Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs.  This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the ...

Emory University

&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x67E5;&#x662F;&#x5426;&#x80BA;&#x6CE1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63A7;&#x5236;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; O(2)(-) &#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176; (NOX) 2 (NOX2) &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x6301;&#x80BA;&#x6D41;&#x4F53;&#x7A33;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5916;&#x5730;&#x8D44;&#x4EA7;&#x7BA1;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x51C0;&#x5316;&#x80BA;&#x6CE1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; 1 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F3A;&#x52B2;&#x8868;&#x8FBE;&#x50AC;&#x5316;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; O(2)(-) (NOX2 &#x6216; gp91(phox)&#x3001; p22(phox)&#x3001; p67(phox)&#x3001; p47(phox)&#x3001; p40(phox) &#x4E9A;&#x57FA;&#xFF09; &#x7684;&#x5173;&#x952E; NOX &#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x548C; Rac1 &#x5728;&#x7B49;&#x7EA7;&#x5927;&#x5927;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x952E;&#x5165; 2 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x80BA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6F14;&#x793A; Rac1 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x548C;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x6839;&#x5C16;&#x8868;&#x9762;&#x9644;&#x8FD1;&#x9A7B;&#x7559;&#xFF0C;&#x800C; NOX2 coimmunoprecipitates &#x4E0E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x94A0;&#x901A;&#x9053;&#x5F20;&#x9707;&#xFF09;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Rac1 NOX2&#xFF0C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64; O(2)(-) &#x7248;&#x672C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426;&#x56E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x6216;&#x6FC0;&#x6D3B; Rac1 &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;1 microM Rac1 NSC23766 &#x6291;&#x5236;&#x51CF;&#x5C11;&#x80BA;&#x7EC6;&#x80DE; O(2)(-) &#x8F93;&#x51FA;&#x548C;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x56E0;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4ECE; 0.87 + 0.16 &#x81F3; 0.52 + 0.16 /-/-[&#x6E20;&#x9053; (N) &#x548C;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x6570; (P(o)) (NP(o)) + /-SE&#xFF0C;n = 6 &#xFF1B;P &lt; 0.05] &#x4E2D;&#x952E;&#x5165;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;NSC23766 (10 microM&#xFF09; &#x4ECE; + /-0.27 &#x81F3; 0.38 + /-0.10 1.16 &#x51CF;&#x5C11;&#x56E0; NP(o) (n = 6 1 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;)&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;10 ng/ml &#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (Rac1 &#x548C; O(2)(-) &#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x523A;&#x6FC0;&#x5668;&#xFF09; &#x589E;&#x52A0;&#x56E0; NP(o) &#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x548C; 2 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x7684;&#x503C;&#x3002;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684; NP(o) &#x503C;&#x4ECE; + /-0.21 &#x81F3; 0.91 + /-&#x5728; 0.28 0.48 &#x589E;&#x52A0; (P &lt; 0.05 &#xFF1B; n = 10&#xFF09;&#x3002;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5728;&#x56E0;&#x6D3B;&#x52A8;&#x8FD8;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x589E;&#x52A0;&#x4ECE; 0.40 + /-0.15 &#x81F3; 0.60 + /-0.23 &#x540E;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597; &#xFF08;n = 7&#xFF09;&#x3002;&#x87AF;&#x5408; O(2)(-) &#x7528; 2,266-tetramethylpiperidine-N-oxyl (&#x8282;&#x594F;) &#x590D;&#x5408;&#x963B;&#x6B62;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x56E0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x548C; 2 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; Rac1 &#x4ECB;&#x5BFC; NOX2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x5728;&#x56E0; O(2)(-) &#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

Rac1 &#x4ECB;&#x5BFC; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; O2-&#x89C4;&#x7BA1;&#x5728;&#x80BA;&#x6CE1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0A;&#x76AE;&#x94A0;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

We examine whether alveolar cells can control release of O(2)(-) through regulated NADPH oxidase (NOX) 2 (NOX2) activity to maintain lung fluid homeostasis. Using FACS to purify alveolar epithelial cells, we show that type 1 cells robustly express each of the critical NOX components that catalyze the production of O(2)(-) (NOX2 or gp91(phox), p22(phox), p67(phox), p47(phox), and p40(phox) subunits) as well as Rac1 at substantially higher levels than type 2 cells. Immunohistochemical labeling of lung tissue shows that Rac1 expression is cytoplasmic and resides near the apical surface of type 1 cells, whereas NOX2 coimmunoprecipitates with epithelial sodium channel (ENaC). Since Rac1 is a known regulator of NOX2, and hence O(2)(-) release, we tested whether inhibition or activation of Rac1 influenced ENaC activity. Indeed, 1 microM NSC23766 inhibition of Rac1 decreased O(2)(-) output in lung cells and significantly decreased ENaC activity from 0.87 +/- 0.16 to 0.52 +/- 0.16 [mean number of channels (N) and single-channel open probability (P(o)) (NP(o)) +/- SE, n = 6; P < 0.05] in type 2 cells. NSC23766 (10 microM) decreased ENaC NP(o) from 1.16 +/- 0.27 to 0.38 +/- 0.10 (n = 6 in type 1 cells). Conversely, 10 ng/ml EGF (a known stimulator of both Rac1 and O(2)(-) release) increased ENaC NP(o) values in both type 1 and 2 cells. NP(o) values increased from 0.48 +/- 0.21 to 0.91 +/- 0.28 in type 2 cells (P < 0.05; n = 10). In type 1 cells, ENaC activity also significantly increased from 0.40 +/- 0.15 to 0.60 +/- 0.23 following EGF treatment (n = 7). Sequestering O(2)(-) using 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-N-oxyl (TEMPO) compound prevented EGF activation of ENaC in both type 1 and 2 cells. In conclusion, we report that Rac1-mediated NOX2 activity is an important component in O(2)(-) regulation of ENaC.

Rac1-mediated NADPH oxidase release of O2- regulates epithelial sodium channel activity in the alveolar epithelium.

