raux de la conversion de ces polypeptides dans des biocapteurs optiques. L&#x26;#39;architecture de d&#xE9;tection, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9;, appel&#xE9; balises peptidiques, est bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;observation que, alors que les peptides courts sont presque toujours d&#xE9;pli&#xE9; et tr&#xE8;s dynamique, ils deviennent rigides lorsqu&#x26;#39;ils sont complex&#xE9;s &#xE0; une cible macromol&#xE9;culaire. En utilisant cet effet d&#x26;#39;isoler un fluorophore longue dur&#xE9;e de vie d&#x26;#39;un transfert d&#x26;#39;&#xE9;lectrons en fonction, extincteur de contact (&#xE0; la fois li&#xE9; de fa&#xE7;on covalente au peptide), nous avons produit un capteur robuste optique pour anticorps anti-VIH. La s&#xE9;gr&#xE9;gation induite par liaison de la paire fluorophore-quencher produit une augmentation de 6 fois dans l&#x26;#39;&#xE9;mission du capteur, nous permettant ainsi de facilement d&#xE9;tecter aussi bas que environ 250 pM de l&#x26;#39;anticorps cible. Parce que le capteur est bas&#xE9; sur la liaison induite par pliage et un fluorophore en lumi&#xE8;re visible, elle est suffisamment s&#xE9;lective pour travailler directement dans un complexe, en proie &#xE0; des contaminants tels que des &#xE9;chantillons de salive et de sang.

Beacons peptidiques: un nouveau design pour les polypeptide &#xE0; base de biocapteurs optiques

Epitop Mapping und andere Techniken der in-vitro-Auswahl erzeugen kurze Polypeptide, die eng und speziell an eine Vielzahl von makromolekularen Ziele zu binden. Hier zeigen wir ein potenziell allgemeine Mittel des Umwandelns von solchen Polypeptide in optische Biosensoren. Die Fernerkundung-Architektur, die wir entwickelt haben, Peptid Beacons, genannt, die basiert auf der Beobachtung, dass kurze Peptide nahezu ausnahmslos entfaltet und hochdynamische sind, sie starren, wenn zu einem Makromolekulare Ziel komplexiert werden. Mit dieser Effekt zu einem langlebigen Fluorophor aus einem Elektron trennen basiert, Kontakt Quencher (beide angeschlossen kovalent an das Peptid) zu &uuml;bertragen, haben wir einen robusten optischen Sensor f&uuml;r Anti-HIV-Antik&ouml;rper produziert. Die Segregation induziert durch Bindung des Paares Fluorophor-Quencher produziert eine 6-fold Zunahme der Sensor-Emission, wodurch es uns zu leicht zu ermitteln, so niedrig wie etwa 250 pM des Antik&ouml;rpers vorbei. Da der Sensor auf Bindung induziert Falt- und ein sichtbares Licht-Fluorophor basiert, ist es ausreichend selektiv direkt in komplexen, Kontaminanten heimgesuchten Proben wie Speichel und Blut zu arbeiten.

Peptid-Leuchtt&uuml;rme: ein neues Design f&uuml;r optische Biosensoren Polypeptid-basierte.

Altre tecniche di selezione in vitro ed epitope mapping producono brevi polipeptidi che strettamente e specificamente si legano a qualsiasi di una vasta gamma di obiettivi macromolecolare. Qui, noi dimostrare un mezzo potenzialmente generale di convertire tali polipeptidi in biosensori ottici. L&#39;architettura di telerilevamento che abbiamo sviluppato, chiamato Beacon del peptide, si basa sull&#39;osservazione che, mentre brevi peptidi sono quasi invariabilmente dispiegata e altamente dinamico, diventano rigide quando complessato ad un bersaglio macromolecolare. Utilizzando questo effetto per segregare un fluoroforo longevo da un elettrone trasferimento basato, contatta quencher (entrambi covalentemente associate al peptide), abbiamo prodotto un robusto sensore ottico per gli anticorpi anti-HIV. La segregazione indotta dal legame della coppia fluorophore-quencher produce un aumento di 6-volte in emissione sensore, permettendoci cos&igrave; di rilevare prontamente come basso come approssimativamente 250 pM l&#39;anticorpo di destinazione. Perch&eacute; il sensore &egrave; basato sull&#39;associazione-indotta pieghevole e un fluoroforo luce visibile, &egrave; sufficientemente selettivo per lavorare direttamente in campioni complessi, cavalcato da contaminanti quali saliva e sangue.

