Derivation and Characterization of a Transgene-free Human Induced Pluripotent Stem Cell Line and Conversion into Defined Clinical-grade Conditions

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) can be generated with lentiviral-based reprogramming methodologies. However, traces of potentially oncogenic ...

University of California, Los Angeles (UCLA)

&#x6458;&#x8981;&#xFF1A; &#x7B80;&#x4ECB;&#xFF1A; OCT4 &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x53D1;&#x5C55;&#x3001; &#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x3001; &#x4FDD;&#x6301;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x5408;&#x6210; OCT4 mRNA &#x6700;&#x8FD1; &#xFF08;&#x5728;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F16;&#x7A0B;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF09; &#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6E7E; 11-7082 (BAY11)&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x90E8;&#x5206;&#x5730;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57FA;&#x4E8E; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0; OCT4 &#x8868;&#x8FBE;&#x540E;&#x6210;&#x4EBA;&#x4EBA;&#x4F53;&#x76AE;&#x80A4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x5408;&#x6210; mRNA (synRNA)&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5404;&#x79CD;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3; mRNA &#x5408;&#x6210;&#x540E;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x4E09;&#x5206;&#x5B50;-B18R&#x3001; BX795&#xFF0C;&#x548C; BAY11-&#x88AB;&#x7528;&#x5728;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x6269;&#x6563;&#x57FA;&#x4E8E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5229;&#x7528;&#x5168;&#x7403;&#x8F6C;&#x5F55; meta &#x5206;&#x6790;&#x52A0;&#x4E0A;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x6765;&#x6807;&#x8BC6; OCT4 &#x4E0B;&#x6E38;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; BAY11 &#x4E0B;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x76AE;&#x80A4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684; OCT4 &#x91CD;&#x73B0;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;OCT4 &#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E0B;&#x6E38; OCT4&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EE5;&#x524D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684; SPP1&#x3001; DUSP4 &#x548C; GADD45G&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8868;&#x793A;&#x7684; OCT4 &#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x65B0;&#x578B; OCT4 &#x6307;&#x8BA4;&#x4E0B;&#x6E38;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0; SLC16A9&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E4B;&#x540E; OCT4 &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x63D0;&#x5347;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; &#x7B2C;&#x4E00;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x663E;&#x793A;&#x5408;&#x6210; mRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x8FD9;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; BAY11&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x4E8E;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x968F;&#x540E;&#x9C81;&#x68D2;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x672A;&#x6765;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

BAY11 &#x589E;&#x5F3A; OCT4 &#x6210;&#x4EBA;&#x4EBA;&#x4F53;&#x76AE;&#x80A4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5408;&#x6210; mRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

ABSTRACT: INTRODUCTION: The OCT4 transcription factor is involved in many cellular processes, including development, reprogramming, maintaining pluripotency and differentiation. Synthetic OCT4 mRNA was recently used (in conjunction with other reprogramming factors) to generate human induced pluripotent stem cells. Here, we discovered that BAY 11-7082 (BAY11), at least partially through a NF-kappaB-inhibition based mechanism, could significantly increase the expression of OCT4 following transfection of synthetic mRNA (synRNA) into adult human skin cells. METHODS: We tested various chemical and molecular small molecules on their ability to suppress the innate immune response seen upon synthetic mRNA transfection. Three molecules-B18R, BX795, and BAY11- were used in immunocytochemical and proliferation based assays. We also utilized global transcriptional meta-analysis coupled with quantitative PCR to identify relative gene expression downstream of OCT4. RESULTS: We found that human skin cells cultured in the presence of BAY11 resulted in reproducible increased expression of OCT4 that did not inhibit normal cell proliferation. The increased levels of OCT4 resulted in significantly increased expression of genes downstream of OCT4, including the previously identified SPP1, DUSP4 and GADD45G, suggesting the expressed OCT4 was functional. We also discovered a novel OCT4 putative downstream target gene SLC16A9 which demonstrated significantly increased expression following elevation of OCT4 levels. CONCLUSIONS: For the first time we have shown that small molecule-based stabilization of synthetic mRNA expression can be achieved with use of BAY11. This small molecule based inhibition of innate immune responses and subsequent robust expression of transfected synthetic mRNAs may have multiple applications for future cell-based research and therapeutics.

BAY11 enhances OCT4 synthetic mRNA expression in adult human skin cells.