Nous examinons si les cellules alv&eacute;olaires peuvent contr&ocirc;ler les rejets de O(2)(-) par le biais de r&eacute;glement&eacute; NADPH oxydase (NOX) 2 (NOX2) activit&eacute; pour maintenir l&#39;hom&eacute;ostasie des liquides du poumon. &Agrave; l&#39;aide de FACS pour purifier les cellules &eacute;pith&eacute;liales alv&eacute;olaires, nous d&eacute;montrent que les cellules de type 1 robustement chacun des composants critiques NOX qui catalysent la production de O(2)(-) (sous-unit&eacute;s NOX2 ou gp91(phox), p22(phox), p67(phox), p47(phox) et p40(phox)) ainsi que Rac1 &agrave; des niveaux sensiblement plus &eacute;lev&eacute;s que ceux de type 2 cellules. IMMUNOHISTOCHEMICAL &eacute;tiquetage du tissu pulmonaire montre que Rac1 expression est cytoplasmique et se trouve pr&egrave;s de la surface apicale des cellules de type 1, alors que le canal de coimmunoprecipitates NOX2 avec sodium &eacute;pith&eacute;lial (ENaC). &Eacute;tant donn&eacute; que Rac1 est un r&eacute;gulateur connu de NOX2, et donc lib&eacute;ration O(2)(-), nous avons v&eacute;rifi&eacute; si l&#39;inhibition ou activation de Rac1 influenc&eacute; l&#39;activit&eacute; ENaC. En effet, 1 microM NSC23766 inhibition de Rac1 diminution du d&eacute;bit O(2)(-) dans les cellules pulmonaires et diminue significativement l&#39;activit&eacute; de l&#39;ENaC de 0,87 +/-0,16 &agrave; 0,52 +/-0,16 [signifie le nombre de canaux (N) et de la probabilit&eacute; d&#39;ouverture monocanal (P(o)) (NP(o)) +/-SE, n = 6 ; P &lt; 0,05] dans, tapez 2 cellules. NSC23766 (10 microM) a diminu&eacute; de NP(o) de l&#39;ENaC de 1,16 +/-0,27 &agrave; 0,38 +/-0,10 (n = 6 dans les cellules de type 1). &Agrave; l&#39;inverse, 10 ng/ml EGF (un stimulateur connu de lib&eacute;ration tant Rac1 et O(2)(-)) a augment&eacute; de valeurs ENaC NP(o) dans les deux cellules de type 1 et 2. Valeurs de NP(o) a augment&eacute; de 0,48 +/-0,21 &agrave; 0,91 +/-0.28 de type 2 cellules (P 0,05 &lt;; n = 10). Dans les cellules de type 1, activit&eacute; de l&#39;ENaC a aussi sensiblement augment&eacute; de 0,40 +/-0,15 &agrave; 0,60 +/-0,23 suite au traitement de l&#39;EGF (n = 7). O(2)(-) &agrave; l&#39;aide de 2 266-tetramethylpiperidine-N-oxyl (TEMPO) compos&eacute; de s&eacute;questrer emp&ecirc;chait l&#39;activation de EGF d&#39;ENaC dans les deux cellules de type 1 et 2. En conclusion, les auteurs rapportent que l&#39;activit&eacute; m&eacute;di&eacute;e par Rac1 NOX2 est un &eacute;l&eacute;ment important dans le r&egrave;glement O(2)(-) de l&#39;ENaC.

RAC1 m&eacute;di&eacute;e par la lib&eacute;ration de NADPH oxydase de O2 - r&eacute;glemente l&#39;activit&eacute; de canal sodium &eacute;pith&eacute;lial dans l&#39;&eacute;pith&eacute;lium alv&eacute;olaire.

Wir pr&uuml;fen, ob Alveolarzellen, Freigabe der O(2)(-) durch geregelten NADPH Oxydase (NOX) 2 (NOX2 steuern k&ouml;nnen) Aktivit&auml;t, Lunge fl&uuml;ssig Hom&ouml;ostase aufrechtzuerhalten. Mit FACS um alveolaren Epithelzellen zu reinigen, zeigen wir, dass Typ 1 Zellen jede kritische NOX-Komponente, die die Produktion von O(2)(-) (NOX2 oder gp91(phox), p22(phox), p67(phox), p47(phox) und p40(phox)-Untereinheiten) katalysieren robust sowie Rac1 bei wesentlich h&ouml;herer Ausdr&uuml;cken als 2 Zellen geben. Immunohistochemical Kennzeichnung von Lungengewebe zeigt, dass Rac1 Ausdruck zytoplasmatische und befindet sich nahe der apikalen Oberfl&auml;che von Typ-1-Zellen, w&auml;hrend NOX2 Coimmunoprecipitates mit epithelialen Natrium-Kanal (ENaC). Da Rac1 ein bekannter Regulator der NOX2 ist und somit O(2)(-) release, haben wir getestet, ob Hemmung oder Aktivierung von Rac1 ENaC Aktivit&auml;t beeinflusst. In der Tat 1 MicroM NSC23766 Hemmung der Rac1 sank O(2)(-) Ausgabe in Lungenzellen und deutlich abgemildert ENaC-Aktivit&auml;t von 0,87 +/-+/-0.16 0.16 zu 0,52 [durchschnittliche Anzahl der Kan&auml;le (N) und ein-Kanal offen Wahrscheinlichkeit (P(o)) (NP(o)) +/-SE, n = 6; P &lt; 0,05] geben Sie in 2 Zellen. NSC23766 (10 MicroM) sank ENaC-NP(o) von 1.16 +/-0.27 bis 0,38 +/-0,10 (n = 6 in Typ-1-Zellen). Umgekehrt erh&ouml;ht 10 ng/ml EGF (eine bekannte Stimulator Rac1 und O(2)(-) Release) ENaC NP(o) Werte in beiden Zellen Typ 1 und 2. NP(o) Werte stieg von 0,48 +/-0.21 bis 0.91 +/-0.28 in Typ 2 Zellen (P &lt; 0,05; n = 10). Typ 1-Zellen, ENaC-Aktivit&auml;t auch deutlich erh&ouml;hte von 0.40 +/-0,15 bis 0.60 +/-0.23 nach EGF-Behandlung (n = 7). O(2)(-) mit 2.266-Tetramethylpiperidine-N-Oxyl (TEMPO) Substanz absondern verhindert EGF-Aktivierung der ENaC in beiden Zellen Typ 1 und 2. Abschlie&szlig;end berichten wir, dass Rac1-vermittelte NOX2 Aktivit&auml;t ein wichtiger Bestandteil in O(2)(-) Verordnung ENAC.

