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Method for the Isolation of <em>Francisella tularensis</em> Outer Membranes

Francisella tularensis is a Gram-negative intracellular coccobacillus and the causative agent of the zoonotic disease tularemia. When compared with other ...

University of Texas Southwestern Medical Center

&#x9E1F;&#x4E9A;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC; (M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#xFF09; &#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x5145;&#x5206;&#x9610;&#x660E;&#x8FDB;&#x5165;&#x725B;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x53CD;&#x520D;&#x52A8;&#x7269;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x4F4E;&#x6C27;&#x548C;&#x9AD8;&#x6E17;&#x900F;&#x538B;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x80A0;&#x9053;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x8868;&#x793A;&#x7F16;&#x7801; M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F; 35 kDa &#x4E3B;&#x8981;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; (MMP) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x526F;&#x7ED3;&#x6838;&#x75C5;&#x75C5;&#x725B;&#x751F;&#x4EA7;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x672C;&#x671F;&#x95F4;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x9EA6;&#x82BD;&#x7CD6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (MBP-&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;) &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5154;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x5BF9; M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86; sonicate &#x548C;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4EB2;&#x548C;&#x5C42;&#x6790;&#x51C0;&#x5316;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8840;&#x6E05;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7535;&#x955C;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x5206;&#x7EA7;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A; M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-&#x6297;&#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x9AD3;&#x9798;&#x78B1;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;-&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236; M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#x5165;&#x4FB5;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x725B;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; 30%&#x3002;M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#x517B;&#x6599;&#x7684;&#x4F4E;&#x6C27;&#x5F20;&#x529B;&#x4E0E;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5165;&#x4FB5;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0B;&#x964D; 60%&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; 35 kDa &#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5728;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x4F5C;&#x8005;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x662F; M.&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F00;&#x59CB;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x4F53;&#x5185;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x9E1F;&#x4E9A;&#x79CD;&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F; 35 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x725B;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (M. paratuberculosis) enters intestinal epithelial cells of cattle and other ruminants via a mechanism that remains to be fully elucidated. This study showed that a gene encoding the M. paratuberculosis 35 kDa major membrane protein (MMP) is expressed at a higher level in low-oxygen and high-osmolarity conditions that are similar to the environment of the intestine. In addition, cattle with Johne's disease produced antibodies against MMP, suggesting that the protein is present during infection. The gene encoding MMP was cloned and expressed as a fusion protein with the maltose-binding protein (MBP-MMP) in Escherichia coli. Rabbit antisera were raised against a M. paratuberculosis whole-cell sonicate and MMP-specific antibodies were purified from these sera by affinity chromatography. MMP was localized to the surface of M. paratuberculosis by immunoelectron microscopy and by immunoblot analysis of fractionated protein lysates. Both anti-MMP antibodies and MBP-MMP protein inhibited M. paratuberculosis invasion of cultured Madin-Darby bovine kidney cells by 30 %. In similar invasion experiments with M. paratuberculosis incubated in low oxygen tension, these antibodies and protein decreased invasion by 60 %. Collectively, these data show that the 35 kDa MMP is a surface exposed protein that plays a role in invasion of epithelial cells. The authors suggest that the MMP is a virulence factor of M. paratuberculosis that may be important in the initiation of infection in vivo.

The Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 35 kDa protein plays a role in invasion of bovine epithelial cells.

Mycobacterium avium sous-esp&egrave;ce paratuberculosis (M. paratuberculosis) p&eacute;n&egrave;tre dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales intestinales de bovins et autres ruminants par un m&eacute;canisme qui reste &agrave; &eacute;lucider compl&egrave;tement. Cette &eacute;tude a montr&eacute; qu&#39;un g&egrave;ne codant pour la prot&eacute;ine de membrane principaux M. paratuberculosis 35 kDa (MMP) est exprim&eacute; &agrave; un niveau sup&eacute;rieur dans des conditions pauvres en oxyg&egrave;ne et pr&eacute;sentant une osmolarit&eacute; &eacute;lev&eacute;e qui ressemblent &agrave; l&#39;environnement de l&#39;intestin. En outre, b&eacute;tail avec la maladie de Johne produit des anticorps contre MMP, sugg&eacute;rant que la prot&eacute;ine est pr&eacute;sente durant l&#39;infection. Le g&egrave;ne codant la MMP a &eacute;t&eacute; clon&eacute; et exprim&eacute; comme une prot&eacute;ine de fusion avec la prot&eacute;ine liant le maltose (MBP-MMP) chez Escherichia coli. Des antis&eacute;rums de lapin ont &eacute;t&eacute; soulev&eacute;es contre une cellule enti&egrave;re M. paratuberculosis &agrave; ultrasons et d&#39;anticorps sp&eacute;cifiques de la MMP ont &eacute;t&eacute; purifi&eacute;es de ces s&eacute;rums par chromatographie d&#39;affinit&eacute;. MMP a &eacute;t&eacute; localis&eacute;e &agrave; la surface de M. paratuberculosis par immunomicroscopie &eacute;lectronique et par immunobuvardage de lysats de prot&eacute;ines fractionn&eacute;es. Anticorps anti-MMP et prot&eacute;ine MBP-MMP inhibent invasion M. paratuberculosis des cellules de rein de bovin Madin-Darby de 30 %. Dans des exp&eacute;riences similaires invasion avec M. paratuberculosis incub&eacute;s en tension d&#39;oxyg&egrave;ne, ces anticorps et la prot&eacute;ine a diminu&eacute; invasion de 60 %. Ensemble, ces donn&eacute;es montrent que la MMP de 35 kDa est une prot&eacute;ine de surface expos&eacute;e qui joue un r&ocirc;le dans l&#39;invasion des cellules &eacute;pith&eacute;liales. Les auteurs sugg&egrave;rent que la MMP est un facteur de virulence de M. paratuberculosis qui peuvent &ecirc;tre importants dans le d&eacute;clenchement de l&#39;infection in vivo.

Le Mycobacterium avium sous-esp&egrave;ce paratuberculosis 35 kDa prot&eacute;ine joue un r&ocirc;le dans l&#39;invasion des cellules &eacute;pith&eacute;liales bovines.

Das Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 35 kDa-Protein eine Rolle spielt bei der Invasion von Rindern Epithelzellen.

Mycobacterium avium subsp paratuberculosis (M. paratuberculosis) entra nelle cellule epiteliali intestinali di bovini e altri ruminanti attraverso un meccanismo che resta ancora essere completamente chiarito. Questo studio ha dimostrato che un gene che codifica per la proteina di membrana principali kDa (MMP) di M. paratuberculosis 35 si esprime a un livello superiore in condizioni di basso tenore di ossigeno e alta osmolarit&agrave; che sono simili all&#39;ambiente dell&#39;intestino. Inoltre, bestiame con la malattia di Johne prodotto anticorpi contro MMP, suggerendo che la proteina &egrave; presente durante l&#39;infezione. Il gene che codifica per MMP &egrave; stato clonato ed espresso come una proteina di fusione con il maltosio-binding protein (MBP-MMP) in Escherichia coli. Antisieri di coniglio sono stati sollevati contro una cella di tutta la M. paratuberculosis sottoporre ad ultrasuoni e anticorpi specifici MMP sono stati purificati da questi sieri da cromatografia di affinit&agrave;. MMP era localizzata alla superficie di M. paratuberculosis immunoelectron microscopia e analisi di immunoblot di lisati di proteina frazionato. Sia gli anticorpi anti-MMP e proteina MBP-MMP inibito invasione di M. paratuberculosis di cellule di rene bovino Madin-Darby coltivate da 30%. In esperimenti di invasione simili con M. paratuberculosis incubati in tensione a basso tenore di ossigeno, questi anticorpi e proteine diminuito invasione del 60%. Collettivamente, questi dati mostrano che il kDa 35 MMP &egrave; una proteina di superficie esposta che svolge un ruolo nell&#39;invasione delle cellule epiteliali. Gli autori suggeriscono che le MMP &egrave; un fattore di virulenza di M. paratuberculosis che possono essere importanti per l&#39;inizio dell&#39;infezione in vivo.

Il Mycobacterium avium subsp paratuberculosis 35 kDa proteina svolge un ruolo nell&#39;invasione delle cellule epiteliali bovina.