R&eacute;sum&eacute; : INTRODUCTION : facteur de transcription OCT4 The est impliqu&eacute; dans de nombreux processus cellulaires, y compris le d&eacute;veloppement, reprogrammation, maintien de pluripotence et diff&eacute;renciation. Synth&eacute;tique OCT4 ARNm a r&eacute;cemment &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e (en conjonction avec d&#39;autres facteurs de reprogrammation) pour g&eacute;n&eacute;rer des cellules souches humaines pluripotentes induites. Ici, nous avons d&eacute;couvert que la baie 11-7082 (BAY11), au moins partiellement gr&acirc;ce &agrave; un m&eacute;canisme de NF-kappaB-inhibition bas&eacute;, pouvant accro&icirc;tre consid&eacute;rablement l&#39;expression de OCT4 apr&egrave;s transfection des ARNm synth&eacute;tique (synRNA) dans les cellules de peau humaine adulte. M&eacute;thodes : Nous avons test&eacute; diff&eacute;rents chimiques et mol&eacute;culaires petites mol&eacute;cules sur leur capacit&eacute; &agrave; supprimer la r&eacute;ponse immunitaire inn&eacute;e, vue &agrave; la transfection d&#39;ADN messag&egrave;re synth&eacute;tique. Trois mol&eacute;cules-B18R, BX795 et BAY11 - servaient immunocytochimiques et prolif&eacute;ration selon les dosages. Nous avons utilis&eacute; aussi meta-analyse transcriptionnelle globale associ&eacute;e &agrave; la PCR quantitative pour identifier l&#39;expression du g&egrave;ne relative en aval de OCT4. R&Eacute;SULTATS : Nous avons constat&eacute; que les cellules de peau humaine cultiv&eacute;es en pr&eacute;sence de BAY11 entra&icirc;n&eacute; reproductible expression accrue de OCT4 qui n&#39;a pas inhib&eacute; la prolif&eacute;ration des cellules normales. L&#39;augmentation des niveaux de OCT4 a significativement augmentation de l&#39;expression des g&egrave;nes en aval de OCT4, SPP1, DUSP4 et GADD45G, sugg&eacute;rant que l&#39;expresse OCT4 fonctionnait pr&eacute;c&eacute;demment identifi&eacute;s. Nous avons aussi d&eacute;couvert un nouveau g&egrave;ne cible en aval putatif OCT4 SLC16A9 qui d&eacute;montre l&#39;expression significativement accrue suite &agrave; l&#39;&eacute;l&eacute;vation des niveaux de OCT4. CONCLUSIONS : Pour la premi&egrave;re fois, que nous avons montr&eacute; que petite stabilisation ax&eacute;e sur la mol&eacute;cule d&#39;ARNm synth&eacute;tique peut &ecirc;tre r&eacute;alis&eacute; avec utilisation de BAY11. Cette petite mol&eacute;cule bas&eacute;e l&#39;inhibition des r&eacute;ponses immunitaires inn&eacute;es et ult&eacute;rieure expression robuste des ARNm synth&eacute;tique transfect&eacute;es peut-&ecirc;tre avoir plusieurs applications de recherche sur les cellules et produits th&eacute;rapeutiques.

BAY11 am&eacute;liore OCT4 synth&eacute;tique expression de l&#39;ARNm dans les cellules de peau humaine adulte.