Rac1-vermittelte NADPH Oxydase Freisetzung von O2 - regelt epitheliale Natrium Channel-Aktivit&auml;ten in die alveol&auml;re Epithel.

Esaminiamo se cellule alveolari possono controllare il rilascio di O(2)(-) attraverso regolamentato NADPH ossidasi (NOX) 2 (NOX2) attivit&agrave; per mantenere l&#39;omeostasi del fluido del polmone. Utilizzando FACS per purificare le cellule epiteliali alveolari, mostriamo che le cellule tipo 1 robustamente esprimono ciascuno dei componenti critici NOX che catalizzano la produzione di O(2)(-) (subunit&agrave; NOX2 o gp91(phox), p22(phox), p67(phox), p47(phox) e p40(phox)) cos&igrave; come Rac1 a livelli notevolmente pi&ugrave; elevati di tipo 2 celle. Contrassegno di immunoistochimica del tessuto polmonare mostra che Rac1 espressione &egrave; citoplasmatica e risiede vicino alla superficie apicale delle cellule di tipo 1, mentre NOX2 coimmunoprecipitates con sodio epitelio canale (ENaC). Poich&eacute; Rac1 &egrave; un noto regolatore di NOX2, e quindi rilasciare O(2)(-), abbiamo testato se l&#39;inibizione o attivazione di Rac1 influenzato attivit&agrave; di ENaC. Infatti, 1 microM NSC23766 inibizione di Rac1 diminuito O(2)(-) uscita in cellule polmonari e ridotto notevolmente l&#39;attivit&agrave; di ENaC da 0,87 + /-0.16 a 0,52 + 0,16 [: numero di canali (N) e probabilit&agrave; open single-channel (P(o)) (NP(o)) + /-SE, n = 6; P &lt; 0.05] in tipo 2 celle. NSC23766 (10 microM) diminuito ENaC NP(o) da 1.16 + 0,27 a 0,38 + 0.10 (n = 6 nelle cellule di tipo 1). Al contrario, 10 ng/ml EGF (un noto stimolatore del rilascio sia Rac1 e O(2)(-)) aumentato ENaC NP(o) valori in entrambe le celle di tipo 1 e 2. NP(o) valori aumentati da 0,48 + 0,21 a 0,91 + 0,28 nel tipo 2 celle (P &lt; 0.05; n = 10). Nelle cellule di tipo 1, ENaC attivit&agrave; anche significativamente aumentato da 0.40 + /-0.15 a 0.60 + 0,23 dopo il trattamento di EGF (n = 7). Sequestranti O(2)(-) usando 2.266-tetrametilpiperidina-N-oxyl (TEMPO) composto ha impedito l&#39;attivazione EGF di ENaC in entrambe le celle di tipo 1 e 2. In conclusione, segnaliamo che attivit&agrave; NOX2 Rac1-mediata &egrave; una componente importante nella O(2)(-) regolamento dell&#39;ENaC.