&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x3053;&#x3053;&#x75C5;&#x83CC;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5; (M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#xFF09; &#x725B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x53CD;&#x82BB;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x8178;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x9042;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306B;&#x5165;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5; 35 kDa &#x4E3B;&#x8981;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (MMP) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8178;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x725B;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x611F;&#x67D3;&#x4E2D;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; MMP &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MMP &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3057;&#x3001;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30A8;&#x30B7;&#x30A7;&#x30EA;&#x30D2;&#x30A2;&#x5C5E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (MBP MMP) &#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3002;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x306E;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x3092; M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x5168;&#x4F53;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x8D77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FAE;&#x91CF;&#x8D85;&#x97F3;&#x6CE2;&#x3067;&#x5206;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;MMP &#x7279;&#x7570;&#x6297;&#x4F53;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8840;&#x6E05;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MMP M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5206;&#x753B;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; lysates &#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x96FB;&#x9855;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1; MMP &#x6297;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073; MBP MMP &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x4FB5;&#x7565;&#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC; &#x30A6;&#x30B7;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; 30 &#xFF05; &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x5206;&#x5727;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8; M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x4FB5;&#x7565; 60% &#x6E1B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;35 kDa MMP &#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3067;&#x306F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8457;&#x8005; MMP &#x611F;&#x67D3;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044; M. &#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3053;&#x3053;&#x75C5;&#x83CC;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5; 35 kDa &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x725B;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBBF8;&#xCF54;&#xBC15;&#xD14C;&#xB968; avium &#xB098;&#xBB34; paratuberculosis (M. paratuberculosis) &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xD574;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC00;&#xCD95;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; ruminants&#xC758; &#xC7A5;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xAC11;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; M. paratuberculosis 35 kDa &#xC8FC;&#xC694; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MMP) &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC18C;&#xC7A5; &#xD658;&#xACBD;&#xACFC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640; &#xB192;&#xC740; osmolarity &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Johne&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xACFC; &#xAC00;&#xCD95; MMP, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC911; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0;. MMP &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#x82BD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MBP MMP)&#xC640; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD1A0;&#xB07C; antisera M. paratuberculosis &#xC804;&#xCCB4; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC81C;&#xAE30; &#xD588;&#xB2E4; sonicate &#xBC0F; MMP &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4; &#xCE5C;&#xD654;&#xC131; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xB77C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. MMP&#xB294; M. paratuberculosis&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; immunoelectron &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB958; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; lysates&#xC758; immunoblot &#xBD84;&#xC11D;. &#xC548;&#xD2F0; MMP &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; MBP MMP &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 30% &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xC18C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; M. paratuberculosis &#xCE68;&#xB7B5;&#xC744; &#xC800;&#xD574;. &#xB0AE;&#xC740; &#xC0B0;&#xC18C; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; incubated M. paratuberculosis&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xCE68;&#xACF5; &#xC2E4;&#xD5D8;, &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; 60%&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE68;&#xACF5; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; 35 kDa MMP &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560; &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC800;&#xC790;&#xB294; MMP vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; M. paratuberculosis&#xC758; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xCF54;&#xBC15;&#xD14C;&#xB968; avium &#xB098;&#xBB34; paratuberculosis 35 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (M. paratuberculosis) entra en las c&eacute;lulas epiteliales intestinales de bovinos y otros rumiantes mediante un mecanismo que dilucidarse completamente. Este estudio mostr&oacute; que un gen que codifica la prote&iacute;na de membrana principales M. paratuberculosis 35 kDa (MMP) se expresa en un nivel superior en condiciones de bajo ox&iacute;geno y alta-osmolaridad que son similares al entorno del intestino. Adem&aacute;s, ganado con la enfermedad de Johne hab&iacute;an producido anticuerpos contra MMP, sugiriendo que la prote&iacute;na est&aacute; presente durante la infecci&oacute;n. El gen que codifica la MMP fue reproducido y expresado como una prote&iacute;na de fusi&oacute;n con la prote&iacute;na de uni&oacute;n a maltosa (MBP-MMP) en Escherichia coli. Antisueros de conejo fueron levantados contra una c&eacute;lula entera M. paratuberculosis someter a ultrasonidos y anticuerpos espec&iacute;ficos MMP fueron purificados de estos sueros mediante cromatograf&iacute;a de afinidad. MMP fue localizado en la superficie del M. paratuberculosis por microscopia del immunoelectron y por immunoblot an&aacute;lisis de prote&iacute;na fraccionada lisados. Anticuerpos anti-MMP tanto prote&iacute;na MBP-MMP inhibici&oacute;n invasi&oacute;n de M. paratuberculosis de c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n bovino Madin-Darby cultivadas en un 30%. En experimentos similares de invasi&oacute;n con M. paratuberculosis incubados en tensi&oacute;n poco ox&iacute;geno, estos anticuerpos y prote&iacute;nas disminuyeron invasi&oacute;n por 60%. Colectivamente, estos datos muestran que el MMP de 35 kDa es una prote&iacute;na superficial expuesta que desempe&ntilde;a un papel en la invasi&oacute;n de c&eacute;lulas epiteliales. Los autores sugieren que el MMP es un factor de virulencia de M. paratuberculosis que pueden ser importantes en el inicio de la infecci&oacute;n en vivo.

El Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 35 kDa prote&iacute;na desempe&ntilde;a un papel en la invasi&oacute;n de c&eacute;lulas epiteliales bovinas.

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x80BA;&#x7ED3;&#x6838; 19 kDa &#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x636E;&#x8BF4;&#x523A;&#x6FC0; T &#x548C; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x5927;&#x91CF;&#x7684; Th1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x526F;&#x7ED3;&#x6838;&#x75C5;&#x75C5;&#x725B;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x9E1F;&#x4E9A;&#x79CD;&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F; (M.&#x9E1F;&#x4E9A;&#x79CD;&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F;&#xFF09; 19 kDa &#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x7F16;&#x7801; 19 kDa &#x86CB;&#x767D; (MAP0261c) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x9E1F;&#x4E9A;&#x79CD;&#x6885;&#x82B1;&#x9E7F; 19 kDa &#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

The Mycobacterium tuberculosis 19-kDa lipoprotein has been reported to stimulate both T and B cell responses as well as induce a number of Th1 cytokines. In order to evaluate the Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (M. avium subsp. paratuberculosis) 19-kDa lipoprotein as an immunomodulator in cattle with Johne's disease, the gene encoding the 19-kDa protein (MAP0261c) was analyzed.

Immunoreactivity of the Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 19-kDa lipoprotein.

La lipoprot&eacute;ine 19 kDa de Mycobacterium tuberculosis a &eacute;t&eacute; signal&eacute;e &agrave; susciter des r&eacute;ponses tant T et les lymphocytes B mais aussi induire un certain nombre de cytokines Th1. Afin d&#39;&eacute;valuer la lipoprot&eacute;ine Mycobacterium avium sous-esp&egrave;ce paratuberculosis (M. avium subsp) 19 kDa comme un immunomodulateur chez les bovins avec la maladie de Johne, le g&egrave;ne codant pour la prot&eacute;ine de 19 kDa (MAP0261c) a &eacute;t&eacute; analys&eacute;.

Immunor&eacute;activit&eacute; de la lipoprot&eacute;ine Mycobacterium avium sous-esp&egrave;ce paratuberculosis 19 kDa.

Immunreaktivit&#xE4;t des Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 19-kDa-Lipoprotein.

Le lipoproteine del 19-kDa Mycobacterium tuberculosis sono stata segnalata per stimolare risposte sia T e delle cellule B, nonch&eacute; di indurre un certo numero di citochine Th1. Al fine di valutare le lipoproteine 19-kDa del Mycobacterium avium subsp paratuberculosis (M. avium subsp paratuberculosis) come un immunomodulatore nei bovini con la malattia di Johne, &egrave; stato analizzato il gene che codifica per la proteina 19-kDa (MAP0261c).

Immunoreattivit&agrave; della lipoproteina Mycobacterium avium subsp paratuberculosis 19-kDa.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x6838; 19 kDa &#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;T &#x304A;&#x3088;&#x3073; B &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;Th1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x725B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x3053;&#x3053;&#x75C5;&#x83CC;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5; (M. &#x3053;&#x3053;&#x75C5;&#x83CC;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;) 19 kDa &#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;, 19 kDa &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (MAP0261c) &#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x3053;&#x3053;&#x75C5;&#x83CC;&#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x30E8;&#x30FC;&#x30CD;&#x75C5;&#x30EA;&#x30DD; 19 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3002;

T &#xBC0F; B &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; Th1 cytokines &#xC218; &#xC720;&#xB3C4; Mycobacterium &#xACB0;&#xD575; 19 kDa &#xB2E8;&#xBC31; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Johne&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xACFC; &#xAC00;&#xCD95;&#xC5D0; immunomodulator&#xB85C; &#xC9C4; avium &#xB098;&#xBB34; paratuberculosis (M. avium &#xB098;&#xBB34; paratuberculosis) 19-kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; 19 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MAP0261c) &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xCF54;&#xBC15;&#xD14C;&#xB968; avium &#xB098;&#xBB34; paratuberculosis 19 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC758; immunoreactivity.

La lipoprote&iacute;na de 19 kDa de Mycobacterium tuberculosis se ha divulgado para estimular respuestas tanto T y c&eacute;lulas B as&iacute; como induce una serie de citoquinas Th1. Con el fin de evaluar la lipoprote&iacute;na de 19 kDa de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (M. avium subsp. paratuberculosis) como inmunomodulador en ganado con la enfermedad de Johne, se analiz&oacute; el gen que codifica la prote&iacute;na de 19 kDa (MAP0261c).

Inmunoreactividad de la lipoprote&iacute;na de 19 kDa de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis.