Zusammenfassung: Einleitung: The OCT4 &Uuml;bertragungfaktor engagiert sich in viele zellul&auml;re Prozesse, einschlie&szlig;lich Entwicklung, Neuprogrammierung, Aufrechterhaltung der Pluripotenz und Differenzierung. Synthetische OCT4-mRNA wurde vor kurzem (in Verbindung mit anderen Faktoren Neuprogrammierung) genutzt, um menschliche induzierten pluripotenten Stammzellen zu generieren. Hier entdeckten wir, dass BAY 11-7082 (BAY11), zumindest teilweise durch einen NF-KappaB-Hemmung basiert-Mechanismus, den Ausdruck des OCT4 nach Transfektion von synthetischen mRNA (SynRNA) in Erwachsenen menschlichen Hautzellen deutlich erh&ouml;hen k&ouml;nnte. Methoden: Wir testeten verschiedene chemische und Molekulare kleine Molek&uuml;le auf ihrer F&auml;higkeit, der angeborenen Immunantwort auf synthetische mRNA Transfektion gesehen zu unterdr&uuml;cken. Drei Molek&uuml;le-B18R, BX795 und BAY11 - dienten des Prozesses Immunocytochemical und Vermehrung Proben basiert. Wir genutzt auch globale transkriptionelle Meta-Analyse gepaart mit quantitativen PCR relative Genexpression stromabw&auml;rts des OCT4 zu identifizieren. Ergebnis: Wir fanden, dass menschliche Hautzellen in Anwesenheit von BAY11 kultivierten reproduzierbare erh&ouml;hte Expression von OCT4 gef&uuml;hrt, die nicht normale Zellvermehrung hemmen,. Die erh&ouml;hten Konzentration von OCT4 ergab deutlich erh&ouml;hte Expression von Genen stromabw&auml;rts des OCT4, einschlie&szlig;lich der zuvor identifizierten SPP1, DUSP4 und GADD45G, vorgeschlagen, die die exprimierten OCT4 funktionsf&auml;hig war. Wir entdeckten auch ein neuartiger OCT4 vermeintliche nachgeschaltete Ziel gen SLC16A9, die deutlich erh&ouml;hte Expression nach H&ouml;he OCT4 Level demonstriert. Schlussfolgerungen: Erstmals kann die Zeit, die wir, dass kleine niedermolekulare Stabilisierung des synthetischen mRNA Ausdruck gezeigt haben mit Einsatz von BAY11 erreicht werden. Diese niedermolekularen basierte Hemmung der angeborenen Immunantwort und nachfolgende robuste Ausdruck transfizierte synthetische mRNAs m&ouml;glicherweise mehrere Anwendungen f&uuml;r zellbasierte Zukunftsforschung und Therapeutika.

BAY11 verbessert OCT4 synthetische mRNA Ausdruck im Erwachsenen menschlichen Hautzellen.

ABSTRACT: Introduzione: fattore di trascrizione OCT4 The &egrave; coinvolto in molti processi cellulari, tra cui sviluppo, riprogrammazione, mantenimento della pluripotenza e differenziazione. Sintetico OCT4 mRNA &egrave; stato recentemente utilizzato (in combinazione con altri fattori di riprogrammazione) per generare cellule staminali pluripotenti indotte umana. Qui, abbiamo scoperto che BAY (BAY11), 11-7082 almeno parzialmente attraverso un meccanismo di NF-kappaB-inibizione basata, potrebbe aumentare significativamente l&#39;espressione di OCT4 seguito di transfezione di mRNA sintetici (synRNA) nelle cellule di pelle umana adulta. Metodi: Abbiamo testato vari chimici e molecolari piccole molecole sulla loro capacit&agrave; di sopprimere la risposta immunitaria innata visto su transfezione mRNA sintetici. Tre molecole-B18R, BX795 e BAY11 - sono stati utilizzati in immunocitochimica e proliferazione based assays. Abbiamo anche utilizzato transcriptional meta-analisi globale accoppiato con PCR quantitativa per identificare l&#39;espressione del gene relativo a valle di OCT4. RISULTATI: Abbiamo trovato che le cellule di pelle umana colture in presenza di BAY11 ha portato a riproducibile aumentata espressione di OCT4 che non inibiscono la proliferazione delle cellule normali. L&#39;aumento dei livelli di OCT4 causato significativamente aumentata espressione dei geni a valle di OCT4, inclusi precedentemente identificati SPP1, DUSP4 e GADD45G, suggerendo che l&#39;espresso OCT4 &egrave; stato funzionale. Abbiamo anche scoperto un romanzo OCT4 putativo downstream target gene SLC16A9 dimostrato significativamente aumentata espressione seguendo elevazione dei livelli di OCT4. CONCLUSIONI: Per la prima volta che abbiamo dimostrato che piccole stabilizzazione basata sulla molecola di espressione del mRNA sintetici ottenibile con l&#39;uso di BAY11. Questa piccola molecola base di inibizione della risposta immunitaria innata e successive robusta espressione dei mRNAs sintetico transfected pu&ograve; avere molteplici applicazioni per la ricerca futura cell-based e terapie.

BAY11 migliora OCT4 sintetica espressione del mRNA nelle cellule della pelle umana adulta.