Rac1-mediata di rilascio ossidasi di NADPH di O2 - disciplina attivit&agrave; del canale epiteliale del sodio nell&#39;epitelio alveolare.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x80BA;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE; O(2)(-) &#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x898F;&#x5236;&#x306E; NADPH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC; (NOX) 2 (NOX2) &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x80BA;&#x306E;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80BA;&#x80DE;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6D44;&#x5316;&#x3059;&#x308B; FACS &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x9811;&#x5065; O(2)(-) (NOX2 &#x307E;&#x305F;&#x306F; gp91(phox)&#x3001;p22(phox)&#x3001;p67(phox)&#x3001;p47(phox)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; p40(phox) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;) &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; NOX &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5404; Rac1 2 &#x30BB;&#x30EB;&#x5165;&#x529B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x3068;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NOX2 coimmunoprecipitates &#x3068;&#x4E0A;&#x76AE;&#x578B;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; (ENaC) &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x80BA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051; Rac1 &#x5F0F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x3001;1 &#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9802;&#x7AEF;&#x8868;&#x9762;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Rac1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3084; ENaC &#x6D3B;&#x52D5;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B; Rac1 &#x304C;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E; NOX2&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3086;&#x3048; O(2)(-) &#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x3001;1 microM Rac1 &#x306E; NSC23766 &#x963B;&#x5BB3; O(2)(-) &#x51FA;&#x529B;&#x80BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;, ENaC &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3; 0.87 &plusmn; 0.16 &#x306B; 0.52 &plusmn; 0.16 &#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11; [&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; (N)&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x7A2E;&#x6570; (P(o)) (NP(o)) &plusmn; SE, n = 6;P 0.05 &lt;] 2 &#x3064;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NSC23766 &#xFF08;10 microM) &#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F; ENaC NP(o) 1.16 &plusmn; 0.27 &#xFF5E; 0.38 &plusmn; 0.10 &#x304B;&#x3089; (n = 6 &#x578B; 1 &#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;10 ng/ml EGF (Rac1 &#x3068; O(2)(-) &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF09; ENaC NP(o) &#x4E21;&#x65B9; 1 &#x3068; 2 &#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5024;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;0.21 &#x306B; 0.91 &#x3067; 0.28 &plusmn; &plusmn; 0.48 &#x304B;&#x3089;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F; NP(o) &#x5024;&#x306F;&#x3001;2 &#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5165;&#x529B; (P 0.05 &lt;; n = 10)&#x3002;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x30BB;&#x30EB;&#x3067; ENaC &#x6D3B;&#x52D5;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0; 0.15 &#x306B; 0.60 EGF &#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C; 0.23 &plusmn; &plusmn; 0.40 &#x304B;&#x3089; (n = 7)&#x3002;2,266-&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D4;&#x30DA;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;-N-&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB; (&#x30C6;&#x30F3;&#x30DD;) &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; O(2)(-) &#x3092;&#x9694;&#x96E2; ENaC &#x4E21;&#x65B9; 1 &#x3068; 2 &#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; EGF &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;Rac1 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; NOX2 &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5; O(2)(-) &#x8ABF;&#x7BC0; ENaC &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rac1 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; NADPH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; O2 - &#x80BA;&#x80DE;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3067;&#x4E0A;&#x76AE;&#x578B;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xCE58;&#xACBD; &#xC140; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; (NOX) 2 (NOX2)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; O(2)(-)&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xBD80; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD3D0; &#xC720;&#xCCB4; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. FACS&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3D0; &#xD3EC; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC815;&#xD654; &#xD558;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD0C0;&#xC785; 1 &#xC140; &#xACAC;&#xACE0; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; O(2)(-) (NOX2 &#xB610;&#xB294; gp91(phox), p22(phox), p67(phox), p47(phox), &#xBC0F; p40(phox) &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;)&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC9C4;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; NOX &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC01; 2 &#xC140; &#xC785;&#xB825; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; Rac1 &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3D0; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; Immunohistochemical &#xB77C;&#xBCA8; Rac1 &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC774;&#xBA70; 1 &#xC140;&#xC758; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD45C;&#xBA74; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; NOX2 coimmunoprecipitates&#xC640; &#xC0C1;&#xD53C; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; (ENaC) &#xBC18;&#xBA74; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xD6C4; Rac1 NOX2&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; O(2)(-) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574; &#xB610;&#xB294; Rac1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; ENaC &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4;, 1 microM rac1&#xC758; NSC23766 &#xC800;&#xD574; &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; O(2)(-) &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xD06C;&#xAC8C; 0.52 + 0.16 0.16 &plusmn; 0.87&#xC5D0;&#xC11C; ENaC &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C; [&#xCC44;&#xB110; (N) &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960;&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC758;&#xBBF8; &#xD55C;&#xB2E4; (P(o)) (NP(o)) SE + n = 6; P 0.05 &lt;]&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC140;&#xC744; &#xC785;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. NSC23766 (10 microM) 0.38 0.10 &plusmn; 0.27 + 1.16&#xC5D0;&#xC11C; ENaC NP(o) &#xAC10;&#xC18C; (n 6 &#xD0C0;&#xC785;-1 &#xC140;&#xC5D0; =). &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; 10 ng/ml EGF (Rac1 &#xBC0F; O(2)(-) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC790;&#xADF9;) &#xB450; &#xC720;&#xD615; 1&#xACFC; 2 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; ENaC NP(o) &#xAC12;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. NP(o) &#xAC12; 0.21 0.91&#xC5D0;&#xC11C; 0.28 &plusmn; &plusmn; 0.48&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC785;&#xB825; 2 &#xC140; (P 0.05 &lt;; n = 10). &#xD0C0;&#xC785;-1 &#xC140; ENaC &#xD65C;&#xB3D9; &#xB610;&#xD55C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; 0.40 0.60 EGF &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; 0.23 + 0.15 +&#xC5D0;&#xC11C; (n = 7). O(2)(-) 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-N-oxyl (&#xD15C;&#xD3EC;) &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACA9;&#xB9AC; ENaC &#xB450; &#xC720;&#xD615; 1&#xACFC; 2 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; EGF &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; NOX2 Rac1 &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; Enac&#xC758; O(2)(-) &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

O2-NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xCD9C;&#xC2DC; Rac1 &#xC911;&#xC7AC; &#xCE58;&#xACBD; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Examinamos si c&eacute;lulas alveolares pueden controlar la liberaci&oacute;n de O(2)(-) a trav&eacute;s de regulado NADPH oxidasa (NOX) 2 (NOX2) actividad para mantener la homeostasis de l&iacute;quido pulmonar. Usando FACS para purificar las c&eacute;lulas epiteliales alveolares, mostramos que c&eacute;lulas de tipo 1 s&oacute;lidamente cada uno de los componentes cr&iacute;ticos de NOX que catalizan la producci&oacute;n de O(2)(-) (subunidades NOX2 o gp91(phox), p22(phox), p67(phox), p47(phox) y p40(phox)) expresan adem&aacute;s Rac1 nivel substancialmente m&aacute;s alto que tipo 2 c&eacute;lulas. Etiquetado immunohistochemical del tejido pulmonar demuestra que expresi&oacute;n de Rac1 es citopl&aacute;smico y reside cerca de la superficie apical de las c&eacute;lulas de tipo 1, mientras que el canal de coimmunoprecipitates NOX2 con epitelial del sodio (ENaC). Rac1 es un regulador conocido de NOX2, y por lo tanto liberar O(2)(-), probamos si la inhibici&oacute;n o activaci&oacute;n de Rac1 influyeron actividad de ENaC. De hecho, 1 microM NSC23766 inhibici&oacute;n de Rac1 disminuci&oacute;n del gasto O(2)(-) en las c&eacute;lulas del pulm&oacute;n y redujo significativamente la actividad de ENaC de 0.87 +/-0.16 a 0.52 +/-0.16 [significa n&uacute;mero de canales (N) y un canal abierto probabilidad (P(o)) (NP(o)) + /-SE, n = 6; P &lt; 0.05] en tipo 2 c&eacute;lulas. NSC23766 (10 microM) disminuy&oacute; ENaC NP(o) de 1.16 +/-0.27 a 0,38 +/-0.10 (n = 6 en c&eacute;lulas de tipo 1). Por el contrario, 10 ng/ml EGF (un conocido estimulador de liberaci&oacute;n tanto Rac1 y O(2)(-)) aument&oacute; ENaC NP(o) valores en ambas c&eacute;lulas de tipo 1 y 2. NP(o) valores aumentados de 0.48 +/-0.21 a 0,91 +/-0.28 en tipo 2 c&eacute;lulas (P 0.05 &lt;; n = 10). En c&eacute;lulas de tipo 1, ENaC actividad tambi&eacute;n aument&oacute; significativamente desde 0.40 +/-0.15 a 0.60 +/-0.23 despu&eacute;s del tratamiento de EGF (n = 7). O(2)(-) uso de 2.266-tetramethylpiperidine-N-oxyl (TEMPO) compuesto de secuestro impidi&oacute; activaci&oacute;n de EGF de ENaC en ambas c&eacute;lulas de tipo 1 y 2. En conclusi&oacute;n, se reporta que actividad mediada por Rac1 NOX2 es un componente importante en la regulaci&oacute;n de la O(2)(-) de la ENaC.