&#x571F;&#x62C9;&#x5F17;&#x662F;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&#x7684; coccobacillus&#xFF0C;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x5728;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5728;&#x5185;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7269;&#x79CD;&#x9020;&#x6210;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x3001; &#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x7EA6;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732; (OM) F.&#x5F17;&#x7684;&#x5916;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6240;&#x77E5;&#x751A;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7406;&#x89E3;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x611F;&#x67D3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3001; &#x80DE;&#x5185;&#x751F;&#x5B58;&#x3001; &#x6BD2;&#x529B;&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6700;&#x7EC8;&#x75AB;&#x82D7;&#x7814;&#x5236;&#x3002;&#x4FBF;&#x5229;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A; F.&#x5F17;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; (&#x529E;&#x516C;&#x5BA4;) &#x7684; A &#x578B;&#x5E94;&#x53D8; &#xFF08;Schu S4&#xFF09; &#x548C; B &#x578B;&#x83CC;&#x682A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; (LVS) &#x906D;&#x5230;&#x4E86; OMP &#x7B7E;&#x540D;&#x516D;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x9884;&#x6D4B;&#x6C47;&#x7F16;&#x5F3A;&#x8C03; 16 &#x5047;&#x5B9A;&#x529E;&#x516C;&#x5BA4;&#x7BA1;&#x7406;&#x8BA1;&#x5212;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x3002;&#x603B;&#x819C;&#x88AB;&#x63D0;&#x53D6; Schu S4 &#x548C; LVS&#xFF0C;&#x7531; spheroplasting &#x548C;&#x6E17;&#x900F;&#x6EB6;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x8517;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x79BB;&#x5FC3;&#xFF0C;OMs &#x5206;&#x5F00; &#xFF08;&#x5185;&#x90E8;&#xFF09; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x53CA;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x3002;OM &#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x901A;&#x8FC7;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8517;&#x7CD6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x998F;&#x5206;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x529E;&#x516C;&#x5BA4;&#x7BA1;&#x7406;&#x8BA1;&#x5212;&#x548C;&#x5185;&#x5728;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;F.&#x5F17; OMs &#x901A;&#x5E38;&#x5728;&#x8517;&#x7CD6;&#x6E10;&#x53D8;&#x5BC6;&#x5EA6; 1.17 &#x548C; 1.20 g/ml&#xFF0C;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC; (1.21 &#x5230; 1.24 g/ml&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E00;&#x822C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x5B9A;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x5BF9;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x94A0;&#x5341;&#x4E8C;&#x70F7;&#x57FA;&#x786B;&#x9178;&#x76D0;-&#x805A;&#x4E19;&#x70EF;&#x9170;&#x80FA;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x53CA;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x9996;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A; F.&#x5F17; OM &#x5206;&#x79BB;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x66F4;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x6765;&#x8868;&#x5F81; F.&#x5F17;&#x529E;&#x516C;&#x5BA4;&#x7BA1;&#x7406;&#x8BA1;&#x5212;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x571F;&#x62C9;&#x5F17;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Francisella tularensis is a gram-negative coccobacillus that is capable of causing severe, fatal disease in a number of mammalian species, including humans. Little is known about the proteins that are surface exposed on the outer membrane (OM) of F. tularensis, yet identification of such proteins is potentially fundamental to understanding the initial infection process, intracellular survival, virulence, immune evasion and, ultimately, vaccine development. To facilitate the identification of putative F. tularensis outer membrane proteins (OMPs), the genomes of both the type A strain (Schu S4) and type B strain (LVS) were subjected to six bioinformatic analyses for OMP signatures. Compilation of the bioinformatic predictions highlighted 16 putative OMPs, which were cloned and expressed for the generation of polyclonal antisera. Total membranes were extracted from both Schu S4 and LVS by spheroplasting and osmotic lysis, followed by sucrose density gradient centrifugation, which separated OMs from cytoplasmic (inner) membrane and other cellular compartments. Validation of OM separation and enrichment was confirmed by probing sucrose gradient fractions with antibodies to putative OMPs and inner membrane proteins. F. tularensis OMs typically migrated in sucrose gradients between densities of 1.17 and 1.20 g/ml, which differed from densities typically observed for other gram-negative bacteria (1.21 to 1.24 g/ml). Finally, the identities of immunogenic proteins were determined by separation on two-dimensional sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and mass spectrometric analysis. This is the first report of a direct method for F. tularensis OM isolation that, in combination with computational predictions, offers a more comprehensive approach for the characterization of F. tularensis OMPs.

Characterization of Francisella tularensis outer membrane proteins.

Francisella tularensis est un coccobacille &#xE0; Gram n&#xE9;gatif qui est capable de causer de graves, maladie mortelle dans un certain nombre d&#x26;#39;esp&#xE8;ces de mammif&#xE8;res, y compris les humains. Peu de choses sont connues sur les prot&#xE9;ines qui sont surface expos&#xE9;e sur la membrane externe (OM) de F. tularensis, mais l&#x26;#39;identification de ces prot&#xE9;ines est potentiellement essentielle &#xE0; la compr&#xE9;hension du processus de l&#x26;#39;infection initiale, la survie intracellulaire, la virulence, &#xE9;chapper au syst&#xE8;me immunitaire et, finalement, le d&#xE9;veloppement de vaccins . Pour faciliter l&#x26;#39;identification des prot&#xE9;ines putatives F. tularensis la membrane externe (OMP), les g&#xE9;nomes de deux souches de type A (Schu S4) et de type B souche (LVS) ont &#xE9;t&#xE9; soumis &#xE0; six analyses bioinformatiques pour les signatures OMP. Compilation des pr&#xE9;dictions bioinformatiques mis en &#xE9;vidence 16 OMP putatifs, qui ont &#xE9;t&#xE9; clon&#xE9;s et exprim&#xE9;s pour la g&#xE9;n&#xE9;ration d&#x26;#39;antis&#xE9;rums polyclonaux. Membranes totales ont &#xE9;t&#xE9; extraites de deux Schu S4 et LVS par lyse osmotique et sph&#xE9;roplastes, suivie par une centrifugation en gradient de densit&#xE9; de saccharose, qui s&#xE9;pare OMs de cytoplasmique (int&#xE9;rieure) de membrane et d&#x26;#39;autres compartiments cellulaires. Validation de la s&#xE9;paration OM et l&#x26;#39;enrichissement a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e en sondant fractions du gradient de saccharose avec des anticorps &#xE0; OMP putatifs et des prot&#xE9;ines membranaires internes. F. tularensis OM g&#xE9;n&#xE9;ralement migr&#xE9; en gradient de saccharose entre les densit&#xE9;s de 1,17 et 1,20 g / ml, qui diff&#xE8;re de densit&#xE9;s g&#xE9;n&#xE9;ralement observ&#xE9;s pour d&#x26;#39;autres bact&#xE9;ries gram-n&#xE9;gatives (1.21 &#xE0; 1.24 g / ml). Enfin, les identit&#xE9;s des prot&#xE9;ines immunog&#xE8;nes ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;es par s&#xE9;paration sur deux dimensions de sodium &#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel de polyacrylamide-dod&#xE9;cylsulfate de masse et l&#x26;#39;analyse par spectrom&#xE9;trie. Ce rapport est le premier d&#x26;#39;une m&#xE9;thode directe pour F. tularensis OM isolement qui, en combinaison avec les pr&#xE9;dictions informatiques, propose une approche plus globale pour la caract&#xE9;risation des OMP F. tularensis.

Caract&#xE9;risation des prot&#xE9;ines de Francisella tularensis membrane externe

Francisella Tularensis ist ein gramnegatives Coccobacillus, das schwere, t&ouml;dlich in eine Reihe von Arten von S&auml;ugetieren, einschlie&szlig;lich Menschen hervorrufen kann. Wenig ist &uuml;ber die Proteine, die Fl&auml;che auf die &auml;u&szlig;ere Membran (OM) F. Tularensis sind bekannt, doch Identifizierung von solchen Proteinen ist potenziell grundlegend f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der Erstinfektion Prozess, intrazellul&auml;re &uuml;berleben, Virulenz, immun ausweichen und letztlich Impfstoffentwicklung. Zur Erleichterung der Identifizierung von vermeintlichen F. Tularensis &auml;u&szlig;ere Membranproteine (OMPs), die Genome der Typ A-Stamm (Schu S4) und Typ B-Stamm wurden sechs bioinformatische Analysen f&uuml;r OMP Signaturen (LVS) unterzogen. Zusammenstellung der bioinformatische Vorhersagen hervorgehoben 16 vermeintliche OMPs, die geklont und zur Erzeugung von polyklonale Antiseren ausgedr&uuml;ckt wurden. Gesamte Membranen wurden extrahiert aus Schu S4 und LVS durch Spheroplasting und osmotische Lyse, gefolgt von Saccharose Dichte Gradienten Zentrifugation, die OMs aus andere zellulare F&auml;cher und zytoplasmatischen (innere) Membran getrennt. Validierung von OM Trennung und Bereicherung wurde durch Sondierung Saccharose gradient Br&uuml;che mit Antik&ouml;rper gegen vermeintliche OMPs und inneren Membranproteinen best&auml;tigt. F. Tularensis OMs migriert in der Regel in Saccharose Steigungen zwischen dichten von 1.17 und 1,20 g/ml, differierten von dichten, die in der Regel f&uuml;r andere gramnegativen Bakterien (1.21 auf 1,24 g/ml) beobachtet. Schlie&szlig;lich wurden die Identit&auml;ten der immunogene Proteine durch Trennung auf zweidimensionalen Natrium Natriumdodecylsulfat Sulfat-Polyacrylamid Gel Elektrophorese und Masse spektrometrischen Analyse bestimmt. Dies ist der erste Bericht &uuml;ber eine direkte Methode F. Tularensis OM Isolation, die in Kombination mit computational Vorhersagen, einen umfassenderen Ansatz zur Charakterisierung von F. Tularensis OMPs bietet.

Charakterisierung von Francisella Tularensis &auml;u&szlig;ere Membranproteine.

Francisella tularensis &egrave; un coccobacillo Gram-negativo che &egrave; in grado di causare malattia grave, fatale in un certo numero di specie di mammiferi, inclusi gli esseri umani. Poco si sa circa le proteine che sono superficie esposti sulla membrana esterna (OM) di F. tularensis, ancora potenzialmente fondamentali per comprendere il processo di infezione iniziale, la sopravvivenza intracellulare, la virulenza, l&#39;identificazione di tali proteine &egrave; evasione immune e, in ultima analisi, lo sviluppo del vaccino. Per facilitare l&#39;identificazione del putative F. tularensis proteine della membrana esterna (OMPs), il genoma del ceppo di tipo A (Schu S4) e ceppo di tipo B (LVS) sono stati sottoposti ad analisi bioinformatiche sei per le firme OMP. Compilazione delle previsioni bioinformatic evidenziato 16 OMPs putativo, che sono stati clonati ed espresso per la generazione di antisieri policlonali. Totale delle membrane sono state estratte da Schu S4 e LVS da spheroplasting e lisi osmotica, seguita dalla centrifugazione gradiente di densit&agrave; saccarosio, che separava l&#39;OMs dalla membrana citoplasmatica (interna) e altri compartimenti cellulari. Convalida di OM separazione e arricchimento &egrave; stata confermata dal sondaggio frazioni gradiente di saccarosio con anticorpi anti-proteine di membrana interna e OMPs putativo. F. tularensis OMs tipicamente migrato in gradiente di saccarosio tra densit&agrave; di 1.17 e 1,20 g/ml, che ha differito dalle densit&agrave; tipicamente osservata per altri batteri Gram-negativi (1.21 a 1,24 g/ml). Infine, l&#39;identit&agrave; delle proteine immunogene sono stati determinati mediante separazione su bidimensionale sodio dodecil solfato-poliacrilammide gel elettroforesi e massa spettrometria di analisi. Questo &egrave; il primo rapporto di un metodo diretto per F. tularensis OM isolamento, che, in combinazione con le previsioni computazionali, offre un approccio pi&ugrave; globale per la caratterizzazione di F. tularensis OMPs.