Beacon del peptide: un nuovo design per biosensori ottici basati su polipeptide.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x3067;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x7279;&#x306B;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x77ED;&#x3044;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x77ED;&#x3044;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x5E38;&#x306B;&#x7E70;&#x308A;&#x5E83;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x525B;&#x6027;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3001;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x304B;&#x3089;&#x9577;&#x5BFF;&#x547D;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x200B;&#x200B;&#x4F53;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#xFF08;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#xFF09;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6297;HIV&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x5149;&#x5B66;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2; - &#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x8A98;&#x8D77;&#x504F;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x6A19;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D04;250 pM&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4F4E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306E;&#x6392;&#x51FA;&#x91CF;&#x306E;6&#x500D;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304C;&#x7D50;&#x5408;&#x8A98;&#x8D77;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x3068;&#x53EF;&#x8996;&#x5149;&#x86CD;&#x5149;&#x4F53;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x553E;&#x6DB2;&#x3084;&#x8840;&#x6DB2;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x3001;&#x6C5A;&#x67D3;&#x7269;&#x8CEA;&#x3060;&#x3089;&#x3051;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#xB7;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;

Epitope &#xB9E4;&#xD551; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xCCB4; &#xC678; &#xC120;&#xD0DD; &#xAE30;&#xBC95; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB420; &#xC9E7;&#xC740; polypeptides&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xAD11; biosensors &#xAC19;&#xC740; polypeptides &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD55C; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xBE44;&#xCF58; &#xB418; &#xB098; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;, &#xC9E7;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAC70;&#xC758; &#xBCC0;&#xD568;&#xC5C6;&#xC774; &#xD3BC;&#xCE5C; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xBC18;&#xBA74; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xB420; &#xB54C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; complexed &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. (&#xB458; &#xB2E4; &#x70AD; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;)&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xB044;&#xB294; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; fluorophore&#xC744; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; anti-HIV &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAD11;&#xD559; &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC654;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Fluorophore&#xC744; &#xB044;&#xB294; &#xC30D;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC720;&#xB3C4; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0DD;&#xC0B0; 6-fold &#xC99D;&#xAC00; &#xB418;&#xBBC0;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC27D;&#xAC8C;&#xB85C; &#xC57D; 250 &#xB0AE;&#xC740; &#xAC80;&#xCD9C; &#xC13C;&#xC11C; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB300;&#xC0C1; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC624;&#xD6C4;. &#xC13C;&#xC11C; &#xC811;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC2DC;&#xAD11;&#xC120; fluorophore&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD0C0; &#xC561;&#xACFC; &#xD608;&#xC561; &#xB4F1; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xC624;&#xC5FC; &#xBB3C;&#xC9C8;-&#xC7C1;&#xC774; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBE44;&#xCF58;: polypeptide &#xAE30;&#xBC18; &#xAD11;&#xD559; biosensors&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB514;&#xC790;&#xC778;.

Tanto la cartograf&#xED;a ep&#xED;topo y otro en las t&#xE9;cnicas de selecci&#xF3;n in vitro producir polip&#xE9;ptidos cortos que herm&#xE9;ticamente y se unen espec&#xED;ficamente a cualquiera de una amplia gama de objetivos macromoleculares. Este sentido, demuestran un medio potencialmente generales de la conversi&#xF3;n de dichos polip&#xE9;ptidos en biosensores &#xF3;pticos. La arquitectura de detecci&#xF3;n que hemos desarrollado, denominado balizas de p&#xE9;ptidos, se basa en la observaci&#xF3;n de que, mientras que los p&#xE9;ptidos cortos son, casi invariablemente, desplegada y altamente din&#xE1;mica, se vuelven r&#xED;gidos cuando se compleja con un objetivo macromolecular. El uso de este efecto de segregar un fluor&#xF3;foro de larga vida de una transferencia de electrones base, quencher contacto (tanto unido covalentemente al p&#xE9;ptido), hemos producido un sensor &#xF3;ptico robusto para anticuerpos anti-VIH. La segregaci&#xF3;n inducida por la uni&#xF3;n de la pareja fluor&#xF3;foro quencher produce un aumento de 6 veces en la emisi&#xF3;n del sensor, lo que nos permite detectar f&#xE1;cilmente un precio tan bajo como aproximadamente 250 pM del anticuerpo de destino. Debido a que el sensor se basa en uni&#xF3;n inducida por plegado y un fluor&#xF3;foro de luz visible, es lo suficientemente selectivo para trabajar directamente en complejos contaminante plagados de muestras tales como la saliva y sangre.