RAC1 mediada por la liberaci&oacute;n de NADPH oxidasa de O2 - regula la actividad del canal de sodio epitelial en el epitelio alveolar.

&#x82E5;&#x8981;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7EF4;&#x6301;&#x80BA;&#x6DB2;&#x5E73;&#x8861;&#x4F53;&#x5185;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; (ROS) &#x548C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x94A0;&#x901A;&#x9053;&#x5F20;&#x9707;&#xFF09; &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x6574;&#x4F53;&#x52A8;&#x7269;&#x6210;&#x50CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6D3B; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x900F;&#x89C6;&#x542F;&#x7528;&#x91CF;&#x5316;&#x7684; C57BL/6J &#x5C0F;&#x9F20;&#x80BA;&#x90E8;&#x7684;&#x7A7A;&#x6C14;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6D41;&#x4F53;&#x5185;&#x5BB9;&#x63D0;&#x51FA;&#x8D28;&#x7591; (IT) &#x7684;&#x6C14;&#x7BA1;&#x5185;&#x704C;&#x6CE8;&#x7684;&#x76D0;&#x6C34; &#xFF1B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x5229;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x80BA;&#x6E7F;&#x5230;&#x5E72;&#x91CD;&#x91CF;&#x6BD4;&#x7387;&#x548C;&#x57C3;&#x6587;&#x65AF;&#x84DD;&#x8272;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x80BA;&#x6C34;&#x80BF;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x3002;&#x5728;&#x5DF2;&#x5B9E;&#x65BD;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8FDB;&#x884C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x80BA;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x654F;&#x611F;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x6C34;&#x7535; Cy7&#xFF0C;&#x7531; IT &#x704C;&#x8F93;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x4E0E; Rac-1 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;NSC23766&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80BA;&#x6CE1;&#x6C34;&#x6D78;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x80BA;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x51CF;&#x5C11;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x7B26;&#x5408; Nox2 &#x80BA;&#x6CE1;&#x6DB2;&#x4F53;&#x5E73;&#x8861;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;Nox2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x7A7A;&#x6C14;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6D41;&#x4F53;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x63A7;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x704C;&#x8F93;&#x4E0E;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x7684; C57BL/6J &#x80BA;&#x90E8;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6025;&#x6027;&#x80BA;&#x5185;&#x6DB2;&#x4F53;&#x6E05;&#x9664;&#x4E0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x7531;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x6E05;&#x9664;&#x5242; tetramethylpiperidine-N-oxyl (&#x8282;&#x594F;) &#x5E9F;&#x9664;&#x3002;&#x6025;&#x6027;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x589E;&#x52A0;&#x5927;&#x9F20; 1 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF1B; 20 pS &#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x56E0;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5E73;&#x5747;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387; (NPo) &#x589E;&#x52A0;&#x4ECE; 0.14 &plusmn; 0.04 &#x81F3; 0.62 &plusmn; 0.23&#x3002;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9644;&#x52A0;&#x5F55;&#x97F3;&#x4E2D;&#x7684;&#x8282;&#x594F;&#x5E94;&#x7528;&#x9020;&#x6210;&#x56E0;&#x975E;&#x8425;&#x5229;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7ACB;&#x5373;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#x81F3; 0.04 &plusmn; 0.03&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;ROS &#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x56E0;&#x6D3B;&#x52A8;&#x523A;&#x6FC0;&#x80BA;&#x6DB2;&#x6E05;&#x5173;&#x3002;

Nadph &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x89C4;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x94A0;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x80BA;&#x6DB2;&#x5E73;&#x8861;&#x4F53;&#x5185;&#x901A;&#x8FC7; OFormula &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

To define roles for reactive oxygen species (ROS) and epithelial sodium channel (ENaC) in maintaining lung fluid balance in vivo, we used two novel whole animal imaging approaches. Live X-ray fluoroscopy enabled quantification of air space fluid content of C57BL/6J mouse lungs challenged by intratracheal (IT) instillation of saline; results were confirmed by using conventional lung wet-to-dry weight ratios and Evans blue as measures of pulmonary edema. Visualization and quantification of ROS produced in lungs was performed in mice that had been administered a redox-sensitive dye, hydro-Cy7, by IT instillation. We found that inhibition of NADPH oxidase with a Rac-1 inhibitor, NSC23766, resulted in alveolar flooding, which correlated with a decrease in lung ROS production in vivo. Consistent with a role for Nox2 in alveolar fluid balance, Nox2(-/-) mice showed increased retention of air space fluid compared with wild-type controls. Interestingly, fluoroscopic analysis of C57BL/6J lungs IT instilled with LPS showed an acute stimulation of lung fluid clearance and ROS production in vivo that was abrogated by the ROS scavenger tetramethylpiperidine-N-oxyl (TEMPO). Acute application of LPS increased the activity of 20 pS nonselective ENaC channels in rat type 1 cells; the average number of channel and single-channel open probability (NPo) increased from 0.14 Â± 0.04 to 0.62 Â± 0.23. Application of TEMPO to the same cell-attached recording caused an immediate significant decrease in ENaC NPo to 0.04 Â± 0.03. These data demonstrate that, in vivo, ROS has the capacity to stimulate lung fluid clearance by increasing ENaC activity.