Caratterizzazione delle proteine della membrana esterna Francisella tularensis.

&#x91CE;&#x514E;&#x75C5;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7A2E;&#x6570;&#x306E;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x3001;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7403;&#x687F;&#x83CC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30EA;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;F.&#x75C5;&#x83CC;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#xFF08;OM&#xFF09;&#x306B;&#x9732;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x8868;&#x9762;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x611F;&#x67D3;&#x904E;&#x7A0B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3001;&#x6BD2;&#x6027;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x3068;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x57FA;&#x672C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x63A8;&#x5B9A;F&#x306E;&#x75C5;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;OMPS&#xFF09;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x682A;&#xFF08;Schu S4&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;B&#x578B;&#x682A;&#xFF08;LVS&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;OMP&#x306E;&#x7F72;&#x540D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;6&#x3064;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x8840;&#x6E05;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;16&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;OMP&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5408;&#x8A08;&#x819C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#xFF08;&#x5185;&#x5074;&#xFF09;&#x819C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x533A;&#x753B;&#x304B;&#x3089;OMS&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x9060;&#x5FC3;&#x3001;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;spheroplasting&#x3068;&#x6D78;&#x900F;&#x6EB6;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Schu S4&#x3068;LVS&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x62BD;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; OM&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;OMP&#x3068;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3067;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x5206;&#x753B;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; F.&#x75C5;&#x83CC;OMS&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#xFF08;&#x200B;&#x200B;1.21&#x301C;1.24&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;/ ml&#xFF09;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;1.17&#x3068;1.20&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;/ ml&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x52FE;&#x914D;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x30C9;&#x30C7;&#x30B7;&#x30EB;&#x786B;&#x9178;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; - &#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3068;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3001;F.&#x75C5;&#x83CC;&#x306E;&#x306E;OMP&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;F.&#x75C5;&#x83CC;OM&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x6CD5;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x91CE;&#x514E;&#x75C5;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

Francisella tularensis&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC885; &#xC2EC;&#xD55C;, &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; coccobacillus. &#xC544;&#xC9C1; &#xC791;&#xC740; F. tularensis&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; (OM)&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC740; &#xCD08;&#xAE30; &#xAC10;&#xC5FC; &#xACFC;&#xC815;, &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC0DD;&#xC874;, &#xB3C5;&#xC131;, &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C; &#xD558; &#xACE0;, &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC31;&#xC2E0; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC0C1; F. tularensis &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (OMPs) a &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; (Schu S4) &#xBC0F; B &#xD615; &#xBCC0;&#xD615; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xAE30; (LVS) OMP &#xC11C;&#xBA85; 6 bioinformatic &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xBCF5;&#xC885; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Bioinformatic &#xC608;&#xCE21;&#xC758; &#xD3B8;&#xC9D1; 16 &#xC0C1; OMPs &#xBCF5;&#xC81C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; polyclonal antisera&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD1D; &#xB9C9; Schu S4 &#xBC0F; &#xC815; &#xB9E5; &#xC8FC;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; spheroplasting &#xBC0F; &#xC0BC; &#xD22C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;, &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC790;&#xB2F9; &#xBC00;&#xB3C4; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC6D0;&#xC2EC;, OMs &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; (&#xB0B4;&#xBD80;) &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. OM &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB18D;&#xCD95;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC0C1; Omps&#xACFC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; &#xC790;&#xB2F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBD84;&#xC218; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. F. tularensis OMs &#xC790;&#xB2F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8; 1.17&#xC758; &#xBC00;&#xB3C4; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; (1.21 1.24 g/ml)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xB790;&#xB2E4; 1.20 g/ml &#xC0AC;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, immunogenic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xBD84;&#xB9AC; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xB77C;&#xC6B0;&#xB9B4; &#xD669;&#xC0B0; polyacrylamide &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; spectrometric &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. F. tularensis OM &#xACA9;&#xB9AC; &#xD568;&#xAED8; &#xC804;&#xC0B0; &#xC608;&#xCE21; F. tularensis OMPs &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Francisella tularensis &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Francisella tularensis es un cocobacilo gram-negativo que es capaz de causar una enfermedad grave, mortal en un n&#xFA;mero de especies de mam&#xED;feros, incluyendo seres humanos. Poco se sabe sobre las prote&#xED;nas que est&#xE1;n en la superficie expuesta de la membrana externa (OM) de F. tularensis, sin embargo, la identificaci&#xF3;n de dichas prote&#xED;nas es potencialmente fundamental para entender el proceso de la infecci&#xF3;n inicial, la supervivencia intracelular, la virulencia, la evasi&#xF3;n inmune y, en &#xFA;ltima instancia, el desarrollo de vacunas . Para facilitar la identificaci&#xF3;n de prote&#xED;nas putativas F. tularensis membrana externa (OMP), los genomas de ambos el tipo de cepa A (Schu S4) y el tipo de cepa B (LVS) fueron sometidos a seis an&#xE1;lisis bioinform&#xE1;ticas para la firma OMP. Compilaci&#xF3;n de las predicciones bioinform&#xE1;ticas resaltada 16 OMPs putativo, que fueron clonados y expresados &#x200B;&#x200B;para la generaci&#xF3;n de antisueros policlonales. Membranas totales se extrajeron de ambos Schu S4 y LVS por lisis osm&#xF3;tica y spheroplasting, seguido por centrifugaci&#xF3;n en gradiente de densidad de sacarosa, que se separ&#xF3; de OM citopl&#xE1;smica (interior) de la membrana y otros compartimentos celulares. La validaci&#xF3;n de separaci&#xF3;n OM y enriquecimiento se confirm&#xF3; mediante palpaci&#xF3;n fracciones gradiente de sacarosa con anticuerpos frente a las OMPs putativo y las prote&#xED;nas de membrana interior. F. tularensis OM normalmente migran en gradientes de sacarosa entre las densidades de 1,17 y 1,20 g / ml, que se diferenciaba de la densidad que normalmente se observan en otras bacterias gram-negativas (1,21 a 1,24 g / ml). Finalmente, las identidades de las prote&#xED;nas inmunog&#xE9;nicas se determinaron mediante la separaci&#xF3;n en dos dimensiones de sodio dodecil sulfato de electroforesis en gel de poliacrilamida-y el an&#xE1;lisis de espectrometr&#xED;a de masas. Este es el primer reporte de un m&#xE9;todo directo para el aislamiento de F. tularensis OM que, en combinaci&#xF3;n con las predicciones computacionales, ofrece un enfoque m&#xE1;s amplio para la caracterizaci&#xF3;n de F. tularensis OMP.

Caracterizaci&#xF3;n de la Francisella tularensis prote&#xED;nas de membrana externas

&#x571F;&#x62C9;&#x5F17;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x4EBA;&#x755C;&#x5171;&#x60A3;&#x75BE;&#x75C5;&#x5154;&#x70ED;&#x75C5;&#x3002;F.&#x5F17;&#x662F; A &#x7C7B;&#x9009;&#x62E9;&#x4EE3;&#x7406;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x751F;&#x7269;&#x6050;&#x6016;&#x4E3B;&#x4E49;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;F.&#x5F17;&#x6D3B;&#x7740;&#xFF0C;&#x800C;&#x5F31;&#x6BD2;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x682A; (LVS) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x4FA6;&#x67E5;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x4E0D;&#x8BB8;&#x53EF;&#x4F9B;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x7597;&#x6548;&#x548C;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x7684;&#x62C5;&#x5FC3;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x514D;&#x75AB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0E;&#x5B64;&#x7ACB;&#x672C;&#x673A;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; (&#x529E;&#x516C;&#x5BA4;)&#x3001; &#x4E59;&#x9187;&#x706D;&#x6D3B; LVS (iLVS) &#x6216;&#x51C0;&#x5316; LVS &#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS) &#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x75AB;&#x82D7;&#x5236;&#x5907;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5BF9;&#x80BA;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B; A F.&#x5F17;&#x5E94;&#x53D8; SchuS4 &#x4E0E;&#x6311;&#x6218;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6297;&#x4F53; isotyping &#x8868;&#x793A; Th1 &#x548C; Th2 &#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x540E;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0E;&#x529E;&#x516C;&#x5BA4;&#x7BA1;&#x7406;&#x8BA1;&#x5212;&#x6216; iLVS&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x800C;&#x53EA;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x751F;&#x4EA7;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x3002;&#x5728;&#x751F;&#x5B58;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;OMP &#x514D;&#x75AB;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6700;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4; (&#x5728; SchuS4 &#x611F;&#x67D3;&#x540E; 20 &#x5929; 50%&#x751F;&#x5B58;&#xFF09; &#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x8054;&#x7684; 3 &#x65E5;&#x5FD7; &#xFF08;&#x4E0E; nonvaccinated &#x5C0F;&#x9F20;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF09; &#x7684;&#x813E;&#x548C;&#x809D;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D1F;&#x62C5;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;SchuS4 &#x8D28;&#x7591;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8840;&#x6E05;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5B9A;&#x91CF;&#x8868;&#x793A; OMP &#x548C; iLVS &#x514D;&#x75AB;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha; &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 (IL-2) &#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x800C;&#x53EA;&#x6709; OMP &#x514D;&#x75AB;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; IL-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; nonvaccinated &#x5C0F;&#x9F20; RANTES&#x3001; &#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x96C6;&#x843D;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6&#x3001; IL-1alpha&#x3001; &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 p 40 &#x548C; KC&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x53EF;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC1;&#x660E; OMP &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; (&#x8131;) &#x75AB;&#x82D7;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7C7B;&#x578B; F.&#x5F17;&#x5BF9;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x7528;&#x9014;&#x3002;