&#x8981;&#x7D04;&#xFF1A; &#x5C0E;&#x5165;:&#x3001;OCT4 &#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x958B;&#x767A;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; OCT4 mRNA &#x306F;&#x3072;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B; (&#x4ED6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;) &#x3067;&#x6700;&#x8FD1;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D9;&#x30A4; 11-7082 (BAY11)&#x3001;NF-&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1; b-&#x6291;&#x5236;&#x8A55;&#x4FA1;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5408;&#x6210; mRNA (synRNA) &#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x7D9A;&#x304F;&#x5F0F; oct4 &#x306F;&#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;: &#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x30FB;&#x5206;&#x5B50;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5408;&#x6210; mRNA &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;3 &#x5206;&#x5B50;-B18R&#x3001;BX795&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; BAY11 &#x306B;&#x306F;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x3068;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3082;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30E1;&#x30BF;&#x306E;&#x89E3;&#x6790; oct4 &#x306F;&#x5834;&#x5408;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CF;&#x7684;&#x306A; PCR &#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#xFF1A; &#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7D30;&#x80DE; BAY11 &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F; OCT4 &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Oct4 &#x306F;&#x5834;&#x5408;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F; spp1 &#x7531;&#x6765;&#x3001;DUSP4&#x3001;GADD45G&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B; OCT4 &#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x306A;&#x3069;&#x3067;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x767A;&#x73FE; oct4 &#x306F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x4E0B;&#x6D41;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;oct4 &#x306F;&#x5834;&#x5408;&#x5024;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x306E;&#x5F8C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x5F0F;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x305F; OCT4 &#x63A8;&#x5B9A;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; SLC16A9 &#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;: &#x6700;&#x521D;&#x306E; BAY11 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x5408;&#x6210;&#x306E; mRNA &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x5F0F; transfected &#x5408;&#x6210; Mrna &#x306E;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

BAY11 OCT4 &#x5408;&#x6210; mRNA &#x767A;&#x73FE;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAC1C;&#xC694;: &#xC18C;&#xAC1C;: The OCT4 &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;, &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;, pluripotency&#xC640; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD569;&#xC131; OCT4 Mrna&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; (&#xB2E4;&#xB978; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;)&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCA0;&#xC774; 11-7082 (BAY11), NF-kappaB-&#xC5B5;&#xC81C; &#xAE30;&#xBC18; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C;&#xBD80; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD569;&#xC131; mRNA (synRNA)&#xC758; transfection &#xB2E4;&#xC74C; OCT4 &#xC2DD; &#xD574;&#xC9C8; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xBC95;: &#xD569;&#xC131; mRNA transfection &#xC2DC; &#xBCF8; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD654;&#xD559;&#xACFC; &#xBD84;&#xC790; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. 3 &#xBD84;&#xC790;-B18R, BX795, &#xBC0F; BAY11-immunocytochemical &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; transcriptional &#xBA54;&#xD0C0;-&#xBD84;&#xC11D; oct4&#xC758; &#xD558;&#xB958; &#xC0C1;&#xB300; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; PCR&#xC640; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C;: BAY11 &#xC874;&#xC7AC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C;&#xBD80; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; OCT4 &#xC7AC;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oct4&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; SPP1, DUSP4 &#xBC0F; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; oct4&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC548; GADD45G OCT4, &#xD558;&#xB958; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DD; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; OCT4 putative &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; SLC16A9 OCT4 &#xB808;&#xBCA8; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xACB0;&#xB860;: &#xCC98;&#xC74C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xADF8; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD569;&#xC131; mRNA &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; bay11&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; transfected &#xD569;&#xC131; Mrnas&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC2DD; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