Nadph oxidase regulates alveolar epithelial sodium channel activity and lung fluid balance in vivo via OFormula signaling.

Pour d&eacute;finir des r&ocirc;les pour les esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;oxyg&egrave;ne (ROS) et le canal sodique &eacute;pith&eacute;lial (ENaC) &agrave; maintenir l&#39;&eacute;quilibre hydro-&eacute;lectrolytique poumon in vivo, nous avons utilis&eacute; deux approches d&#39;imagerie animaux. Direct quantification de fluoroscopie a permis aux rayons x de l&#39;espace a&eacute;rien fluide contenu des poumons de souris C57BL/6J contest&eacute;e par intratrach&eacute;ale (IT) l&#39;instillation de s&eacute;rum physiologique ; r&eacute;sultats ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s &agrave; l&#39;aide de rapports de poids humide &agrave; s&eacute;cher de pulmonaire conventionnelle et de bleu Evans comme mesures d&#39;un oed&egrave;me pulmonaire. Visualisation et quantification de ROS produites dans les poumons a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e chez les souris qui avaient &eacute;t&eacute; administr&eacute;s un colorant redox-sensitive, hydro-Cy7, par instillation de TI. Nous avons trouv&eacute; que l&#39;inhibition de la NADPH oxydase avec un Rac-1 inhibiteur, NSC23766, a donn&eacute; lieu &agrave; une inondation alv&eacute;olaire, corr&eacute;l&eacute;e avec une diminution de la production de ROS pulmonaire in vivo. Compatible avec un r&ocirc;le dans l&#39;&eacute;quilibre des fluides alv&eacute;olaire Nox2, Nox2(-/-) souris ont montr&eacute; une r&eacute;tention accrue du fluide de l&#39;espace a&eacute;rien par rapport aux t&eacute;moins de type sauvage. Fait int&eacute;ressant, radioscopique analyse des poumons C57BL/6J QU&#39;IL a instill&eacute; avec LPS a montr&eacute; une stimulation aigu&euml; d&#39;&eacute;limination du liquide des poumons et de la production de ROS in vivo qui a &eacute;t&eacute; abrog&eacute;e par le pi&eacute;geur ROS tetramethylpiperidine-N-oxyl (TEMPO). Application aigu&euml; de LPS augmente l&#39;activit&eacute; de 20 canaux SP non s&eacute;lectifs ENaC dans les cellules de rats de type 1 ; le nombre moyen de canal et de la probabilit&eacute; d&#39;ouverture monocanal (NPo) a augment&eacute; de 0,14 &plusmn; 0,04 &agrave; 0,62 &plusmn; 0,23. Application du TEMPO &agrave; la m&ecirc;me cellule-attach&eacute;e d&#39;enregistrement a entra&icirc;n&eacute; une diminution importante imm&eacute;diate ENaC NPo &agrave; &plusmn; 0,04 0,03. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que, in vivo, ROS a la capacit&eacute; de stimuler l&#39;&eacute;limination du liquide des poumons en augmentant l&#39;activit&eacute; de l&#39;ENaC.

NADPH oxydase r&eacute;gule l&#39;activit&eacute; du canal sodium &eacute;pith&eacute;lial alv&eacute;olaire et &eacute;quilibre hydro-&eacute;lectrolytique poumon in vivo par OFormula de signalisation.

Um Rollen f&uuml;r reaktive Sauerstoffspezies (ROS) und epitheliale Natriumkanal (ENaC) bei der Aufrechterhaltung der Lunge Fl&uuml;ssigkeitsbilanz in-vivo zu definieren, haben wir zwei neue ganze bildgebenden Ans&auml;tze verwendet. Live R&ouml;ntgen Durchleuchtung aktiviert Quantifizierung der Luftraum fl&uuml;ssig Inhalt der C57BL/6J Maus Lungen herausgefordert durch intratracheale (IT) Instillation von salzigem; Ergebnisse wurden best&auml;tigt, mit konventionellen Lunge nass-trocken-Gewicht-Verh&auml;ltnis und Evans Blau wie Ma&szlig;nahmen der Lungen&ouml;dem. Visualisierung und Quantifizierung von ROS in Lunge produziert wurde durchgef&uuml;hrt in den M&auml;usen, die verabreicht wurden, hatten eine Redox-Sensitive Farbstoff, Hydro-Cy7, von IT-Instillation. Wir fanden, dass Hemmung der NADPH Oxydase mit einem Rac-1 Inhibitor, NSC23766, f&uuml;hrte zu alveol&auml;ren &Uuml;berschwemmungen, die mit einem R&uuml;ckgang der Lunge ROS Produktion in-vivo korreliert. In &Uuml;bereinstimmung mit eine Rolle f&uuml;r Nox2 in alveol&auml;re Fl&uuml;ssigkeitsbilanz, zeigte Nox2(-/-) M&auml;use Beibehaltungsdauer erh&ouml;ht Luftraum Fl&uuml;ssigkeit im Vergleich zu Wildtyp Steuerelemente. Interessanterweise zeigten fluoroskopischer Analyse der C57BL/6J-Lungen, die es mit LPS eingefl&ouml;&szlig;t einer akuten Stimulation der Lunge fl&uuml;ssig Abstands- und ROS-Produktion in-vivo, die durch die ROS Aasfresser Tetramethylpiperidine-N-Oxyl (TEMPO) aufgehoben wurde. Akute Anwendung der LPS erh&ouml;ht die Aktivit&auml;t von 20 pS unselektiv ENaC Kan&auml;le in Ratte-Typ 1-Zellen; die durchschnittliche Anzahl der Kanal und Einkanal-offene Wahrscheinlichkeit (NPo) stieg von 0,14 &plusmn; 0,04 bis 0.62 &plusmn; 0,23. Anwendung von TEMPO in die gleiche Zelle verbundene Aufnahme verursacht einen sofortigen betr&auml;chtlicher R&uuml;ckgang ENaC NPo 0,04 &plusmn; 0,03. Diese Daten zeigen, dass es in vivo ROS die F&auml;higkeit Lunge fl&uuml;ssige Abfertigung zu f&ouml;rdern, indem die Erh&ouml;hung ENaC-Aktivit&auml;t besitzt.