&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5BF9;&#x80BA;&#x6BD2;&#x578B; A &#x571F;&#x62C9;&#x5F17;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x3002;

Francisella tularensis is a gram-negative intracellular bacterium and the causative agent of the zoonotic disease tularemia. F. tularensis is a category A select agent and thus a potential agent of bioterrorism. Whereas an F. tularensis live, attenuated vaccine strain (LVS) is the basis of an investigational vaccine, this vaccine is not licensed for human use because of efficacy and safety concerns. In the present study, we immunized mice with isolated native outer membrane proteins (OMPs), ethanol-inactivated LVS (iLVS), or purified LVS lipopolysaccharide (LPS) and assessed the ability of each vaccine preparation to protect mice against pulmonary challenge with the virulent type A F. tularensis strain SchuS4. Antibody isotyping indicated that both Th1 and Th2 antibody responses were generated in mice after immunization with OMPs or iLVS, whereas LPS immunization resulted in only immunoglobulin A production. In survival studies, OMP immunization provided the greatest level of protection (50% survival at 20 days after infection with SchuS4), and there were associated 3-log reductions in the spleen and liver bacterial burdens (compared to nonvaccinated mice). Cytokine quantitation for the sera of SchuS4-challenged mice indicated that OMP and iLVS immunizations induced high levels of tumor necrosis factor alpha and interleukin-2 (IL-2) production, whereas only OMP immunization induced high levels of IL-10 production. By comparison, high levels of proinflammatory cytokines, including RANTES, granulocyte colony-stimulating factor, IL-6, IL-1alpha, IL-12p40, and KC, in nonvaccinated mice indicated that these cytokines may facilitate disease progression. Taken together, the results of this study demonstrate the potential utility of an OMP subunit (acellular) vaccine for protecting mammals against type A F. tularensis.

Native outer membrane proteins protect mice against pulmonary challenge with virulent type A Francisella tularensis.

Francisella tularensis est une bact&#xE9;rie gram-n&#xE9;gative intracellulaire et l&#x26;#39;agent causal de la maladie zoonotique la tular&#xE9;mie. F. tularensis est une cat&#xE9;gorie Un agent de s&#xE9;lection et donc un agent potentiel de bioterrorisme. Consid&#xE9;rant que l&#x26;#39;F. tularensis en direct, souche vaccinale att&#xE9;nu&#xE9;e (LVS) est &#xE0; la base d&#x26;#39;un vaccin exp&#xE9;rimental, ce vaccin n&#x26;#39;est pas homologu&#xE9; pour usage humain en raison de pr&#xE9;occupations d&#x26;#39;efficacit&#xE9; et de s&#xE9;curit&#xE9;. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, nous avons immunis&#xE9; des souris avec isol&#xE9;s indig&#xE8;nes prot&#xE9;ines de membrane externe (OMP), l&#x26;#39;&#xE9;thanol-inactiv&#xE9;s LVS (iLVS), ou purifi&#xE9; lipopolysaccharide LVS (LPS) et &#xE9;valu&#xE9; la capacit&#xE9; de chaque pr&#xE9;paration de vaccin pour prot&#xE9;ger les souris contre d&#xE9;fi pulmonaire avec la virulente Une souche de type F. tularensis SchuS4. Isotypage Anticorps indiqu&#xE9; que les r&#xE9;ponses d&#x26;#39;anticorps &#xE0; la fois Th1 et Th2 ont &#xE9;t&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es chez la souris apr&#xE8;s immunisation avec OMP ou iLVS, alors que la vaccination LPS conduit &#xE0; immunoglobuline A seulement la production. Dans les &#xE9;tudes de survie, l&#x26;#39;immunisation OMP fourni le plus grand niveau de protection (50% de survie &#xE0; 20 jours apr&#xE8;s l&#x26;#39;infection par SchuS4), et il y avait associ&#xE9; 3-journaux des r&#xE9;ductions dans la rate et du foie des charges bact&#xE9;riennes (par rapport aux souris non vaccin&#xE9;es). Quantification des cytokines pour les s&#xE9;rums de souris SchuS4-contest&#xE9;es indiqu&#xE9; que OMP et les vaccinations iLVS induit des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de facteur alpha de n&#xE9;crose tumorale et l&#x26;#39;interleukine-2 (IL-2) de production, alors que seulement la vaccination OMP induite des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s d&#x26;#39;IL-10 de production. Par comparaison, les niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de cytokines pro-inflammatoires, y compris RANTES, granulocyte colony-stimulating facteurs de production, l&#x26;#39;IL-6, IL-1alpha, IL-12p40, et KC, chez la souris non vaccin&#xE9;es ont indiqu&#xE9; que ces cytokines peut faciliter la progression de la maladie. Pris dans leur ensemble, les r&#xE9;sultats de cette &#xE9;tude d&#xE9;montrent l&#x26;#39;utilit&#xE9; potentielle d&#x26;#39;une sous-unit&#xE9; OMP (acellulaire) vaccin pour la protection des mammif&#xE8;res de type A contre F. tularensis.

Autochtones prot&#xE9;ines de membrane externe de prot&#xE9;ger les souris contre une provocation pulmonaire de type virulent Francisella tularensis

Francisella Tularensis ist ein gramnegatives Bakterium, das intrazellul&auml;re und den Erreger der Tular&auml;mie Zoonose. F. Tularensis ist eine ausgew&auml;hlte Kategorie A-Agent und damit eine potenzielle Agent von Bioterrorismus. W&auml;hrend ein F. Tularensis Leben, abgeschw&auml;chte Vakzinstammes (LVS) ist die Basis einer neuartigen Impfung, diesen Impfstoff ist nicht f&uuml;r den menschlichen Gebrauch lizenziert, wegen der Wirksamkeit und Sicherheit sorgen. In der vorliegenden Studie wir M&auml;use mit isolierten native &auml;u&szlig;ere Membranproteine (OMPs) geimpft, &Auml;thanol-deaktiviert LVS (iLVS), oder gereinigt LVS Lipopolysaccharid (LPS) und beurteilt die F&auml;higkeit von jedem Impfstoff-Vorbereitung M&auml;use gegen pulmonale Challenge mit der virulenten Typ A F. Tularensis Belastung SchuS4 zu sch&uuml;tzen. Antik&ouml;rper-Isotypisierung gekennzeichnet, dass Th1 und Th2 Antik&ouml;rperantworten bei M&auml;usen nach Immunisierung mit OMPs oder iLVS, generiert wurden, w&auml;hrend LPS Immunisierung nur Immunglobulin eine Produktion gef&uuml;hrt. In &Uuml;berleben Studien OMP Immunisierung das h&ouml;chste Schutzniveau (50 % ige &Uuml;berlebensrate bei 20 Tage nach Infektion mit SchuS4), und gab die zugeh&ouml;rige Log 3 Reduktionen in der Milz und Leber bakteriellen Belastungen (im Vergleich zu nichtgeimpften M&auml;usen). Cytokine Quantisierung f&uuml;r den Sera SchuS4 gehandicapte M&auml;use darauf hingewiesen, dass OMP und iLVS Impfungen hohe Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha und Interleukin-2 (Il-2) induzierte Produktion, wohingegen nur OMP Immunisierung hohe Konzentrationen von IL-10 Produktion induziert. Im Vergleich dazu zeigten hohe Proinflammatory Cytokines, einschlie&szlig;lich RANTES Granulocyte Colony-stimulating Factor, IL-6, IL-1alpha, IL - 12 p 40 und KC, bei nichtgeimpften M&auml;usen, dass diese Zytokine Fortschreiten der Krankheit erleichtern k&ouml;nnen. Zusammengenommen zeigen die Ergebnisse dieser Studie das potenzielle Dienstprogramm einer OMP-Untereinheit (azellul&auml;rer) Impfung zum Schutz von S&auml;ugetieren gegen Typ A F. Tularensis.

Native &auml;u&szlig;ere Membranproteine sch&uuml;tzen M&auml;use gegen pulmonale Challenge mit virulenten Typ A Francisella Tularensis.

Francisella tularensis &egrave; un batterio gram-negativo intracellulare e l&#39;agente eziologico della tularemia malattia zoonotica. F. tularensis &egrave; un agente di selezione categoria A e quindi un potenziale agente di bioterrorismo. Considerando che un F. tularensis live, vaccino attenuato ceppo (LVS) &egrave; la base di un vaccino in fase di sperimentazione, questo vaccino non &egrave; autorizzato per uso umano a causa delle preoccupazioni di sicurezza e di efficacia. Nel presente studio, immunizzati topi con le proteine della membrana esterna nativo isolato (OMPs), etanolo-inattivato LVS (iLVS), o purificato lipopolisaccaride (LPS) di LVS e valutata la capacit&agrave; di ogni preparazione vaccino per proteggere i topi contro sfida polmonare con ceppo tularensis virulento tipo A F. SchuS4. Anticorpo isotyping indicato che sia Th1 che Th2 risposte anticorpali sono state generate in topi dopo immunizzazione con OMPs o iLVS, considerando che l&#39;immunizzazione LPS ha provocato solo una produzione di immunoglobuline. Negli studi di sopravvivenza, immunizzazione OMP fornito il pi&ugrave; alto livello di protezione (50% di sopravvivenza a 20 giorni dopo l&#39;infezione con SchuS4), e c&#39;erano riduzioni 3-log associati gli oneri di batterici della milza e del fegato (rispetto a topi vaccinati). Cytokine quantificazione per i sieri dei topi ha sfidato SchuS4 indicato che vaccinazioni OMP e iLVS indotta da alti livelli di fattore di necrosi tumorale alfa e interleuchina-2 (IL-2) produzione, considerando che solo l&#39;immunizzazione OMP indotta da alti livelli di produzione di IL-10. In confronto, alti livelli di citochine proinfiammatorie, tra cui RANTES, colony-stimulating factor di granulociti, IL-6, IL-1alpha, IL-12 p 40 e KC, nei topi vaccinati indicato che queste citochine possono facilitare la progressione della malattia. Presi insieme, i risultati di questo studio dimostrano l&#39;utilit&agrave; potenziale di vaccino OMP subunit&agrave; (acellulare) per la protezione dei mammiferi contro tipo un F. tularensis.