Faros p&#xE9;ptido: un nuevo dise&#xF1;o para Polip&#xE9;ptido basados &#x200B;&#x200B;en biosensores &#xF3;pticos

&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x80BD;&#x6838;&#x9178;&#x5D4C;&#x6BB5;&#x5171;&#x805A;&#x7269;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x79F0;&#x4E4B;&#x4E3A;&#x5D4C;&#x5408;&#x80BD;&#x4FE1;&#x6807; &#xFF08;CPB&#xFF09;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x8F93;&#x51FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x91C7;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x4FE1;&#x6807;&#x3002;

&#x5D4C;&#x5408;&#x80BD;&#x4FE1;&#x6807;&#xFF1A; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x4FE1;&#x6807;&#x76F4;&#x63A5;&#x591A;&#x80BD;&#x6A21;&#x62DF;&#x3002;

We have developed a new biosensor architecture, which is comprised of a polypeptide-peptide nucleic acid tri-block copolymer and which we have termed chimeric peptide beacons (CPB), that generates an optical output via a mechanism analogous to that employed in DNA-based molecular beacons.

Chimeric peptide beacons: a direct polypeptide analog of DNA molecular beacons.

Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une nouvelle architecture biocapteur, qui est compos&#xE9; d&#x26;#39;un acide nucl&#xE9;ique peptidique polypeptide-copolym&#xE8;re tri-s&#xE9;quenc&#xE9; et que nous avons appel&#xE9; balises peptidiques chim&#xE8;res (CPB), qui g&#xE9;n&#xE8;re une sortie optique via un m&#xE9;canisme analogue &#xE0; celui utilis&#xE9; dans bas&#xE9; sur l&#x26;#39;ADN balises mol&#xE9;culaires.

Beacons peptide chim&#xE8;re: une Analog Direct Polypeptide de balises mol&#xE9;culaires d&#x26;#39;ADN

Wir haben eine neue Biosensor-Architektur, die besteht aus einem Polypeptid-Peptid-Nukleins&auml;ure-Tri-Block-Copolymeren und das wir haben bezeichnet entwickelt Chim&auml;ren Peptid Leuchtfeuer (CPB), die einen optischen Ausgang &uuml;ber einen Mechanismus analog zu generiert, die in der DNA-basierte Molekulare Beacons eingesetzt.

Chim&auml;ren Peptid Leuchtt&uuml;rme: eine direkte Polypeptid-Entsprechung von DNA molecular Beacons.

Abbiamo sviluppato una nuova architettura di biosensori, che &egrave; composto da un copolimero di tri-blocco polipeptide-peptide nucleic acid e che noi abbiamo definito peptide chimerico Beacon (CPB), che genera un output ottico attraverso un meccanismo analogo a quello impiegato nella base di DNA molecular beacons.

Beacon chimerico peptide: un analogico diretto polipeptide di Beacon molecolare del DNA.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DNA&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x63A1;&#x7528;&#x3068;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5149;&#x51FA;&#x529B;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6838;&#x9178;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x5171;&#x91CD;&#x5408;&#x4F53;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#xFF08;CPB&#xFF09;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3002;

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#xFF1A;DNA&#x5206;&#x5B50;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; polypeptide &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xD575; &#xC0B0; &#xD2B8;&#xB77C;&#xC774; &#xBE14;&#xB85D; &#xCF54; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBD88;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xC13C;&#xC11C; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; chimeric &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBE44;&#xCF58; (CPB) &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAD11; &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; DNA &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC790; &#xBE44;&#xCF58;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;.

Chimeric &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBE44;&#xCF58;: DNA &#xBD84;&#xC790; &#xBE44;&#xCF58;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; polypeptide &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;.