BAY11 &#xC131;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C;&#xBD80; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; OCT4 &#xD569;&#xC131; mRNA &#xC2DD;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Resumen: Introducci&oacute;n: factor de trascripci&oacute;n OCT4 el participa en muchos procesos celulares, incluyendo el desarrollo, reprogramaci&oacute;n, manteniendo la pluripotencia y la diferenciaci&oacute;n. Sint&eacute;tico OCT4 mRNA fue utilizado recientemente (en conjunci&oacute;n con otros factores de reprogramaci&oacute;n) para generar c&eacute;lulas madre pluripotentes inducidas humanas. Aqu&iacute;, hemos descubierto que BAY 11-7082 (BAY11), al menos parcialmente mediante un mecanismo de NF-kappaB-inhibici&oacute;n de la base, podr&iacute;a aumentar significativamente la expresi&oacute;n de OCT4 siguiendo la transfecci&oacute;n del mRNA sint&eacute;tico (synRNA) en las c&eacute;lulas de piel humana para adultos. M&Eacute;TODOS: Probamos varias peque&ntilde;as mol&eacute;culas de qu&iacute;micas y moleculares sobre su capacidad para suprimir la respuesta inmunitaria innata vista sobre sint&eacute;tico transfecci&oacute;n de mRNA. Tres mol&eacute;culas-B18R, BX795 y BAY11 fueron utilizados en immunocytochemical y proliferaci&oacute;n basada en ensayos. Tambi&eacute;n utilizamos metan&aacute;lisis transcripcional global, juntado con la PCR cuantitativa para identificar genes relativa aguas abajo de OCT4. Resultados: Encontramos que las c&eacute;lulas de piel humana cultivadas en presencia de BAY11 dio lugar a reproducible expresi&oacute;n creciente de OCT4 que no inhiben la proliferaci&oacute;n celular normal. Los niveles crecientes de OCT4 produjo significativamente mayor expresi&oacute;n de genes corriente abajo de OCT4, previamente identificadas SPP1, DUSP4 y GADD45G, sugiriendo que el OCT4 expresada era funcional. Tambi&eacute;n descubrimos un novela gen putativo Diana OCT4 SLC16A9 que demostraron significativamente mayor expresi&oacute;n tras la elevaci&oacute;n de los niveles de OCT4. CONCLUSIONES: Por primera vez que hemos mostrado esa estabilizaci&oacute;n basadas en la mol&eacute;cula peque&ntilde;a de expresi&oacute;n de mRNA sint&eacute;tico puede lograrse con el uso de BAY11. Esta peque&ntilde;a mol&eacute;cula basada en la inhibici&oacute;n de la respuesta inmune innata y posterior robusta expresi&oacute;n de los mRNAs sint&eacute;tico transfected puede tener m&uacute;ltiples aplicaciones para futuras investigaciones basadas en c&eacute;lulas y terap&eacute;utica.

BAY11 aumenta la expresi&oacute;n del mRNA sint&eacute;tica OCT4 en c&eacute;lulas de piel humana para adultos.

Stage-specific embryonic antigen 3 (SSEA3) is a glycosphingolipid that has previously been used to identify cells with stem cell-like, multipotent, and pluripotent characteristics. A rare subpopulation of SSEA3-expressing cells exists in the dermis of adult human skin. These SSEA3-expressing cells undergo a significant increase in cell number in response to injury, suggesting a possible role in regeneration. These SSEA3-expressing regeneration-associated (SERA) cells were derived through primary cell culture, purified by fluorescence-activated cell sorting (FACS), and characterized. Longer in vitro culture of the primary skin cells led to lower SSEA3 expression stability after FACS-based purification, suggesting that the current culture conditions may need to be optimized to permit the large-scale expansion of SERA cells. The SERA cells demonstrated a global transcriptional state that was most similar to bone marrow- and fat-derived mesenchymal stem cells (MSCs), and the highest expressing SSEA3-expressing cells co-expressed CD105 (clone 35). However, while a rare population of MSCs was observed in primary human skin cell cultures that could differentiate into adipocytes, osteoblasts, or chondrocytes, SERA cells did not possess this differentiation capacity, suggesting that there are at least two different rare subpopulations in adult human skin primary cultures. The identification, efficient purification, and large-scale expansion of these rare subpopulations (SERA cells and MSCs) from heterogeneous adult human skin primary cell cultures may have applications for future patient-specific cellular therapies.

Human skin cells that express stage-specific embryonic antigen 3 associate with dermal tissue regeneration.

The reprogramming of a patient's somatic cells back into induced pluripotent stem cells (iPSCs) holds significant promise for future autologous cellular therapeutics. The continued presence of potentially oncogenic transgenic elements following reprogramming, however, represents a safety concern that should be addressed prior to clinical applications. The polycistronic "stem cell cassette" (STEMCCA), an excisable lentiviral reprogramming vector, provides, in our hands, the most consistent reprogramming approach that addresses this safety concern. Nevertheless, most viral integrations occur in genes, and exactly how the integration, epigenetic reprogramming, and excision of the STEMCCA reprogramming cassette influences those genes and whether these cells still have clinical potential are not yet known.

Agustin Vega-Crespo

Department of Molecular and Medical Pharmacology

University of California, Los Angeles (UCLA)

Derivation and Characterization of a Transgene-free Human Induced Pluripotent Stem Cell Line and Conversion into Defined Clinical-grade Conditions

Agustin Vega-Crespo

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular and Medical Pharmacology

University of California, Los Angeles (UCLA)

Derivation and Characterization of a Transgene-free Human Induced Pluripotent Stem Cell Line and Conversion into Defined Clinical-grade Conditions

Department of Molecular and Medical Pharmacology