Proteine della membrana esterna nativo proteggono i topi contro sfida polmonare con virulento tipo A Francisella tularensis.

&#x91CE;&#x514E;&#x75C5;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x4EBA;&#x7363;&#x5171;&#x901A;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x91CE;&#x514E;&#x75C5;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x7269;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; F.&#x75C5;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B4;&#x30EA;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C6;&#x30ED;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002; F.&#x75C5;&#x83CC;&#x5F31;&#x6BD2;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x682A;&#xFF08;LVS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x9A13;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3068;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x306E;&#x61F8;&#x5FF5;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;OMPS&#xFF09;&#x3001;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;LVS&#xFF08;iLVS&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;LVS&#x306E;&#x30EA;&#x30DD;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF08;LPS&#xFF09;&#x3092;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x3057;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3068;&#x80BA;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5404;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x88FD;&#x5264;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;F.&#x75C5;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A;SchuS4&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;LPS&#x63A5;&#x7A2E;&#x306E;&#x307F;&#x304C;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;Th1&#x304A;&#x3088;&#x3073;Th2&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x306E;OMP&#x307E;&#x305F;&#x306F;iLVS&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x5F8C;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;OMP&#x63A5;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#xFF08;SchuS4&#x611F;&#x67D3;&#x5F8C;20&#x65E5;&#x3067;50&#xFF05;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#xFF09;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;3&#x30ED;&#x30B0;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3068;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x8CA0;&#x62C5;&#x3092;&#xFF08;nonvaccinated&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#xFF09;&#x304C;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; SchuS4&#x4E0D;&#x81EA;&#x7531;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8840;&#x6E05;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;OMP&#x63A5;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;IL-10&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;OMP&#x3068;iLVS&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3B1;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;-2&#xFF08;IL-2&#xFF09;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;RANTES&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x7403;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;IL-6&#x3001;IL-1&#x3B1;&#x3001;IL-12p40&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;KC&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;nonvaccinated&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;F&#x306E;&#x75C5;&#x83CC;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;OMP&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x514E;&#x75C5;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x578B;&#x3068;&#x80BA;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;

Francisella tularensis&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; zoonotic &#xC9C8;&#xBCD1; tularemia&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xB300;&#xB9AC;&#xC778;. F. tularensis &#xCE74;&#xD14C;&#xACE0;&#xB9AC; &#xC120;&#xD0DD; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xC624;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. F. tularensis &#xC0AC;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xAC10;&#xC1E0; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; (LVS) &#xC870;&#xC0AC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;,&#xC774; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC740; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xACFC; &#xC548;&#xC804;&#xC131; &#xBB38;&#xC81C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD5C8;&#xAC00; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (OMPs)&#xC640; &#xC950; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;, &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C; inactivated LVS (iLVS) &#xB610;&#xB294; LVS lipopolysaccharide (LPS) &#xC815;&#xD654; &#xBC0F; &#xC545;&#xC131; &#xD0C0;&#xC785; A F. tularensis &#xBCC0;&#xD615; Schus4&#xC640; &#xD3D0;&#xB3C4; &#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC950;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC01; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC900;&#xBE44; &#xB2A5;&#xB825; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xD56D; &#xCCB4; isotyping LPS &#xC608;&#xBC29;&#xC811;&#xC885; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;&#xB9CC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; Th1 &#xBC0F; Th2 &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5; OMPs &#xB610;&#xB294; iLVS, &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xC874; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; OMP &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885; &#xBCF4;&#xD638; (SchuS4 &#xAC10;&#xC5FC; &#xD6C4; 20 &#xC77C; &#xB0B4;&#xC5D0; 50% &#xC0DD;&#xC874;), &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; 3-&#xB85C;&#xADF8; &#xAC10;&#xC18C; (nonvaccinated &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;) &#xBE44;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xAC04; &#xC138;&#xADE0; &#xBD80;&#xB2F4;&#xC5D0; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. SchuS4 &#xB3C4;&#xC804; &#xC0DD;&#xC950;&#xB294; &#xC138;&#xB77C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Cytokine &#xC815;&#xB7C9; OMP &#xBC0F; iLVS &#xC811;&#xC885; &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; interleukin-2 (&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2)&#xC758; &#xC0C1;&#xBD80; &#xC720;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC0B0;, &#xBC18;&#xBA74;&#xB9CC; OMP &#xBA74;&#xC5ED; &#xC720;&#xB3C4; IL-10 &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC0C1;&#xBD80;. &#xBE44;&#xAD50; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368;, proinflammatory cytokines, nonvaccinated &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; RANTES granulocyte &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xC790;&#xADF9; &#xC778;&#xC790;, &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6, IL 1alpha, IL-12 40 p, KC&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; cytokines &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCD2C;&#xC601;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720;&#xD615; F. tularensis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; OMP &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (acellular) &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE30;&#xBCF8; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xD638; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xB958; A Francisella tularensis &#xD3D0; &#xACFC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;.

Francisella tularensis es una bacteria intracelular gram-negativa y el agente causante de la tularemia enfermedad zoon&#xF3;tica. F. tularensis es una categor&#xED;a de un agente de selecci&#xF3;n y por lo tanto un posible agente de bioterrorismo. Considerando que F. tularensis en vivo, vacuna contra la cepa atenuada (LVS) es la base de una vacuna en investigaci&#xF3;n, esta vacuna no est&#xE1; aprobada para uso humano debido a las preocupaciones de seguridad y eficacia. En el presente estudio, se inmunizaron ratones con las prote&#xED;nas nativas aisladas de membrana externa (OMP), las inactivadas etanol-LVS (ILVS), o lipopolisac&#xE1;rido purificado LVS (LPS) y se evalu&#xF3; la capacidad de cada preparaci&#xF3;n de la vacuna para proteger a los ratones contra el desaf&#xED;o pulmonar con la virulenta tipo A, cepa F. tularensis SchuS4. Isotipado anticuerpos indicaron que tanto las respuestas de anticuerpos Th1 y Th2 se generaron en ratones despu&#xE9;s de la inmunizaci&#xF3;n con OMPs o ILVS, mientras que la inmunizaci&#xF3;n LPS dio lugar a una producci&#xF3;n &#xFA;nica inmunoglobulina. En estudios de supervivencia, la inmunizaci&#xF3;n OMP siempre el mayor nivel de protecci&#xF3;n (50% de supervivencia a 20 d&#xED;as despu&#xE9;s de la infecci&#xF3;n con el SchuS4), y no se asociaron 3-registro de las reducciones en el bazo y las cargas bacterianas del h&#xED;gado (en comparaci&#xF3;n con los ratones no vacunados). Cuantificaci&#xF3;n de citoquinas para los sueros de los ratones SchuS4-impugnadas indic&#xF3; que OMP y vacunas ILVS inducida altos niveles de factor de necrosis tumoral y la interleucina 2 (IL-2) de producci&#xF3;n, mientras que s&#xF3;lo la inmunizaci&#xF3;n OMP inducida altos niveles de IL-10. En comparaci&#xF3;n, los altos niveles de citoquinas proinflamatorias, incluyendo RANTES, granulocitos factor estimulante de colonias, IL-6, IL-1 alfa, IL-12p40, y KC, en los ratones no vacunados indica que estas citoquinas puede facilitar la progresi&#xF3;n de la enfermedad. En conjunto, los resultados de este estudio demuestran la utilidad potencial de una subunidad de OMP (acelular) para proteger a los mam&#xED;feros contra el tipo A, F. tularensis.

Nativos prote&#xED;nas de membrana externa proteger a los ratones contra el desaf&#xED;o pulmonar con un tipo virulento Francisella tularensis

&#x571F;&#x62C9;&#x7269;&#x79CD;&#x5206;&#x6CCC;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; rhizoferrin &#x83B7;&#x5F97;&#x4E09;&#x4EF7;&#x94C1;&#x805A;&#x7FA7;&#x9178;&#x76D0;&#x55DC;&#x94C1;&#x7D20;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x571F;&#x62C9;&#x94C1;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5408;&#x6210;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F7D;&#x4E8E;&#x64CD;&#x7EB5;&#x76AE;&#x6BDB;&#x8C03;&#x8282;&#x5B50; &#xFF08;&#x6307;&#x5B9A;&#x56FE;&#x6216; fsl&#xFF09; &#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E03;&#x4E2A; ORFs &#x5305;&#x62EC;&#x6BDB;&#x76AE;&#x3002;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E4B;&#x95F4; figE &#x548C; figF &#x4EE5;&#x53CA; figD &#x548C; figE &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x5728;&#x56DB;&#x4E2D;&#x571F;&#x62C9; novicida U112 &#x8FD9;&#x4E9B; ORFs (figE&#x3001; figC&#x3001; figD&#x3001; figB&#xFF09; &#x5EFA;&#x9020;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C; F.novicida figA &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x56DB;&#x4E2A;&#x589E;&#x957F;&#x901F;&#x5EA6;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x7684;&#x94C1;&#x5145;&#x6EE1;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E94;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8F7B;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x94C1;&#x9650;&#x5236;&#x5A92;&#x4F53;&#x3002;&#x5F53;&#x94C1; rhizoferrin &#x5DF2;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x94C1;&#x6709;&#x9650;&#x516C;&#x53F8;&#x5A92;&#x4F53;&#x65F6;&#xFF0C;figA&#x3001; figB&#x3001; figC &#x548C; figD &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x88AB;&#x6062;&#x590D;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5F97;&#x5230;&#x94C1;&#x5145;&#x65A5;&#x5A92;&#x4F53;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5916;&#x90E8;&#x6DFB;&#x52A0;&#x94C1;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E0D;&#x80FD;&#x62EF;&#x6551; figE &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x5F53; Chrome Azurol S &#x5316;&#x9A8C;&#x4E86;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x55DC;&#x94C1;&#x7D20;&#x751F;&#x4EA7;&#x65F6;&#xFF0C;figA&#xFF0C;figB &#x548C; figC &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x88AB;&#x5408;&#x6210;&#x55DC;&#x94C1;&#x7D20;&#xFF0C;&#x800C; figD &#x548C; figE &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EA7;&#x751F;&#x55DC;&#x94C1;&#x7D20;&#x5728;&#x5404;&#x7EA7;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7236;&#x5E94;&#x53D8;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3002;

&#x65E0;&#x82B1;&#x679C;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x571F;&#x62C9; novicida U112 &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Francisella species secrete a polycarboxylate siderophore that resembles rhizoferrin to acquire ferric iron. Several of the Francisella siderophore synthesis genes are contained in a Fur-regulated operon (designated fig or fsl) comprised of at least seven ORFs including fur. Reverse transcriptase-PCR showed transcriptional linkage between figD and figE and between figE and figF. Mutations were constructed in four of these ORFs (figB, figC, figD, and figE) in Francisella novicida U112. All four of these new mutants and a F. novicida figA mutant grew at rates comparable to that of wild type under iron-replete conditions but growth of all five mutants was stunted in iron-limiting media. When ferric rhizoferrin was added to the iron-limited media, growth of the figA, figB, figC, and figD mutants was restored to levels similar to those obtained in iron-replete media. However, this exogenously added siderophore could not rescue the figE mutant. When Chrome Azurol S assays were used to measure siderophore production, the figA, figB, and figC mutants were markedly deficient in their ability to synthesize siderophore whereas the figD and figE mutants produced siderophore at levels equivalent to the wild-type parent strain.

Characterization of fig operon mutants of Francisella novicida U112.

Esp&#xE8;ces de Francisella s&#xE9;cr&#xE8;tent un sid&#xE9;rophore polycarboxylate qui ressemble &#xE0; rhizoferrin d&#x26;#39;acqu&#xE9;rir le fer ferrique. Plusieurs des g&#xE8;nes de synth&#xE8;se des sid&#xE9;rophores Francisella sont contenues dans un op&#xE9;ron de la fourrure-r&#xE9;glement&#xE9; (d&#xE9;sign&#xE9; figue ou fsl) compos&#xE9; d&#x26;#39;au moins sept ORFs y compris la fourrure. Transcriptase inverse-PCR a montr&#xE9; une liaison entre la transcription et figD fig&#xE9; et entre fig&#xE9; et FIGF. Des mutations ont &#xE9;t&#xE9; construits dans quatre de ces ORF (figB, la FIGC, figD et fig&#xE9;) &#xE0; Francisella novicida U112. Tous les quatre de ces nouveaux mutants et un F. novicida fig A mutantes ont augment&#xE9; &#xE0; des taux comparables &#xE0; celle de type sauvage en vertu de fer remplis les conditions, mais la croissance de l&#x26;#39;ensemble des cinq mutants a &#xE9;t&#xE9; retard&#xE9;e en fer de limitation des m&#xE9;dias. Lorsque ferrique rhizoferrin a &#xE9;t&#xE9; ajout&#xE9; aux m&#xE9;dias de fer limit&#xE9;es, la croissance de la fig A, figB, la FIGC, et les mutants figD a &#xE9;t&#xE9; restaur&#xE9; &#xE0; des niveaux similaires &#xE0; ceux obtenus dans le fer-remplis m&#xE9;dias. Toutefois, ce sid&#xE9;rophore ajout&#xE9; de mani&#xE8;re exog&#xE8;ne ne pouvait pas sauver le mutant fig&#xE9;. Lorsque des essais Chrome azurol S ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour mesurer la production de sid&#xE9;rophores, les mutants Figa, figB, et la FIGC ont &#xE9;t&#xE9; nettement d&#xE9;ficiente dans leur capacit&#xE9; &#xE0; synth&#xE9;tiser des sid&#xE9;rophores alors que les mutants figD et fig&#xE9; produit sid&#xE9;rophore &#xE0; des niveaux &#xE9;quivalents &#xE0; la souche parentale de type sauvage.

Caract&#xE9;risation de la figure Mutants Operon de Francisella novicida U112

Francisella Arten sezernieren ein Polycarboxylat-Siderophore, die &auml;hnelt Rhizoferrin Eisen Eisen zu gewinnen. Einige der Francisella Siderophore Synthese Gene befinden sich in ein Fell reguliert Operon (Abb. oder Fsl bezeichnet) besteht aus mindestens sieben ORFs einschlie&szlig;lich Fell. Reverse Transkriptase-PCR zeigte transkriptionelle Verkn&uuml;pfung zwischen FigD und Feigenbawm und Feigenbawm und FigF. Mutationen wurden in vier von diesen ORFs (FigB, FigC, FigD und Feigenbawm) in Francisella Novicida U112 errichtet. Alle vier von diesen neuen Mutanten und F. Novicida FigA Mutanten wuchs zu Preisen vergleichbar mit der Wildtyp unter Eisen-vollgestopft Bedingungen aber Wachstum aller f&uuml;nf Mutanten wurde Eisen-Begrenzung verk&uuml;mmert Medien. Als ferric Rhizoferrin Eisen-begrenzte Medien hinzugef&uuml;gt wurde, war Wachstum der FigA, FigB, FigC und FigD-Mutanten auf ein Niveau &auml;hnlich denen in Eisen-vollgestopft Medien wiederhergestellt. Jedoch hinzugef&uuml;gt das exogen, Siderophore der Mutant Feigenbawm nicht retten konnte. Wenn Chrome Azurol S Proben Siderophore Produktion Messen verwendet wurden, waren die FigA, FigB und FigC Mutanten deutlich mangelhaft in ihrer F&auml;higkeit, Siderophore zu synthetisieren, w&auml;hrend die FigD und Feigenbawm Mutanten Siderophore auf Ebenen entspricht der Wildtyp-Stammkultur hergestellt.

Charakterisierung der feige Operon Mutanten von Francisella Novicida U112.

Francisella tularensis specie secernono un sideroforo policarbossilato che assomiglia a rhizoferrin per l&#39;acquisizione del ferro ferrico. Molti dei geni Francisella tularensis sideroforo sintesi sono contenute in un pelliccia-regolato operone (designato fico o fsl) composto da almeno sette ORFs compreso pelliccia. Reverse transcriptase-PCR ha mostrato transcriptional linkage tra figD e figE e tra figE e figF. Le mutazioni sono state costruite in quattro di questi ORF (figB, figC, figD e figE) in Francisella novicida U112. Tutti e quattro questi nuovi mutanti e un F. novicida figA mutante &egrave; cresciuto a tassi paragonabile a quella di tipo selvatico in condizioni di piene di ferro ma fu stentata crescita di tutte le cinque mutanti in ferro-limitando media. Quando rhizoferrin ferrico &egrave; stato aggiunto ai media ferro-limited, crescita dei mutanti che figA, figB, figC e figD fu restaurata a livelli analoghi a quelli ottenuti in media piena di ferro. Tuttavia, questo aggiunto esogenicamente sideroforo non potrebbe salvare il mutante figE. Quando Chrome Azurol S dosaggi sono stati utilizzati per misurare la produzione sideroforo, la figA, figB e figC mutanti sono stati nettamente carente nella loro capacit&agrave; di sintetizzare sideroforo considerando che i mutanti figD e figE prodotto sideroforo a livelli equivalenti al ceppo wild-type padre.

Caratterizzazione di mutanti operone fico di Francisella novicida U112.

&#x91CE;&#x514E;&#x7A2E;&#x306F;rhizoferrin&#x306F;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9244;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x9178;&#x30B7;&#x30C7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x91CE;&#x514E;&#x30B7;&#x30C7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x5408;&#x6210;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306F;&#x6BDB;&#x76AE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;7&#x500B;&#x306E;ORF&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x6BDB;&#x76AE;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x56F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;FSL&#xFF09;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;-PCR&#x306F;figD&#x3068;figE&#x9593;figE&#x3068;figF&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x514E;novicida U112&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;ORF&#x306E;4&#x3064;&#xFF08;figB&#x3001;figC&#x3001;figD&#x3001;&#x3068;figE&#xFF09;&#x306B;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;4&#x3068;F. novicida figA&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x9244;&#x3044;&#x3063;&#x3071;&#x3044;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;5&#x3064;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#x3001;&#x9244;&#x5236;&#x9650;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x767A;&#x80B2;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9244;rhizoferrin&#x306F;&#x3001;&#x9244;&#x304C;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;figA&#x3001;figB&#x3001;figC&#x3001;&#x3068;figD&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#x9244;&#x3044;&#x3063;&#x3071;&#x3044;&#x306E;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x7684;&#x306B;&#x6DFB;&#x52A0;&#x30B7;&#x30C7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306F;figE&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x6551;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x30A2;&#x30BA;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;S&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x30B7;&#x30C7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;figA&#x3001;figB&#x3001;&#x3068;figC&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;figD&#x3068;figE&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x89AA;&#x682A;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x30B7;&#x30C7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30C7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;

&#x91CE;&#x514E;Novicida U112&#x306E;&#x56F3;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;

Francisella &#xC885; &#xCCA0; &#xCCA0; &#xC778;&#xC218; rhizoferrin &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; polycarboxylate siderophore &#xBD84; &#xBE44;. Francisella siderophore &#xD569;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC624; &#xD55C; &#xBAA8;&#xD53C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD398;&#xB860; (&#xADF8;&#xB9BC; &#xB610;&#xB294; fsl &#xC9C0;&#xC815;) &#xBAA8;&#xD53C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 7 ORFs &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; PCR transcriptional &#xC5F0;&#xACC4; figD &#xBC0F; figE &#xBC0F; Fige&#xC640; Figf&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xC774; 4 Francisella novicida u112&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; ORFs (figB, figC, figD, &#xBC0F; figE)&#xC5D0; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; F. novicida figA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; 4 &#xCCA0; &#xCDA9;&#xB9CC; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBAA8;&#xB4E0; 5 &#xBA85;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xCCA0; &#xC81C;&#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC800;&#xD558;&#xB294; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;. &#xCCA0; rhizoferrin &#xCCA0; &#xC81C;&#xD55C; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C;, figA, figB, figC, &#xBC0F; figD &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xCCA0; &#xCDA9;&#xB9CC; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; &#xAC83;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; exogenously siderophore figE &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC218; &#xCD94;&#xAC00;. &#xD06C;&#xB86C; Azurol S &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; siderophore &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;, figA, figB, &#xBC0F; figC &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; figD &#xBC0F; figE &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBD80;&#xBAA8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; siderophore&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; siderophore&#xC744; &#xD569;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4;.

Francisella novicida u112&#xC758; &#xADF8;&#xB9BC; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;.

Especies de Francisella secretan un sider&#xF3;foro policarboxilato que se asemeja a rhizoferrin para adquirir hierro f&#xE9;rrico. Varios de los genes de s&#xED;ntesis de sider&#xF3;foros Francisella est&#xE1;n contenidos en un oper&#xF3;n Fur-regulado (designado higo o FSL) compuesto de al menos siete ORFs incluida la piel. La transcriptasa inversa-PCR mostr&#xF3; una vinculaci&#xF3;n entre la transcripci&#xF3;n y la figD FIGE y entre FIGE y FIGF. Las mutaciones fueron construidas en cuatro de estos ORFs (figB, FIGC, figD y FIGE) en Francisella novicida U112. Estos cuatro nuevos mutantes y un F. novicida fig A mutantes creci&#xF3; a tasas comparables a las de tipo salvaje en hierro repletos de condiciones, pero el crecimiento de los cinco mutantes se hab&#xED;a detenido en el hierro de limitaci&#xF3;n de los medios de comunicaci&#xF3;n. Cuando f&#xE9;rrico rhizoferrin se a&#xF1;adi&#xF3; a los medios de comunicaci&#xF3;n de hierro limitados, el crecimiento de la figa, figB, la FIGC, y los mutantes figD fue restaurada a niveles similares a los obtenidos en hierro repletos de medios de comunicaci&#xF3;n. Sin embargo, este sider&#xF3;foro ex&#xF3;gena no pudo rescatar a la FIGE mutante. Cuando los ensayos de cromo azurol S fueron utilizados para medir la producci&#xF3;n de sider&#xF3;foros, los mutantes figa, figB, y la FIGC fueron marcadamente deficientes en su capacidad de sintetizar sider&#xF3;foros, mientras que los mutantes figD y FIGE sider&#xF3;foro producido en los niveles equivalentes a la cepa parental de tipo salvaje.

Caracterizaci&#xF3;n de la figura mutantes Operon de Francisella novicida U112

&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4F9D;&#x9760;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x819C;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;QseC&#xFF0C;&#x4EE5;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E3B;&#x673A;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x81F4;&#x75C5;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;LED209&#xFF0C;&#xFF0C;&#x5230; QseC&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x5176;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x6291;&#x5236; QseC &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;LED209 &#x4E0D;&#x662F;&#x6709;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236;&#x75C5;&#x539F;&#x751F;&#x957F; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5916;&#x53CA;&#x52A8;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x3002;&#x6291;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5E7F;&#x8C31;&#x6297;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6218;&#x7565;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9; QseC &#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x6BD2;&#x529B;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Many bacterial pathogens rely on a conserved membrane histidine sensor kinase, QseC, to respond to host adrenergic signaling molecules and bacterial signals in order to promote the expression of virulence factors. Using a high-throughput screen, we identified a small molecule, LED209, that inhibits the binding of signals to QseC, preventing its autophosphorylation and consequently inhibiting QseC-mediated activation of virulence gene expression. LED209 is not toxic and does not inhibit pathogen growth; however, this compound markedly inhibits the virulence of several pathogens in vitro and in vivo in animals. Inhibition of signaling offers a strategy for the development of broad-spectrum antimicrobial drugs.

Targeting QseC signaling and virulence for antibiotic development.

Plusieurs bact&eacute;ries pathog&egrave;nes s&#39;appuient sur une kinase de capteur d&#39;histidine membrane conserv&eacute;e, QseC, pour r&eacute;pondre &agrave; des signaux bact&eacute;riennes afin de favoriser l&#39;expression des facteurs de virulence et de mol&eacute;cules de signalisation adr&eacute;nergique h&ocirc;te. &Agrave; l&#39;aide d&#39;un &eacute;cran de haut d&eacute;bit, nous avons identifi&eacute; une petite mol&eacute;cule, LED209, qui inhibe la liaison des signaux de QseC, emp&ecirc;chant son autophosphorylation et par cons&eacute;quent inhibant QseC m&eacute;di&eacute;e par l&#39;activation d&#39;expression de g&egrave;nes de virulence. LED209 n&#39;est pas toxique et n&#39;inhibe pas la croissance de l&#39;agent pathog&egrave;ne ; Cependant, ce compos&eacute; inhibe fortement la virulence des pathog&egrave;nes plusieurs in vitro et in vivo chez les animaux. L&#39;inhibition de la signalisation propose une strat&eacute;gie pour le d&eacute;veloppement de m&eacute;dicaments antimicrobiens &agrave; large spectre.

Ciblage QseC de signalisation et de virulence pour le d&eacute;veloppement aux antibiotiques.

Viele bakterielle Krankheitserreger beruhen auf einer konservierten Membran Histidin Sensor Kinase, QseC, reagieren auf Host adrenerge signalisierende Molek&uuml;le und bakterielle Signale um den Ausdruck von Virulenzfaktoren zu f&ouml;rdern. Mit einer Hochdurchsatz-Screen, haben wir ein kleines Molek&uuml;l, LED209, die die Bindung von Signalen zu QseC, verhindert die Autophosphorylierung und folglich Hemmung QseC-vermittelte Aktivierung der Virulenz Genexpression hemmt identifiziert. LED209 ist nicht giftig und Pathogen Wachstum nicht beeintr&auml;chtigt; Diese Verbindung hemmt jedoch deutlich die Virulenz von mehreren Krankheitserregern in vitro und in vivo bei Tieren. Hemmung der Signalisierung bietet eine Strategie f&uuml;r die Entwicklung von Breitspektrum antimikrobielle Medikamente.

QseC Signalisierung und Virulenz f&uuml;r antibiotische Entwicklung im Visier.

Molti agenti patogeni batterici si basano su una chinasi sensore di istidina membrana conservata, QseC, per rispondere alle molecole di segnalazione adrenergici host e batteriche segnali al fine di promuovere l&#39;espressione di fattori di virulenza. Usando uno schermo ad alta velocit&agrave;, abbiamo individuato una piccola molecola, LED209, che inibisce il legame di segnali di QseC, impedendo il autophosphorylation e inibendo di conseguenza QseC-mediata attivazione dell&#39;espressione genica di virulenza. LED209 non &egrave; tossico e non inibire la crescita di agenti patogeni; Tuttavia, questo composto inibisce marcatamente la virulenza di diversi agenti patogeni in vitro e in vivo negli animali. Inibizione di segnalazione propone una strategia per lo sviluppo di farmaci antimicrobici ad ampio spettro.

Targeting QseC segnalazione e virulenza per lo sviluppo di antibiotico.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x819C;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; &#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x4EAC;&#x5927;&#x5DE5;&#x91CF;&#x5B50;&#x7406;&#x5DE5;&#x3001;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x4EAC;&#x5927;&#x5DE5;&#x91CF;&#x5B50;&#x7406;&#x5DE5;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x4EAC;&#x5927;&#x5DE5;&#x91CF;&#x5B50;&#x3092;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B; LED209 &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;LED209 &#x306F;&#x6BD2;&#x6027;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x3044;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x6291;&#x5236;&#x5E83;&#x57DF;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x6297;&#x83CC;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EAC;&#x5927;&#x5DE5;&#x91CF;&#x5B50;&#x7406;&#x5DE5;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3002;

&#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xB9C9; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; &#xC13C;&#xC11C; kinase, QseC, &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xC62C;&#xB9AC;&#xB824;&#xBA74; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;, LED209, QseC, &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; autophosphorylation&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; QseC &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C5;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD30C;&#xC545;. Led209&#xC740; &#xB3C5;&#xC131;&#xACFC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744;;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC740; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0; &#xCCB4; &#xC678; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; in vivo &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5B5;&#xC81C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD56D;&#xADE0; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

QseC &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC9C0;&#xC815;.

Muchos pat&oacute;genos bacterianos dependen de una quinasa de sensor de membrana conservada histidina, QseC, para responder a las mol&eacute;culas de se&ntilde;alizaci&oacute;n adren&eacute;rgicos anfitri&oacute;n y se&ntilde;ales bacterianas con el fin de promover la expresi&oacute;n de factores de virulencia. Usando una pantalla de alto rendimiento, identificamos una peque&ntilde;a mol&eacute;cula, LED209, que inhibe la Uni&oacute;n de las se&ntilde;ales a QseC, prevenir su autophosphorylation y por consiguiente inhibici&oacute;n QseC mediada por la activaci&oacute;n de genes de virulencia. LED209 no es t&oacute;xico y no inhibir el crecimiento del pat&oacute;geno; sin embargo, este compuesto inhibe notablemente la virulencia de varios pat&oacute;genos in vitro e in vivo en animales. Inhibici&oacute;n de la se&ntilde;alizaci&oacute;n ofrece una estrategia para el desarrollo de antimicrobianos de amplio espectro.

Jason F. Huntley

Department of Microbiology

University of Texas Southwestern Medical Center

Method for the Isolation of Francisella tularensis Outer Membranes

Jason F. Huntley

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Microbiology

University of Texas Southwestern Medical Center

Method for the Isolation of Francisella tularensis Outer Membranes

Department of Microbiology