Hemos desarrollado una nueva arquitectura biosensor, que se compone de un &#xE1;cido nucleico pept&#xED;dico del polip&#xE9;ptido de tri-bloque copol&#xED;mero y que hemos denominado balizas quim&#xE9;ricos p&#xE9;ptido (CEC), que genera una salida &#xF3;ptica a trav&#xE9;s de un mecanismo an&#xE1;logo al empleado en basado en el ADN marcadores moleculares.

Faros de p&#xE9;ptidos quim&#xE9;ricos: un Analog Direct polip&#xE9;ptido de balizas moleculares de ADN

Molti polipeptidi e piccole proteine possono essere facilmente costruite tale che si piega solo all&#39;associazione un ligando specifico target. Questo approccio coppie riconoscimento di destinazione con un cambiamento notevole nella struttura polimerica e dinamiche. Anni recenti hanno visto lo sviluppo di un certo numero di biosensori che coppia questi grandi cambiamenti alle uscite (fluorescente) ottiche facilmente misurabili. Questi sensori permettersi la rilevazione di un&#39;ampia variet&agrave; di bersagli macromolecolari compresi gli acidi nucleici, proteine e polipeptidi. Qui descriviamo la progettazione di tali biosensori, dalle iterazioni prime come gli esperimenti di ingegneria proteica, allo sviluppo di biosensori targeting per una gamma di obiettivi degli acidi nucleici e proteine.

Di l&agrave; di molecular beacons: sensori ottici basano su indotta da associazione ripiegamento di proteine e polipeptidi.

&#x8FD9;&#x6837;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EA;&#x6298;&#x540E;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x914D;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x968F;&#x65F6;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x8BB8;&#x591A;&#x591A;&#x80BD;&#x548C;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x76EE;&#x6807;&#x8BC6;&#x522B;&#x592B;&#x5987;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x52A8;&#x6001;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD1;&#x51E0;&#x5E74;&#x6765;&#x770B;&#x5230;&#x4E00;&#x4E9B;&#x60C5;&#x4FA3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x6D4B;&#x51FA;&#x5149; &#xFF08;&#x8367;&#x5149;&#xFF09; &#x4EA7;&#x51FA;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x8D77;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; &#x591A;&#x80BD;&#x3001; &#x6838;&#x9178;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x8FED;&#x4EE3;&#x4ECE;&#x53D1;&#x5C55;&#x9488;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x6838;&#x9178;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;

&#x8D85;&#x8D8A;&#x5206;&#x5B50;&#x4FE1;&#x6807;&#xFF1A; &#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x3002;

Many polypeptides and small proteins can be readily engineered such that they only fold upon binding a specific target ligand. This approach couples target recognition with a considerable change in polymer structure and dynamics. Recent years have seen the development of a number of biosensors that couple these large changes to readily measurable optical (fluorescent) outputs. These sensors afford the detection of a wide variety of macromolecular targets including proteins, polypeptides, and nucleic acids. Here we describe the design of such biosensors, from the first iterations as protein engineering experiments, to the development of biosensors targeting a range of protein and nucleic acid targets.

Beyond molecular beacons: optical sensors based on the binding-induced folding of proteins and polypeptides.

Beaucoup de polypeptides et des prot&#xE9;ines petits peuvent &#xEA;tre facilement con&#xE7;u de telle sorte qu&#x26;#39;ils ne plient lors de la liaison d&#x26;#39;un ligand cible sp&#xE9;cifique. Cette reconnaissance de la cible approche couples avec un changement consid&#xE9;rable dans la structure du polym&#xE8;re et de la dynamique. Ces derni&#xE8;res ann&#xE9;es ont vu le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un certain nombre de biocapteurs qui couplent ces grands changements &#xE0; facilement mesurables optiques (fluorescence). Sorties Ces capteurs se permettre la d&#xE9;tection d&#x26;#39;une grande vari&#xE9;t&#xE9; de cibles macromol&#xE9;culaires, y compris les prot&#xE9;ines, les polypeptides et les acides nucl&#xE9;iques. Nous d&#xE9;crivons ici la conception de tels biocapteurs, des premi&#xE8;res it&#xE9;rations que des exp&#xE9;riences d&#x26;#39;ing&#xE9;nierie des prot&#xE9;ines, au d&#xE9;veloppement de biocapteurs ciblant une gamme de prot&#xE9;ines et acides nucl&#xE9;iques cibles.