NADPH Oxydase regelt alveol&auml;re epitheliale Natrium Channel-Aktivit&auml;ten und Lunge Fl&uuml;ssigkeitsbilanz in-vivo per OFormula zu signalisieren.

Per definire i ruoli per le specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS) e canale epiteliale del sodio (ENaC) mantenimento equilibrio fluido polmonare in vivo, abbiamo utilizzato due approcci di imaging animali intero romanzo. Quantificazione di fluoroscopia abilitato radiografia diretta del fluido contenuto dello spazio aereo dei polmoni del mouse C57BL/6J sfidato da intratracheale (IT) instillazione di soluzione fisiologica; risultati sono stati confermati mediante rapporti di peso a secco e umido del polmone convenzionali ed Evans blue come misure di edema polmonare. Visualizzazione e quantificazione di ROS prodotte nei polmoni &egrave; stata eseguita nei topi che erano stati somministrati a tintura di redox-sensibili, idro-Cy7, mediante instillazione di IT. Abbiamo trovato che l&#39;inibizione della NADPH ossidasi con un Rac-1 inibitore, NSC23766, ha provocato inondazioni alveolare, che &egrave; correlata con una diminuzione della produzione di ROS polmonare in vivo. Coerente con un ruolo per Nox2 in equilibrio fluido alveolare, Nox2(-/-) topi ha mostrato maggiore ritenzione di fluido aria spazio rispetto ai controlli wild-type. &Egrave; interessante notare che, fluoroscopica analisi dei polmoni C57BL/6J che instillato con LPS ha mostrato un&#39;acuta stimolazione del gioco fluido polmonare e produzione di ROS in vivo che &egrave; stata abolita dal ROS scavenger tetrametilpiperidina-N-oxyl (TEMPO). Applicazione acuta di LPS aumentato l&#39;attivit&agrave; di 20 pS non selettivi ENaC canali in cellule di tipo 1 del ratto; il numero medio di canale e monocanale aperta probabilit&agrave; (NPo) aumentato da 0,14 &plusmn; 0,04 a 0,62 &plusmn; 0,23. Applicazione del TEMPO per la registrazione stessa cella collegata ha causato un immediato calo significativo ENaC NPo a 0,04 &plusmn; 0,03. Questi dati dimostrano che, in vivo, ROS ha la capacit&agrave; di stimolare fluido clearance polmonare aumentando attivit&agrave; di ENaC.

NADPH ossidasi regola la attivit&agrave; del canale sodio epiteliali alveolari ed equilibrio fluido polmonare in vivo tramite segnalazione OFormula.

In vivo &#x80BA;&#x306E;&#x4F53;&#x6DB2;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E; (ROS) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E0A;&#x76AE;&#x578B;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; (ENaC) &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;C57bl/6 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80BA;&#x306E;&#x7A7A;&#x6C17;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x6D41;&#x4F53;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; x &#x7DDA;&#x900F;&#x8996;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x6C17;&#x7BA1; (IT) &#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x98DF;&#x5869;&#x6C34;&#x6CE8;&#x5165;&#x6311;&#x6226;;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x80BA;&#x6E7F;&#x4E7E;&#x71E5;&#x91CD;&#x91CF;&#x6BD4;&#x3068;&#x30A8;&#x30D0;&#x30F3;&#x30B9; &#x30D6;&#x30EB;&#x30FC;, &#x80BA;&#x6C34;&#x816B;&#x306E;&#x63AA;&#x7F6E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x80BA;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F; ROS &#x6295;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x8272;&#x7D20;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;-Cy7 IT &#x6CE8;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x306F; in vivo &#x80BA; ROS &#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x305F;&#x80BA;&#x80DE;&#x6D2A;&#x6C34;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3001;Rac 1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;NSC23766&#x3001;NADPH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x6B6F;&#x69FD;&#x4F53;&#x6DB2;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Nox2 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;Nox2(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x7A7A;&#x6C17;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x4FDD;&#x6301;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;LPS &#x3092;&#x6559;&#x3048;&#x8FBC;&#x3093;&#x3060; c57bl/6 &#x80BA;&#x306E; x &#x7DDA;&#x900F;&#x8996;&#x5206;&#x6790;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#x80BA;&#x6D41;&#x4F53;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068; ROS &#x751F;&#x7523; in vivo &#x306F;&#x3001;ROS &#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC; &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D4;&#x30DA;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;-N-&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; &#xFF08;&#x30C6;&#x30F3;&#x30DD;&#xFF09; &#x3044;&#x305F; abrogated &#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;LPS &#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; 20 pS &#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684; ENaC &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; 1 &#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x78BA;&#x7387; &#xFF08;npo &#x6CD5;&#x4EBA;&#xFF09; &#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x6570;&#x304B;&#x3089; 0.14 &plusmn; &plusmn; 0.04 &#x306B; 0.62 0.23 &#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C6;&#x30F3;&#x30DD;&#x306E;&#x540C;&#x3058;&#x30BB;&#x30EB;&#x4ED8;&#x8A18;&#x9332;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x3001;ENaC NPo &#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x6E1B;&#x5C11; 0.04 &plusmn; 0.03 &#x306B;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;in vivo ROS ENaC &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x80BA;&#x6D41;&#x4F53;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Nadph &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x80BA;&#x80DE;&#x4E0A;&#x76AE;&#x578B;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3068; OFormula &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x80BA;&#x6C34;&#x5206;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0; &#xC720;&#xCCB4; &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; (&#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;)&#xC640; &#xC0C1;&#xD53C; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; (ENaC) &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB450; &#xC18C;&#xC124; &#xC804;&#xCCB4; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0;. C57BL/6J &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD3D0;&#xC758; &#xACF5;&#xAE30; &#xACF5;&#xAC04; &#xC720;&#xCCB4; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; x-&#xC120; &#xD22C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xB3C4;&#xC804; (IT) intratracheal&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5FC;;&#xC758; &#xBB38;&#xC81C; &#xD3D0;&#xBD80;&#xC885;&#xC758; &#xCE21;&#xC815;&#xAC12;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD3D0; &#xC6FB; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774; &#xBB34;&#xAC8C; &#xBE44;&#xC728; &#xBC0F; &#xC5D0;&#xBC18;&#xC2A4; &#xBE14;&#xB8E8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xD3D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xC758; &#xBD80; &#xB7C9; &#xD22C;&#xC5EC; &#xD588;&#xB2E4; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589;&#xD55C; redox &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC;, IT &#xC8FC;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xD558;&#xC774;&#xB4DC;&#xB85C;-Cy7. &#xADF8;&#xB294; Rac-1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, NSC23766, &#xCE58;&#xACBD; &#xD64D;&#xC218; &#xACB0;&#xACFC; &#xD3D0; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC788;&#xB294;&#xC640; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xCE58; &#xCE58;&#xACBD; &#xC720;&#xCCB4; &#xADE0;&#xD615;&#xC5D0; nox2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;, Nox2(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xACF5;&#xAE30; &#xACF5;&#xAC04; &#xC720;&#xCCB4; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, fluoroscopic &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; LPS&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; C57BL/6J &#xD3D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xD3D0; &#xC720;&#xCCB4; &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xAE09;&#xC131; &#xC790;&#xADF9; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB294; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8; &#xD3D0;&#xD488; tetramethylpiperidine-N-oxyl (&#xD15C;&#xD3EC;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. LPS&#xC758; &#xAE09;&#xC131; &#xC751;&#xC6A9; &#xC950; 1 &#xD615; &#xC138;&#xD3EC;; 20 pS &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; ENaC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960; (NPo)&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC218;&#xB294; 0.04 0.62 &plusmn; 0.23 0.14 &plusmn;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC140; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB179;&#xC74C; &#xD15C;&#xD3EC;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; 0.04 &plusmn; 0.03 ENaC npo &#xBC95;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xC740; ENaC &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3D0; &#xC720;&#xCCB4; &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nadph &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC870;&#xC808; &#xCE58;&#xACBD; &#xC0C1;&#xD53C; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xD3D0; &#xC561;&#xCCB4; &#xBC38;&#xB7F0;&#xC2A4; OFormula &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;.

Para definir funciones de especies reactivas del ox&iacute;geno (ROS) y canal epitelial del sodio (ENaC) para mantener un equilibrio l&iacute;quido del pulm&oacute;n in vivo, utilizamos dos nuevos enfoques de todo animales. Cuantificaci&oacute;n de fluoroscopia con rayos x viva de espacio a&eacute;reo contenido l&iacute;quido de los pulmones de rat&oacute;n C57BL/6J desafiada por intratraqueal (IT) la instilaci&oacute;n de soluci&oacute;n salina; resultados fueron confirmados mediante relaciones de peso h&uacute;medo a seco de pulm&oacute;n convencional y azul de Evans como medidas de edema pulmonar. Visualizaci&oacute;n y cuantificaci&oacute;n de ROS producidos en los pulmones se realiz&oacute; en ratones que hab&iacute;an sido administrados un tinte redox sensible, hidro-Cy7, por instilaci&oacute;n de ti. Encontramos que la inhibici&oacute;n de la NADPH oxidasa con un Rac-1 inhibidor, NSC23766, dio lugar a la inundaci&oacute;n alveolar, que correlaciona con una disminuci&oacute;n en la producci&oacute;n de ROS de pulm&oacute;n in vivo. Consistente con un papel de Nox2 en equilibrio l&iacute;quido alveolar, Nox2(-/-) ratones mostraron mayor retenci&oacute;n de l&iacute;quido del espacio a&eacute;reo en comparaci&oacute;n con controles de tipo salvaje. Curiosamente, an&aacute;lisis fluorosc&oacute;pico de pulmones C57BL/6J que lo pone con LPS demostraron una estimulaci&oacute;n aguda de separaci&oacute;n l&iacute;quido pulmonar y la producci&oacute;n de ROS en vivo que fue abrogada por la ROS limpiador tetramethylpiperidine-N-oxyl (TEMPO). Aplicaci&oacute;n aguda de LPS aument&oacute; la actividad de 20 canales de ENaC no selectivos pS en c&eacute;lulas de tipo 1 de rata; el n&uacute;mero promedio de canal y un canal abierto probabilidad (NPo) aument&oacute; de 0.14 &plusmn; 0.04 a 0,62 &plusmn; 0,23. Aplicaci&oacute;n de TEMPO para la grabaci&oacute;n de conexi&oacute;n celular misma caus&oacute; una inmediata disminuci&oacute;n significativa en ENaC NPo a &plusmn; 0,04 0,03. Estos datos demuestran que, en vivo, ROS tiene la capacidad para estimular la separaci&oacute;n l&iacute;quido pulmonar por aumento de la actividad de ENaC.

NADPH oxidasa regula la actividad del canal de sodio epitelial alveolar y equilibrio fl&uacute;ido del pulm&oacute;n in vivo mediante se&ntilde;alizaci&oacute;n OFormula.

Preston Goodson

Department of Physiology

Emory University

Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Preston Goodson

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Emory University

Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Department of Physiology