Au-del&#xE0; de balises mol&#xE9;culaires: Capteurs optiques bas&#xE9;s sur le pliant reliure induite par des prot&#xE9;ines et des polypeptides

Viele Polypeptide und kleine Proteine k&ouml;nnen leicht verpflanzt werden, so dass sie nur auf ein bestimmtes Ziel-Ligand verbindliche Falten. Dieser Ansatz Paare Zielerfassung mit einer erheblichen &Auml;nderung in Polymer-Struktur und Dynamik. Den letzten Jahren haben die Entwicklung einer Reihe von Biosensoren gesehen, die diese gro&szlig;en Ver&auml;nderungen auf leicht messbare optische Ausg&auml;nge (fluoreszierende) zu kombinieren. Diese Sensoren erlauben die Erkennung einer Vielzahl von makromolekularen Ziele einschlie&szlig;lich Nukleins&auml;uren, Proteine und Polypeptide. Hier beschreiben wir die Gestaltung solcher Biosensoren, aus der ersten Iterationen als Protein engineering Experimente, zur Entwicklung von Biosensoren, die gezielt einer Reihe von Protein und Nukleins&auml;ure-Ziele.

&Uuml;ber molecular Beacons: optische Sensoren basiert auf der Bindung induziert Faltung der Proteine und Polypeptide.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3092;&#x3002;&#x8FD1;&#x5E74;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5149;&#xFF08;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#xFF09;&#x306E;&#x51FA;&#x529B;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x898B;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x6838;&#x9178;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x7A2E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x6838;&#x9178;&#x6A19;&#x7684;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5DE5;&#x5B66;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x53CD;&#x5FA9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5149;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#xFF1A;&#x5206;&#x5B50;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;

&#xB9CE;&#xC740; polypeptides &#xBC0F; &#xC791;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC815; &#xB300;&#xC0C1; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2DC; &#xBC30;&#xB294; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC124;&#xACC4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB300;&#xC0C1; &#xC778;&#xC2DD; &#xCEE4;&#xD50C;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD80; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD070; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC27D;&#xAC8C; &#xCE21;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAD11; (&#xD615;&#xAD11;) &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; biosensors &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC13C;&#xC11C; &#xAC10;&#xB2F9;&#xD560; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xD575; &#xC0B0;, polypeptides, &#xB4F1;&#xC758; &#xD0D0;&#xC9C0;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD575; &#xC0B0; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; biosensors&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACF5;&#xD559; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC19;&#xC740; biosensors&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84;&#xC790; &#xBE44;&#xCF58;&#xC744; &#xB118;&#xC5B4;: &#xAD11; &#xC13C;&#xC11C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; polypeptides&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC720;&#xB3C4; &#xC811;&#xB294;.

Muchos polip&#xE9;ptidos y prote&#xED;nas peque&#xF1;as pueden ser f&#xE1;cilmente dise&#xF1;ado de tal manera que s&#xF3;lo se pliegan al unirse un ligando diana espec&#xED;fica. Esta pareja enfoque de reconocimiento de destino con un cambio considerable en la estructura del pol&#xED;mero y la din&#xE1;mica. Los &#xFA;ltimos a&#xF1;os han visto el desarrollo de una serie de biosensores que par de estos grandes cambios a &#xF3;pticas f&#xE1;cilmente mensurables (fluorescente) salidas. Estos sensores permitirse la detecci&#xF3;n de una amplia variedad de objetivos macromoleculares que incluyen prote&#xED;nas, polip&#xE9;ptidos, y los &#xE1;cidos nucleicos. Aqu&#xED; se describe el dise&#xF1;o de biosensores tales, desde las primeras iteraciones como experimentos de ingenier&#xED;a de prote&#xED;nas, para el desarrollo de biosensores dirigidas a una gama de prote&#xED;nas y &#xE1;cidos nucleicos objetivos.

M&#xE1;s all&#xE1; de balizas moleculares: sensores &#xF3;pticos basados &#x200B;&#x200B;en el plegable de enlace inducida por prote&#xED;nas y polip&#xE9;ptidos

Kenneth Oh

Bio-Rad Laboratories

V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting