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Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using <em>In Utero</em> Electroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

University of Calgary 

&#x76AE;&#x5C42;&#x6295;&#x5C04;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x5206;&#x9694;&#x6210;&#x516D;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42;&#x6839;&#x636E;&#x5176;&#x51FA;&#x751F;&#x65E5;&#x671F;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6709;&#x5404;&#x79CD;&#x5F62;&#x6001;&#x3001; &#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x9884;&#x6D4B;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5171;&#x4EAB;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x533A;&#x57DF;&#x6807;&#x8BC6;&#x548C;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x8FD0;&#x884C; corticogenesis &#x6765;&#x6307;&#x5B9A;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7531;&#x5171;&#x4EAB;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x9700;&#x8981;&#x6307;&#x5B9A;&#x76AE;&#x8D28; (&#x533A;&#x57DF;)&#x3001; &#x8C37;&#x6C28;&#x9178; (&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;) &#x548C;&#x5C42;&#x6D41; &#xFF08;&#x65F6;&#x7A7A;&#xFF09; &#x5B57;&#x7B26;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x51FA;&#x751F; (&#x4F4E;&#x5C42;) &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x800C;&#x540C;&#x65F6;&#x9547;&#x538B;&#x66FF;&#x4EE3;&#x76AE;&#x8D28;&#x4E0B;&#x3001; &#x5B89;&#x57FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x578B; Ngn1 &#x548C; Ngn2&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x540E;&#x51FA;&#x751F; (&#x4E0A;&#x5C42;) &#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5728;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x6539;&#x4E3A;&#x8981;&#x6C42; Pax6 &#x548C; Tlx&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x8FD8;&#x63A7;&#x5236;/&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C;&#x76AE;&#x8D28;&#x4E0B;/&#x5B89;&#x57FA;&#x547D;&#x8FD0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E8C;&#x5143;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x534F;&#x540C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x6307;&#x5B9A;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x610F;&#x6599;&#x4E4B;&#x5916;&#x7684;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027;&#x4E2D;&#x6307;&#x5B9A;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x6295;&#x5C04;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x76AE;&#x5C42;&#x76F8;&#x7EE7;&#x9636;&#x6BB5;&#x6D89;&#x53CA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

Neocortical projection neurons, which segregate into six cortical layers according to their birthdate, have diverse morphologies, axonal projections and molecular profiles, yet they share a common cortical regional identity and glutamatergic neurotransmission phenotype. Here we demonstrate that distinct genetic programs operate at different stages of corticogenesis to specify the properties shared by all neocortical neurons. Ngn1 and Ngn2 are required to specify the cortical (regional), glutamatergic (neurotransmitter) and laminar (temporal) characters of early-born (lower-layer) neurons, while simultaneously repressing an alternative subcortical, GABAergic neuronal phenotype. Subsequently, later-born (upper-layer) cortical neurons are specified in an Ngn-independent manner, requiring instead the synergistic activities of Pax6 and Tlx, which also control a binary choice between cortical/glutamatergic and subcortical/GABAergic fates. Our study thus reveals an unanticipated heterogeneity in the genetic mechanisms specifying the identity of neocortical projection neurons.

Sequential phases of cortical specification involve Neurogenin-dependent and -independent pathways.

Neurones de projection, qui s&#xE9;parent n&#xE9;ocorticaux en six couches corticales en fonction de leur date de naissance, ont des morphologies diverses, projections axonales et des profils mol&#xE9;culaires, mais ils partagent une identit&#xE9; commune corticale r&#xE9;gionale et le ph&#xE9;notype neurotransmission glutamatergique. Nous d&#xE9;montrons ici que programmes distincts g&#xE9;n&#xE9;tiques fonctionnent &#xE0; diff&#xE9;rents stades de corticogen&#xE8;se pour sp&#xE9;cifier les propri&#xE9;t&#xE9;s partag&#xE9;es par tous les neurones du n&#xE9;ocortex. Ngn1 et Ngn2 sont tenus de pr&#xE9;ciser la corticale (r&#xE9;gionale), glutamatergique (neurotransmetteur) et laminaire (temporelle) de caract&#xE8;res au d&#xE9;but n&#xE9;s (couche inf&#xE9;rieure) neurones, tout en r&#xE9;primant une alternative sous-corticale, ph&#xE9;notype GABAergique neuronale. Par la suite, plus tard-n&#xE9; (couche sup&#xE9;rieure) corticales neurones sont sp&#xE9;cifi&#xE9;s de mani&#xE8;re ind&#xE9;pendante Ngn, exigeant plut&#xF4;t que les activit&#xE9;s synergiques de Pax6 et Tlx, qui contr&#xF4;lent aussi un choix binaire entre destins corticales / glutamatergique et sous-corticales / GABAergique. Notre &#xE9;tude r&#xE9;v&#xE8;le ainsi une h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; impr&#xE9;vu dans les m&#xE9;canismes g&#xE9;n&#xE9;tiques en pr&#xE9;cisant l&#x26;#39;identit&#xE9; des neurones de projection du n&#xE9;ocortex.

Phases successives de la sp&#xE9;cification corticale Impliquer Neurogenin-d&#xE9;pendants et ind&#xE9;pendants de Pathways

Sequentiellen Phasen der kortikalen Spezifikation beinhalten Neurogenin-abh&#xE4;ngige und-unabh&#xE4;ngige Wege.

I neuroni corticali di proiezione, che segregano in sei strati corticali secondo la loro data di nascita, hanno diverse morfologie, proiezioni assonali e profili molecolari, ma condividono una comune identit&agrave; regionale corticale e fenotipo neurotrasmissione glutamatergico. Qui dimostriamo che programmi genetici distinti operano nelle diverse fasi di corticogenesis per specificare le propriet&agrave; condivise da tutti i neuroni corticali. &Egrave; necessario specificare la corticale (regionale), glutamatergico (neurotrasmettitore) e personaggi (temporale) laminare dei neuroni (livello inferiore) primi nati, mentre contemporaneamente reprimendo un&#39;alternativa sottocorticale, fenotipo neuronale GABAergic Ngn1 e Ngn2. Successivamente, pi&ugrave; tardi nato neuroni corticali (livello superiore) sono specificati in maniera indipendente dalla Ngn, che richiedono invece l&#39;attivit&agrave; sinergica di Pax6 e Tlx, che controllano anche una scelta binaria tra destini glutamatergico/corticale e sottocorticale/GABAergico. Il nostro studio rivela cos&igrave; un&#39;eterogeneit&agrave; impreviste nei meccanismi genetici specificando l&#39;identit&agrave; dei neuroni corticali di proiezione.

Fasi sequenziali della corticale specifica coinvolgono neurogenina-dipendente e - percorsi indipendenti.

&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x8A95;&#x751F;&#x65E5;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;6&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C64;&#x306B;&#x200B;&#x200B;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x6295;&#x5C04;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x5F62;&#x614B;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x6295;&#x5C04;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5171;&#x6709;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;corticogenesis&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; Ngn1&#x3068;Ngn2&#x304C;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x5225;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3001;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x306B;&#x751F;&#x307E;&#x308C;&#xFF08;&#x4E0B;&#x4F4D;&#x5C64;&#xFF09;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#xFF08;&#x5730;&#x57DF;&#xFF09;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#xFF09;&#x3068;&#x5C64;&#xFF08;&#x6642;&#x9593;&#xFF09;&#x306E;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5F8C;&#x3067;&#x751F;&#x307E;&#x308C;&#xFF08;&#x4E0A;&#x4F4D;&#x5C64;&#xFF09;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x76AE;&#x8CEA;/&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;GABA&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;/&#x76AE;&#x8CEA;&#x4E0B;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;&#x9078;&#x629E;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;Pax6&#x306E;&#x3068;TLX&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3001;NGN&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x6295;&#x5C04;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x7570;&#x8CEA;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x76AE;&#x8CEA;&#x4ED5;&#x69D8;&#x306E;&#x9010;&#x6B21;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Neurogenin&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;

&#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC0DD;&#xB144;&#xC6D4;&#xC77C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; neocortical &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xC158; &#xB274;&#xB7F0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBB38;&#xBC95;&#xACFC;, axonal &#xC608;&#xCE21; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC544;&#xC9C1; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD53C; &#xC9C8; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; glutamatergic neurotransmission &#xD45C;&#xD604; &#xD615;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0;&#xC720; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xBAA8;&#xB4E0; neocortical &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; corticogenesis&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ngn1&#xC640; ngn2&#xB294; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB300;&#xC548; subcortical, GABAergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xC5B5;&#xC555; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; (&#xC9C0;&#xC5ED;), glutamatergic (&#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;)&#xC640; &#xCD08;&#xAE30; &#xD0DC;&#xC5B4;&#xB09C; (&#xB0AE;&#xC740; &#xCE35;) &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xCE35; &#xB958; (&#xC2DC;&#xAC04;&#xC801;) &#xBB38;&#xC790;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xD6C4;, &#xC774;&#xD6C4; &#xCD9C;&#xC0DD; (&#xC0C1;&#xC704; &#xACC4;&#xCE35;) &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC2E0; Pax6 &#xBC0F; Tlx, &#xB610;&#xD55C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758;/glutamatergic&#xACFC; subcortical/GABAergic &#xC6B4;&#xBA85; &#xC0AC;&#xC774; &#xC774;&#xC9C4; &#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; Ngn &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; neocortical &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xC158; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; id&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB73B;&#xBC16;&#xB41C;&#xC774; &#xC9C8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

&#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC0AC;&#xC591;&#xC758; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; &#xB2E8;&#xACC4; Neurogenin &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xACBD;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568;.

Neuronas neocorticales de proyecci&#xF3;n, que se segregan en seis capas corticales de acuerdo a su fecha de nacimiento, tienen morfolog&#xED;as diversas, proyecciones axonales y perfiles moleculares, sin embargo, comparten una identidad com&#xFA;n cortical regional y fenotipo neurotransmisi&#xF3;n glutamat&#xE9;rgica. Aqu&#xED; nos demuestran que distintos programas gen&#xE9;ticos operan en diferentes etapas de corticogenesis para especificar las propiedades compartidas por todas las neuronas neocorticales. Ngn1 y Ngn2 est&#xE1;n obligados a especificar la cortical (regional), glutamat&#xE9;rgica (neurotransmisor) y laminar (temporal) de los primeros personajes nacidos (capa inferior), las neuronas, mientras que al mismo tiempo la represi&#xF3;n de una alternativa fenotipo subcortical, las neuronas GABA&#xE9;rgicas. Posteriormente, m&#xE1;s tarde, naci&#xF3; (capa superior) corticales neuronas se especifican de una manera independiente de las NGN, exigiendo en cambio las actividades sin&#xE9;rgicas de Pax6 y Tlx, que tambi&#xE9;n controlan una elecci&#xF3;n binaria entre destinos corticales / glutamat&#xE9;rgica y subcorticales / GABA&#xE9;rgicas. Nuestro estudio revela as&#xED; una heterogeneidad no anticipado en los mecanismos gen&#xE9;ticos que determinan la identidad de las neuronas de proyecci&#xF3;n neocortical.

Fases secuenciales de la Especificaci&#xF3;n cortical Involucrar Neurogenin-dependientes e independientes Caminos

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E; proneural &#x57FA;&#x56E0; Neurogenin1 (Ngn1) &#x548C; Ngn2 &#x90FD;&#x9700;&#x8981;&#x6307;&#x5B9A;&#x8868;&#x578B;&#x65E9;&#x671F;-&#x5E76;&#x4E0D;&#x665A;&#x51FA;&#x751F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x901A;&#x8FC7;&#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#x9547;&#x538B; Mash1&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E09; cortically &#x8868;&#x793A; proneural &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;Ngn1/2 &#x89C4;&#x8303;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x65F6;&#x95F4;&#x662F;&#x51FA;&#x4E4E;&#x9884;&#x6599;&#x7684;&#x9274;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x90FD;&#x8868;&#x793A;&#x6574;&#x4E2A;&#x76AE;&#x5C42;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x53BB;&#x5BFB;&#x627E;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7248;&#x672C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x900F;&#x9732; Ngn2 &#x548C; Mash1 &#x8868;&#x793A;&#x4EE5;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x504F;&#x89C1;&#x3001; &#x4E0D;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E2D;&#x671F; corticogenesis &#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x51C6;&#x7956;&#x57FA;&#x5E95;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F18;&#x60E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x51FD;&#x6570; Ngn2 &#x5728;&#x8FD9;&#x540E;&#x8005;&#x7684;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x9700;&#x8981;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x533A; (&#x503C;&#x5F97;) &#x5BA4;&#x7BA1;&#x819C;&#x4E0B;&#x533A;&#x5411;&#x76AE;&#x5C42;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x5883;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Ngn2 &#x89C4;&#x5B9A;&#x7956;&#x6210;&#x719F;&#x81F3;&#x5C11;&#x90E8;&#x5206;&#x901A;&#x8FC7;&#x9547;&#x538B; Mash1 misexpression Mash1 &#x5F3A;&#x70C8;&#x589E;&#x5F3A;&#x503C;&#x5F97;&#x4ECE;&#x7956;&#x683C;&#x9000;&#x51FA;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Mash1 &#x80FD;&#x591F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x53D1;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176;&#x91CD;&#x65B0;&#x6307;&#x5B9A;&#x76AE;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x662F; Mash1 &#x65B0;&#x578B;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x6A21;&#x578B;&#x5373; Ngn2 &#x548C; Mash1 &#x529F;&#x80FD;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EAC;&#x5411;&#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Proneural &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

We showed previously that the proneural genes Neurogenin1 (Ngn1) and Ngn2 are required to specify the phenotypes of early- and not late-born neurons in the neocortex, acting in part through repression of Mash1, a third cortically expressed proneural gene. The precise timing of Ngn1/2 specification activity was unexpected given these genes are expressed throughout cortical development, prompting us to search for a later function. Here we reveal that Ngn2 and Mash1 are expressed in a dynamic fashion, acquiring a cell cycle-biased, nonoverlapping distribution, with preferential expression in prospective basal progenitors, during mid corticogenesis. We also identified a new function for Ngn2 during this latter period, demonstrating that it is required to regulate the transit of cortical progenitors from the ventricular zone (VZ) to the subventricular zone. Notably, Ngn2 regulates progenitor maturation at least in part through repression of Mash1 as misexpression of Mash1 strongly enhanced progenitor cell exit from the VZ. Significantly, the ability of Mash1 to promote progenitor cell maturation occurred independently of its ability to respecify cortical cells and is thus a novel function for Mash1. Taken together, these data support a model whereby Ngn2 and Mash1 function together to regulate the zonal distribution of progenitors in the developing neocortex.

A role for proneural genes in the maturation of cortical progenitor cells.

Nous avons montr&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment que les g&#xE8;nes proneural Neurogenin1 (Ngn1) et Ngn2 sont n&#xE9;cessaires pour pr&#xE9;ciser les ph&#xE9;notypes de d&#xE9;but et la fin de non-n&#xE9;s neurones dans le n&#xE9;ocortex, agissant en partie gr&#xE2;ce &#xE0; la r&#xE9;pression des Mash1, un tiers des g&#xE8;nes exprim&#xE9;s corticale proneural. Le moment pr&#xE9;cis de l&#x26;#39;activit&#xE9; Ngn1 / 2 cahier des charges &#xE9;tait inattendue compte tenu de ces g&#xE8;nes sont exprim&#xE9;s au cours du d&#xE9;veloppement cortical, nous incitant &#xE0; rechercher une fonction plus tard. Ici, nous r&#xE9;v&#xE8;lent que Ngn2 et Mash1 sont exprim&#xE9;s de fa&#xE7;on dynamique, l&#x26;#39;acquisition d&#x26;#39;un cycle cellulaire polaris&#xE9;e, la distribution ne se chevauchent pas, avec une expression pr&#xE9;f&#xE9;rentielle dans les futurs g&#xE9;niteurs basales, au cours de la mi corticogen&#xE8;se. Nous avons &#xE9;galement identifi&#xE9; une nouvelle fonction pour Ngn2 au cours de cette derni&#xE8;re p&#xE9;riode, ce qui d&#xE9;montre qu&#x26;#39;il est n&#xE9;cessaire de r&#xE9;glementer le transit des prog&#xE9;niteurs corticaux de la zone ventriculaire (VZ) &#xE0; la zone sous-ventriculaire. Notamment, Ngn2 r&#xE9;glemente la maturation g&#xE9;niteur au moins en partie par la r&#xE9;pression de la d&#xE9;r&#xE9;gulation des Mash1 que Mash1 sortie de cellules souches fortement accru de la VZ. De mani&#xE8;re significative, la capacit&#xE9; de Mash1 pour favoriser la maturation de cellules prog&#xE9;nitrices s&#x26;#39;est produite ind&#xE9;pendamment de sa capacit&#xE9; &#xE0; sp&#xE9;cifier de cellules corticales et est donc une nouvelle fonction pour Mash1. Pris ensemble, ces donn&#xE9;es confirment un mod&#xE8;le dans lequel Ngn2 et Mash1 fonctionnent ensemble pour r&#xE9;glementer la distribution zonale des prog&#xE9;niteurs dans le n&#xE9;ocortex en d&#xE9;veloppement.

Un r&#xF4;le pour les g&#xE8;nes Proneural dans la maturation des cellules prog&#xE9;nitrices corticales

Wir zuvor zeigte, dass die Proneural Gene Neurogenin1 (Ngn1) und Ngn2 sind erforderlich, um die Ph&auml;notypen der fr&uuml;h anzugeben- und nicht sp&auml;t geboren Neuronen in der Gro&szlig;hirnrinde, handelnd teilweise durch Unterdr&uuml;ckung der Mash1, ein Drittel cortically ausgedr&uuml;ckt Proneural gen. Der genaue Zeitpunkt der Ngn1/2 Spezifikation Aktivit&auml;t war unerwartet angesichts dieser Gene werden ausgedr&uuml;ckt in kortikalen Entwicklung, fordert uns, f&uuml;r eine sp&auml;tere Funktion zu suchen. Hier zeigen wir, dass Ngn2 und Mash1 auf dynamische Weise ausgedr&uuml;ckt werden, die eine Zellzyklus-voreingenommen, nicht &uuml;berlappende Distribution, mit bevorzugten Ausdruck im prospektiven basale Vorfahre, w&auml;hrend Mitte Kortikogenese zu erwerben. Wir wurden auch eine neue Funktion f&uuml;r Ngn2 in dieser letzteren Zeit belegen, da&szlig; es erforderlich ist, um den Transit von kortikalen Vorl&auml;uferzellen aus der ventrikul&auml;ren Zone (VZ) auf die subventrikul&auml;re Zone zu regulieren. Insbesondere regelt Ngn2 Vorl&auml;uferzellen Reifung zumindest teilweise durch Unterdr&uuml;ckung von Mash1, wie Misexpression von Mash1 Vorl&auml;uferzellen Zelle Austritt aus der VZ stark verbessert. Deutlich, die F&auml;higkeit des Mash1 zur F&ouml;rderung der Stammvater Zelle Reifung aufgetreten ist, unabh&auml;ngig von seiner F&auml;higkeit, kortikale Zellen erneut angeben und ist somit eine neuartige Funktion f&uuml;r Mash1. Zusammengenommen unterst&uuml;tzen diese Daten ein Modell bei dem Ngn2 und Mash1-Funktion zusammen, um die zonale Verteilung von Vorl&auml;uferzellen in Entwicklungsl&auml;ndern Neocortex zu regulieren.

Eine Rolle f&uuml;r Proneural Gene in der Reifung der kortikalen Vorl&auml;uferzellen.

Abbiamo dimostrato in precedenza che i geni di proneural Neurogenin1 (Ngn1) e Ngn2 sono tenuti a specificare i fenotipi di presto- e i neuroni non tardo-nato nella neocorteccia, che agiscono in parte attraverso la repressione di Mash1, un terzo nella corteccia espresso proneural gene. Il momento preciso dell&#39;attivit&agrave; specifica Ngn1/2 &egrave; stato inaspettato dato questi geni sono espressi durante lo sviluppo corticale, ci spinge a cercare una funzione successiva. Qui vi sveliamo che Ngn2 e Mash1 sono espressi in maniera dinamica, acquisendo una distribuzione del ciclo cellulare-polarizzato, non sovrapposta, con espressione preferenziale in futuri progenitori basale, durante la met&agrave; corticogenesis. Abbiamo anche individuato una nuova funzione per Ngn2 durante questo periodo quest&#39;ultimo, dimostrando che essa &egrave; necessaria per regolare il transito dei progenitori corticale dalla zona ventricolare (VZ) nella zona subventricolare. In particolare, Ngn2 regola la maturazione progenitore almeno in parte attraverso la repressione di Mash1 come misexpression di Mash1 fortemente migliorata uscita cellula progenitore dal VZ. Significativamente, la capacit&agrave; di Mash1 per promuovere la maturazione delle cellule progenitrici si sono verificati indipendentemente dalla sua capacit&agrave; di rispecificare cellule corticali ed &egrave; quindi una funzione romanzo per Mash1. Presi insieme, questi dati supportano un modello per cui funzione Ngn2 e Mash1 insieme per regolare la distribuzione zona dei progenitori nella neocorteccia in via di sviluppo.

Un ruolo per proneural geni nella maturazione delle cellule progenitrici corticale.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;Neurogenin1&#xFF08;Ngn1&#xFF09;&#x3068;Ngn2&#x304C;MASH1&#x3001;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C9;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F8C;&#x534A;&#x751F;&#x307E;&#x308C;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;Ngn1 / 2&#x4ED5;&#x69D8;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x5F8C;&#x3067;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x691C;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x200B;&#x200B;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ngn2&#x3068;MASH1&#x4E2D;&#x65EC;corticogenesis&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x8868;&#x73FE;&#x3067;&#x3001;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x8133;&#x5BA4;&#x4E0B;&#x5E2F;&#x306B;&#x8133;&#x5BA4;&#x5E2F;&#xFF08;VZ&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x901A;&#x904E;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;Ngn2&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;Ngn2&#x306F;VZ&#x304B;&#x3089;MASH1&#x5F37;&#x304F;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x51FA;&#x53E3;&#x306E;&#x8AA4;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x3057;&#x3066;MASH1&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;MASH1&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x518D;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x305F;&#x3081;&#x3001;MASH1&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;Ngn2&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;MASH1&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5E2F;&#x72B6;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x76AE;&#x8CEA;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; proneural &#xC720;&#xC804;&#xC790; Neurogenin1 (Ngn1) &#xCD08;&#xAE30;&#xC758; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; ngn2&#xC640;-&#xD558;&#xC9C0; &#xB2A6;&#xAC8C; &#xD0DC;&#xC5B4;&#xB09C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD589;&#xB3D9; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; Mash1, &#xC5B5;&#xC555;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C; 3 cortically &#xD14D;&#xC758; proneural &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ngn1/2 &#xC0AC;&#xC591; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB418;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB098;&#xC911; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xD560; &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ngn2 &#xBC0F; mash1&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; &#xB3D9;&#xC801; &#xD328;&#xC158; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;, &#xACB9;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC720;&#xD1B5;, &#xC911;&#xBC18; corticogenesis &#xB3D9;&#xC548; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xAE30;&#xC800; progenitors &#xC6B0;&#xB300; &#xC2DD; &#xC778;&#xC218; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xB610;&#xD55C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD55C; ngn2&#xC774; &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xAC04; &#x5E2F;&#xB97C; &#xC2EC; &#xC2E4; &#xC601;&#xC5ED; (VZ)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD53C; &#xC9C8; progenitors&#xC758; &#xB300; &#xC911; &#xAD50;&#xD1B5;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD574;&#xC57C; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xD2B9;&#xD788;, Ngn2 Mash1 misexpression &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; VZ&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC885;&#xB8CC; &#xC2DC; &#xC870; &#xC131;&#xC219; mash1&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801; &#xC870;&#xC808;. &#xD06C;&#xAC8C;, mash1&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC219; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; mash1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; Ngn2 &#xBC0F; Mash1 &#xD568;&#xC218; &#xD568;&#xAED8; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD14D;&#xC5D0; progenitors&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xBCC4; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC870;&#xC808;.

&#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0;&#xC11C; proneural &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;.

Hemos demostrado previamente que los genes proneurales Neurogenin1 (Ngn1) y Ngn2 est&#xE1;n obligados a especificar los fenotipos de los primeros-y no a finales nacidos en las neuronas de la corteza cerebral, actuando en parte a trav&#xE9;s de la represi&#xF3;n de Mash1, un tercio de genes expresados &#x200B;&#x200B;proneural cortical. El momento preciso de Ngn1 / 2 de la especificaci&#xF3;n actividad fue inesperado dado que estos genes se expresan a trav&#xE9;s del desarrollo cortical, nos impulsa a buscar una funci&#xF3;n m&#xE1;s adelante. Aqu&#xED; nos revelan que Ngn2 Mash1 y se expresan de manera din&#xE1;mica, la adquisici&#xF3;n de un ciclo celular de polarizaci&#xF3;n, la distribuci&#xF3;n no se solapan, con expresi&#xF3;n preferencial en los futuros progenitores basales, durante mediados corticogenesis. Tambi&#xE9;n se identific&#xF3; una nueva funci&#xF3;n para Ngn2 durante este &#xFA;ltimo per&#xED;odo, lo que demuestra que es necesaria para regular el tr&#xE1;nsito de los progenitores de la corteza de la zona ventricular (VZ) para la zona subventricular. En particular, regula la maduraci&#xF3;n Ngn2 progenitora, al menos en parte a trav&#xE9;s de la represi&#xF3;n de Mash1 como misexpression de Mash1 salida de c&#xE9;lulas progenitoras fuerte aumento de la VZ. Significativamente, la capacidad de Mash1 para promover la maduraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas progenitoras se produjo independientemente de su capacidad de volver a especificar las c&#xE9;lulas corticales y es por tanto una funci&#xF3;n novedosa para Mash1. En conjunto, estos datos apoyan un modelo en el que Ngn2 y Mash1 funcionan juntos para regular la distribuci&#xF3;n zonal de los progenitores en el neoc&#xF3;rtex en desarrollo.

Un papel para los genes proneurales en la maduraci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas progenitoras corticales

&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x9057;&#x4F20;&#x6A21;&#x5757;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x76EE;&#x6807;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x7AEF;&#x8111;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x51FA;&#x53D1;&#x4E86;&#x73B0;&#x4EE3;&#x5316;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x8C03;&#x63A7;&#x5143;&#x4EF6;&#x5728;&#x9F20;&#x6807;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5BAB;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x8FC5;&#x901F;&#x66FF;&#x6362;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x6536;&#x76CA;&#x548C;&#x635F;&#x5931;-&#x7684;-&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7AEF;&#x8111;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6B64;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x5C1A;&#x5F85;&#x5145;&#x5206;&#x63A2;&#x7D22;&#x548C;&#x5229;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x7ECF;&#x9A8C;&#x786E;&#x5B9A;&#x6240;&#x9700;&#x76EE;&#x6807;&#x7279;&#x5B9A;&#x4EBA;&#x7FA4;&#x7684;&#x80CC;&#x4FA7;&#x7AEF;&#x8111;&#x6216;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9F20;&#x6807;&#x4E2D;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x9636;&#x6BB5;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C;&#x6D04;&#x6E38;&#x6027;&#x7684;&#x8BDE;&#x751F;&#x65E5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x63A5;&#x4E0B;&#x6765;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5; Ngn2 &#x5242;&#x901A;&#x8FC7;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x5BAB;&#x5185;&#x7684;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x540E;&#x8005;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x66F4;&#x52A0;&#x5FE0;&#x5B9E;&#x5730;&#x62A5;&#x544A;&#x884C; Ngn2lacZ &#x6572;&#x5165;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; telencephalic &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6D4B;&#x8BD5; telencephalic &#x5220;&#x9664;&#x6784;&#x9020;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; ER81 &#x4E0A;&#x6E38;&#x8C03;&#x63A7;&#x533A;&#xFF0C;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x627E;&#x51FA;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x5F3A;&#x5316;&#x5242;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x68A8;&#x72B6;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C;&#x5916;&#x4FA7;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#x4E0D;&#x5728;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x524D;&#x8111;&#x7684;&#x5185;&#x4FA7;&#x57DF;&#x663E;&#x793A;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x5BAB;&#x5185;&#x6280;&#x672F;&#x8FC5;&#x901F;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7684;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x6F14;&#x53D8;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#x7279;&#x5B9A;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x8C03;&#x63A7;&#x5143;&#x4EF6;&#x7684;&#x8BBA;&#x70B9;&#x3002;

&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5BAB;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7AEF;&#x8111;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x5143;&#x4EF6;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

With the ultimate goal of understanding how genetic modules have evolved in the telencephalon, we set out to modernize the functional analysis of cross-species cis-regulatory elements in mouse. In utero electroporation is rapidly replacing transgenesis as the method of choice for gain- and loss-of-function studies in the murine telencephalon, but the application of this technique to the analysis of transcriptional regulation has yet to be fully explored and exploited. To empirically define the developmental stages required to target specific populations of neurons in the dorsal telencephalon, or pallium, which gives rise to the neocortex in mouse, we performed a temporal and spatial analysis of the migratory properties of electroporated versus birth-dated cells. Next, we compared the activities of two known Ngn2 enhancers via transgenesis and in utero electroporation, demonstrating that the latter technique more faithfully reports the endogenous telencephalic expression pattern observed in an Ngn2lacZ knock-in line. Finally, we used this approach to test the telencephalic activities of a series of deletion constructs comprised of the zebrafish ER81 upstream regulatory region, allowing us to identify a previously uncharacterized enhancer that displays cross-species activity in the murine piriform cortex and lateral neocortex, yet not in more medial domains of the forebrain. Taken together, our data supports the contention that in utero technology can be exploited to rapidly examine the architecture and evolution of pallial-specific cis-regulatory elements.

Validating in utero electroporation for the rapid analysis of gene regulatory elements in the murine telencephalon.

Avec l&#x26;#39;objectif ultime de comprendre comment les modules g&#xE9;n&#xE9;tiques ont &#xE9;volu&#xE9; dans le t&#xE9;lenc&#xE9;phale, nous avons d&#xE9;cid&#xE9; de moderniser l&#x26;#39;analyse fonctionnelle des inter-esp&#xE8;ces &#xE9;l&#xE9;ments cis-r&#xE9;gulateurs chez la souris. En &#xE9;lectroporation in utero est rapidement remplacer la transg&#xE9;n&#xE8;se comme la m&#xE9;thode de choix pour gain et la perte de fonction des &#xE9;tudes dans le t&#xE9;lenc&#xE9;phale murin, mais l&#x26;#39;application de cette technique &#xE0; l&#x26;#39;analyse de la r&#xE9;gulation transcriptionnelle n&#x26;#39;a pas encore &#xE9;t&#xE9; pleinement explor&#xE9;es et exploit&#xE9;es. Pour d&#xE9;finir empiriquement les stades de d&#xE9;veloppement n&#xE9;cessaires pour cibler des populations sp&#xE9;cifiques de neurones dans le t&#xE9;lenc&#xE9;phale dorsal, ou pallium, qui donne lieu &#xE0; du n&#xE9;ocortex chez la souris, nous avons effectu&#xE9; une analyse temporelle et spatiale des propri&#xE9;t&#xE9;s migratoires des cellules &#xE9;lectropor&#xE9;es contre naissance &#xE0; jour. Ensuite, nous avons compar&#xE9; les activit&#xE9;s de deux connus Ngn2 exhausteurs via la transg&#xE9;n&#xE8;se et &#xE9;lectroporation in utero, ce qui d&#xE9;montre que cette derni&#xE8;re technique plus fid&#xE8;lement rapporte le mod&#xE8;le d&#x26;#39;expression endog&#xE8;ne t&#xE9;lenc&#xE9;phalique observ&#xE9;e dans un Ngn2lacZ knock-in en ligne. Enfin, nous avons utilis&#xE9; cette approche pour tester les activit&#xE9;s t&#xE9;lenc&#xE9;phaliques d&#x26;#39;une s&#xE9;rie de suppression construit compos&#xE9; du poisson-z&#xE8;bre Er81 r&#xE9;gion r&#xE9;gulatrice en amont, ce qui nous permet d&#x26;#39;identifier un activateur non caract&#xE9;ris&#xE9;e qui affiche inter-esp&#xE8;ces des activit&#xE9;s dans le cortex piriforme murin et le n&#xE9;ocortex lat&#xE9;ral, encore pas dans des domaines plus m&#xE9;dial du cerveau ant&#xE9;rieur. Pris dans leur ensemble, nos donn&#xE9;es confirment la th&#xE8;se selon laquelle la technologie in utero peut &#xEA;tre exploit&#xE9;e pour examiner rapidement l&#x26;#39;architecture et l&#x26;#39;&#xE9;volution de pall&#xE9;ale sp&#xE9;cifiques &#xE9;l&#xE9;ments cis-r&#xE9;gulateurs.

Validation &#xE9;lectroporation in utero pour l&#x26;#39;analyse rapide des &#xE9;l&#xE9;ments de r&#xE9;gulation des g&#xE8;nes dans le t&#xE9;lenc&#xE9;phale Murine

Mit dem ultimativen Ziel verstehen, wie genetische Module haben in das Telencephalon, entwickelt vorhatten, um die funktionale Analyse der Kreuz-Arten-Cis-regulatorischen Elementen in Maus zu modernisieren. In der Geb&auml;rmutter Elektroporation ist, als die Methode der Wahl f&uuml;r Gewinn und Verlust-of Function-Studien in der murinen Telencephalon, aber die Anwendung dieser Technik zur Analyse der Transkriptionsregulation bisher noch nicht vollst&auml;ndig erforscht und ausgebeutet werden, rasch Transgenese verdr&auml;ngen. Um empirisch zu definieren die Entwicklungsstadien ben&ouml;tigt, um bestimmte Zielgruppen von Neuronen in der dorsalen Telencephalon oder Pallium, der Neocortex in Maus l&auml;sst, f&uuml;hrten wir eine zeitliche und r&auml;umliche Analyse der wandernden Eigenschaften des Electroporated im Vergleich zu Zellen Geburt datiert. Als n&auml;chstes verglichen wir die Aktivit&auml;ten von zwei bekannten Ngn2 Geschmacksverst&auml;rker via Transgenese und in der Geb&auml;rmutter Elektroporation, demonstrieren, dass letztere Methode mehr getreu dem endogenen Teleenzephalischer Ausdrucksmuster beobachtet in einem Ngn2lacZ-Knock-in-Line meldet. Schlie&szlig;lich haben wir diesen Ansatz verwendet, testen die Teleenzephalischer Aktivit&auml;ten einer Reihe von L&ouml;schung Konstrukte bestehend aus der Zebrafisch ER81 regulatorischen Region stromaufw&auml;rts, erm&ouml;glicht es uns, ein zuvor uncharakterisiertes Vergr&ouml;&szlig;erer zu identifizieren, die Kreuz-Arten-Aktivit&auml;t im murinen Piriform Rinde und seitlichen Neokortex und doch nicht in weiteren medialen Dom&auml;nen des Stirnhirns zeigt. Zusammengenommen unterst&uuml;tzt unsere Daten die Behauptung, dass in der Geb&auml;rmutter Technologie ausgenutzt werden kann, um die Architektur und Entwicklung von Pallialdr&uuml;sensekret-spezifische Cis-regulatorischen Elementen schnell zu untersuchen.

&Uuml;berpr&uuml;fen in der Geb&auml;rmutter Electroporation f&uuml;r die schnelle Analyse von Gen-regulatorischen Elementen in der murinen Telencephalon.

Con l&#39;obiettivo finale di comprensione come genetici moduli evoluti nel telencefalo, partiamo per modernizzare l&#39;analisi funzionale di elementi cis-regolatori cross-specie in mouse. Elettroporazione in utero &egrave; rapidamente sostituendo transgenesi come il metodo di scelta per gli studi di guadagno - e perdita di funzione nel telencefalo murino, ma l&#39;applicazione di questa tecnica per l&#39;analisi del regolamento transcriptional deve essere ancora pienamente esplorata e sfruttati. Per definire empiricamente le fasi di sviluppo necessarie per specifiche popolazioni bersaglio dei neuroni nel telencefalo dorsale o pallio, che d&agrave; origine alla neocorteccia in mouse, abbiamo eseguito un&#39;analisi spaziale e temporale delle propriet&agrave; migratorie di electroporated contro cellule data di nascita. Successivamente, abbiamo confrontato l&#39;attivit&agrave; di due noti Ngn2 rinforzatori tramite transgenesi ed elettroporazione in utero, dimostrando che la tecnica di quest&#39;ultima riporta pi&ugrave; fedelmente il modello di espressione telencefalici endogena osservato in un Ngn2lacZ knock-in linea. Infine, abbiamo usato questo approccio per testare l&#39;attivit&agrave; telencefalici di una serie di costrutti eliminazione composto della regione normativo a monte del Danio ER81, che ci permette di identificare un rinforzatore precedentemente atipiche che visualizza le attivit&agrave; cross-specie nella corteccia del piriform murino e neocorteccia laterale, ancora non in pi&ugrave; domini mediale del proencefalo. Presi insieme, i nostri dati supporta la tesi che la tecnologia in utero pu&ograve; essere sfruttata per esaminare rapidamente l&#39;architettura e l&#39;evoluzione di palleale specifici elementi cis-regolatori.

Convalida in utero elettroporazione per l&#39;analisi rapida di elementi regolatori del gene nel telencefalo murino.

&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x7D42;&#x8133;&#x306B;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x7A76;&#x6975;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x7A2E;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x8FD1;&#x4EE3;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x5B50;&#x5BAE;&#x5185;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D42;&#x8133;&#x306E;&#x5229;&#x5F97;&#x3068;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D4C;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;&#x80CC;&#x5074;&#x7D42;&#x8133;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30D1;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5BFE;&#x51FA;&#x751F;&#x65E5;&#x4ED8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x306B;Ngn2lacZ&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x7D42;&#x8133;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3068;&#x5B50;&#x5BAE;&#x5185;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;Ngn2&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x7D42;&#x8133;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x68A8;&#x72B6;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3068;&#x5916;&#x5074;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x7A2E;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;ER81&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x9818;&#x57DF;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x8133;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x5B50;&#x5BAE;&#x5185;&#x3067;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x6280;&#x8853;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;&#x5916;&#x5957;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D42;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8FC5;&#x901F;&#x306B;&#x89E3;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B50;&#x5BAE;&#x5185;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x691C;&#x8A3C;

&#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBAA8;&#xB4C8; &#xC774;&#xD574;&#xC758; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC640; &#xC9C4;&#xD654; telencephalon, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xC815; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC04; &#xC885; cis &#xADDC;&#xC815; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD604;&#xB300;&#xD654; &#xD558;. Utero electroporation murine telencephalon &#xC774;&#xB4DD; &#xBC0F; &#xC190;&#xC2E4;-&#xC758;-&#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB9CC;&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; transcriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xD558; &#xACE0; &#xCC29;&#xCDE8;&#xB85C; transgenesis &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB300;&#xCCB4;. &#xACBD;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xD2B9;&#xC815; &#xC778;&#xAD6C; &#xB4F1; telencephalon, &#xB610;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD14D;&#xC744; &#xC0DD;&#xACA8;&#xB098;&#xAC8C;, &#xD314;&#xB9AC;&#xC6C0;&#xC5D0;&#xB294; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xCD9C;&#xC0DD; &#xC77C;&#xC790; &#xC140; &#xB300; electroporated&#xC758; &#xCCA0;&#xC0C8; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xBC0F; &#xACF5;&#xAC04; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218;&#xD589;. &#xB2E4;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; Ngn2 &#xAC15;&#xD654; &#xC911; transgenesis&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; utero electroporation &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xB354; &#xCDA9;&#xC2E4; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0DD; telencephalic &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xB77C;&#xC778; &#xB178;&#xD06C;&#xC5D0; ngn2lacz&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;,&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC0AD;&#xC81C; &#xAD6C;&#xBB38; zebrafish ER81 &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; telencephalic &#xD65C;&#xB3D9; murine piriform &#xD53C; &#xC9C8;&#xACFC; &#xCE21;&#xBA74; &#xD14D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xC9C1; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC911;&#xAC04; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04; &#xC885; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACBD;&#xD569; utero&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC220; &#xAC74;&#xCD95;&#xACFC; pallial &#xAD00;&#xB828; ci &#xADDC;&#xC815; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Utero electroporation &#xBE60;&#xB978; &#xBD84;&#xC11D; murine telencephalon &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xADDC;&#xC815; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Con el objetivo final de comprender c&#xF3;mo los m&#xF3;dulos gen&#xE9;ticos han evolucionado en el telenc&#xE9;falo, que se propuso modernizar el an&#xE1;lisis funcional de cis-regulador entre especies en los elementos del rat&#xF3;n. En la electroporaci&#xF3;n in utero est&#xE1; reemplazando r&#xE1;pidamente a la transg&#xE9;nesis, como el m&#xE9;todo de elecci&#xF3;n para los estudios de la ganancia y la p&#xE9;rdida de funci&#xF3;n en el telenc&#xE9;falo murino, pero la aplicaci&#xF3;n de esta t&#xE9;cnica para el an&#xE1;lisis de la regulaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n a&#xFA;n no ha sido plenamente explorado y explotado. Para definir emp&#xED;ricamente las etapas de desarrollo necesaria para identificar poblaciones espec&#xED;ficas de neuronas en el telenc&#xE9;falo dorsal, o palio, que da lugar a la corteza cerebral en el rat&#xF3;n, se realiz&#xF3; un an&#xE1;lisis temporal y espacial de las propiedades de las c&#xE9;lulas migratorias electroporated versus parto con fecha. A continuaci&#xF3;n, se compar&#xF3; la actividad de dos conocidos a trav&#xE9;s de la transg&#xE9;nesis Ngn2 potenciadores y en el &#xFA;tero de la electroporaci&#xF3;n, lo que demuestra que esta &#xFA;ltima t&#xE9;cnica m&#xE1;s fielmente informa del patr&#xF3;n de la expresi&#xF3;n end&#xF3;gena telencef&#xE1;lica observado en un Ngn2lacZ knock-en la l&#xED;nea. Por &#xFA;ltimo, hemos utilizado este m&#xE9;todo para probar las actividades telencef&#xE1;licas de una serie de eliminaci&#xF3;n construye compuesto por el pez cebra ER81 regi&#xF3;n reguladora aguas arriba, lo que nos permite identificar a una previamente no potenciador que muestra la actividad de las especies cruzadas en el murino corteza piriforme y la neocorteza lateral, sin embargo, no en dominios m&#xE1;s medial del cerebro anterior. En conjunto, nuestros datos apoyan la tesis de que en la tecnolog&#xED;a de &#xFA;tero puede ser explotado para examinar r&#xE1;pidamente la arquitectura y la evoluci&#xF3;n de paleal espec&#xED;ficas cis-elementos reguladores.

La validaci&#xF3;n en el &#xFA;tero de electroporaci&#xF3;n para el an&#xE1;lisis r&#xE1;pido de los elementos reguladores de genes en el telenc&#xE9;falo murino

&#x51E0;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x662F;&#x76AE;&#x8D28;&#x6295;&#x5C04;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8EAB;&#x4EFD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x884C;&#x52A8; &#xFF08;&#x6709;&#x6559;&#x80B2;&#x610F;&#x4E49;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x7EB5;&#x5BB9;) &#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x548C;&#x4E0B;&#x6E38;&#x9057;&#x4F20;&#x6805;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x660E;&#x786E;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; proneural &#x57FA;&#x672C;&#x87BA;&#x65CB;-&#x73AF;-&#x87BA;&#x65CB; (bHLH) &#x57FA;&#x56E0; Ngn2 &#x6307;&#x793A;&#x90E8;&#x5206;&#x76AE;&#x5C42;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x65F6;&#x5728;&#x8179;&#x4FA7; telencephalic &#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5F02;&#x4F4D;&#x6807;&#x8BB0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x65E9;&#x671F; (24 h &#xFF1B; misexpressedNscl2)&#xFF0C;&#x4E2D;&#x7EA7; (48 h &#xFF1B;BhlhB5&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C;&#x665A; (72 h &#xFF1B;NeuroD&#x3001; NeuroD2&#x3001; Math2 &#x548C; Tbr1) &#x7684;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x76AE;&#x8D28;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x66F4;&#x5FEB;&#x5730;&#x8BF1;&#x5BFC; Ngn2 &#x80CC;&#x7AEF;&#x8111; (12 &#x81F3; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#xFF09; &#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A; bHLH &#x57FA;&#x56E0; Math3 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x80CC;&#x4FA7;&#x79FB;&#x4F4D;&#x9650;&#x5236;&#x7684; Ngn2 &#x8F6C;&#x5F55;&#x76EE;&#x6807;&#x548C;&#x8F85;&#x9176;&#x7684;&#x6DE1;&#x5316;&#x4E0E; Ngn2 &#x52A0;&#x901F;&#x76AE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x4F53;&#x5185;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Ngn2 &#x5728;&#x8179;&#x4FA7;&#x80CC; telencephalic &#x57DF;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D; Math3&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x751F;&#x6210;&#x53EA;&#x6709;&#x5927;&#x7EA6; 60%&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x63D0;&#x4F9B;&#x673A;&#x68B0;&#x57FA;&#x7840;&#x7684; Ngn2 &#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x76AE;&#x8D28; bHLH &#x57FA;&#x56E0;&#x4ECE;&#x800C;&#x914D;&#x5408;&#x63A7;&#x5236;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x5B9E;&#x529B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6682;&#x65F6;&#x534F;&#x8C03;&#x4E0B;&#x6E38;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x57FA;&#x672C;&#x87BA;&#x65CB;-&#x73AF;-&#x87BA;&#x65CB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8FDB;&#x884C;&#x5408;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6307;&#x5B9A;&#x76AE;&#x8D28;&#x6295;&#x5C04;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Several transcription factors are essential determinants of a cortical projection neuron identity, but their mode of action (instructive versus permissive) and downstream genetic cascades remain poorly defined. Here, we demonstrate that the proneural basic helix-loop-helix (bHLH) gene Ngn2 instructs a partial cortical identity when misexpressed in ventral telencephalic progenitors, inducing ectopic marker expression in a defined temporal sequence, including early (24 h; Nscl2), intermediate (48 h; BhlhB5), and late (72 h; NeuroD, NeuroD2, Math2, and Tbr1) target genes. Strikingly, cortical gene expression was much more rapidly induced by Ngn2 in the dorsal telencephalon (within 12 to 24 h). We identify the bHLH gene Math3 as a dorsally restricted Ngn2 transcriptional target and cofactor, which synergizes with Ngn2 to accelerate target gene transcription in the cortex. Using a novel in vivo luciferase assay, we show that Ngn2 generates only approximately 60% of the transcriptional drive in ventral versus dorsal telencephalic domains, an activity that is augmented by Math3, providing a mechanistic basis for regional differences in Ngn2 function. Cortical bHLH genes thus cooperate to control transcriptional strength, thereby temporally coordinating downstream gene expression.

Basic helix-loop-helix transcription factors cooperate to specify a cortical projection neuron identity.

Plusieurs facteurs de transcription sont des d&#xE9;terminants essentiels de l&#x26;#39;identit&#xE9; des neurones de projection corticale, mais leur mode d&#x26;#39;action (par rapport instructif permissive) et en aval des cascades g&#xE9;n&#xE9;tiques restent encore mal d&#xE9;finies. Ici, nous d&#xE9;montrons que la proneural base h&#xE9;lice-boucle-h&#xE9;lice (bHLH) g&#xE8;ne Ngn2 indique une identit&#xE9; partielle corticale lorsque mal exprim&#xE9;s dans les prog&#xE9;niteurs ventrales t&#xE9;lenc&#xE9;phaliques, induisant l&#x26;#39;expression du marqueur extra-ut&#xE9;rine dans une s&#xE9;quence temporelle d&#xE9;finie, y compris au d&#xE9;but (24 h; Nscl2), interm&#xE9;diaire (48 h; BhlhB5), et &#xE0; la fin (72 h; NeuroD, NeuroD2, Math2, et TBR1) g&#xE8;nes cibles. &#xC9;tonnamment, l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes corticale a &#xE9;t&#xE9; beaucoup plus rapidement induite par Ngn2 dans le t&#xE9;lenc&#xE9;phale dorsal (dans les 12 &#xE0; 24 h). Nous identifions le math3 g&#xE8;ne bHLH comme une dorsale limit&#xE9;e Ngn2 cible transcriptionnelle et un cofacteur, qui agit en synergie avec Ngn2 pour acc&#xE9;l&#xE9;rer la transcription du g&#xE8;ne cible dans le cortex. Utilisation d&#x26;#39;un roman en dosage de la lucif&#xE9;rase in vivo, nous montrons que Ngn2 g&#xE9;n&#xE8;re environ 60% seulement de l&#x26;#39;entra&#xEE;nement de la transcription dans les ventrales par rapport dorsale domaines t&#xE9;lenc&#xE9;phaliques, une activit&#xE9; qui est augment&#xE9;e par math3, fournissant une base m&#xE9;caniste des diff&#xE9;rences r&#xE9;gionales dans Ngn2 fonction. G&#xE8;nes bHLH corticales ainsi coop&#xE9;rer pour contr&#xF4;ler la force de transcription, ainsi temporellement la coordination d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique en aval.

Transcription de base h&#xE9;lice-boucle-h&#xE9;lice Coop&#xE9;rer pour sp&#xE9;cifier une identit&#xE9; de projection corticale Neuron

Mehrere Transkriptionsfaktoren sind wesentliche Determinanten einer kortikalen Projektion Neuron Identit&auml;t, sondern ihre Wirkungsweise (lehrreich gegen&uuml;ber permissive) und nachgeschaltete genetische Kaskaden bleiben schlecht definierter. Hier zeigen wir, dass das Proneural grundlegende Helix-Schleife-Helix (bHLH) Gen Ngn2 eine partielle kortikale Identit&auml;t beim misexpressed im ventralen Teleenzephalischer Vorfahre weist, induzierende ektopische Markierung Ausdruck in einem definierten zeitlichen Abfolge, einschlie&szlig;lich der fr&uuml;hen (24 h; Nscl2), Mittelstufe (48 h; BhlhB5), und sp&auml;ten (72 h; Zielgene NeuroD, NeuroD2, Math2 und Tbr1). Auff&auml;llig ist, wurde eine kortikale Genexpression in der dorsalen Telencephalon (max. 12 bis 24 h) viel schneller von Ngn2 ausgel&ouml;st. Wir identifizieren das bHLH gen Math3 als eine dorsal eingeschr&auml;nkten Ngn2 transkriptionelle Ziel- und Cofaktor, dem punktet mit Ngn2 Ziel-gen-Transkription im Kortex zu beschleunigen. Verwenden eine neuartige in-vivo Luciferase-Assays, zeigen wir, dass Ngn2 nur etwa 60 % der transkriptionelle generiert im Ventral gegen&uuml;ber dorsalen Teleenzephalischer Dom&auml;nen, eine T&auml;tigkeit, die durch Math3, erg&auml;nzt wird die eine mechanistische Grundlage f&uuml;r regionale Unterschiede in der Ngn2-Funktion. Kortikale bHLH Gene kooperieren daher zur Kontrolle transkriptionelle St&auml;rke, nachgeschaltete Genexpression und damit zeitlich zu koordinieren.

Grundlegende Helix-Schleife-Helix-Transkriptionsfaktoren zusammenarbeiten, um eine kortikalen Projektion Neuronen Identit&auml;t angeben.

Diversi fattori di trascrizione sono essenziali fattori determinanti di un&#39;identit&agrave; di neurone di proiezione corticale, ma loro modalit&agrave; d&#39;azione (istruttivo versus permissiva) e cascate di genetiche a valle rimangono mal definite. Qui, abbiamo dimostrato che il gene basic helix-loop-helix (bHLH) proneural Ngn2 incarica una parziale identit&agrave; corticale quando misexpressed in progenitori telencefalici ventrale, inducendo espressione ectopica marcatore in una sequenza temporale definita, tra cui primi (24 h; Nscl2), intermedio (48 h; BhlhB5) e fine (72 h; Geni bersaglio NeuroD, NeuroD2, Math2 e Tbr1). Sorprendentemente, espressione genica corticale era molto pi&ugrave; rapidamente indotta da Ngn2 nella dorsale del telencefalo (entro 12-24 h). Identifichiamo il gene bHLH Math3 come un cofattore, che superando con Ngn2 per accelerare la trascrizione del gene bersaglio nella corteccia e dorsalmente limitato Ngn2 transcriptional destinazione. Utilizzando l&#39;analisi di un romanzo luciferase in vivo, mostriamo che Ngn2 genera solo circa il 60% dell&#39;unit&agrave; trascrizionale in ventrale versus domini telencefalici dorsale, un&#39;attivit&agrave; che &egrave; aumentata da Math3, fornendo una base meccanicistica per le differenze regionali nella funzione Ngn2. Corticale bHLH geni cos&igrave; collaborano al controllo trascrizionale forza, coordinando quindi temporaneamente espressione del gene a valle.

Fattori di trascrizione helix-loop-helix base collaborano per specificare un&#39;identit&agrave; del neurone di proiezione corticale.

&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x6295;&#x5C04;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x5E8F;&#xFF08;&#x6709;&#x76CA;&#x306A;&#x5BFE;&#x5BDB;&#x5BB9;&#xFF09;&#x3068;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; &#xFF08;24&#x6642;&#x9593;&#x3001;Nscl2&#xFF09;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8179;&#x5074;&#x7D42;&#x8133;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;misexpressed&#x6642;&#x30D7;&#x30ED;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; - &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;bHLH&#x578B;&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;Ngn2&#x65E9;&#x671F;&#x306B;&#x542B;&#x3081;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6642;&#x7CFB;&#x5217;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#xFF08;48&#x6642;&#x9593;&#x3001;BhlhB5&#xFF09;&#x3001;&#x5F8C;&#x671F;&#xFF08;72&#x6642;&#x9593;&#x3001;NeuroD&#x3001;NeuroD2&#x3001;MATH2&#x3001;&#x3068;TBR1&#xFF09;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x80CC;&#x7D42;&#x8133;&#xFF08;12&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#xFF09;&#x306B;Ngn2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;Ngn2&#x3068;&#x76F8;&#x4E57;&#x4F5C;&#x7528;&#x80CC;&#x5236;&#x9650;Ngn2&#x8EE2;&#x5199;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;bHLH&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;Math3&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Ngn2&#x306F;Ngn2&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x5DEE;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x8179;&#x5074;&#x80CC;&#x5074;&#x7D42;&#x8133;&#x5BFE;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;Math3&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x7D04;60&#xFF05;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x76AE;&#x8CEA;bHLH&#x578B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5354;&#x529B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; - &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x6295;&#x5C04;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;ID&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5354;&#x529B;

&#xC5EC;&#xB7EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9; (&#xB300; &#xAD00;&#xB300; &#xD55C; &#xAD50;&#xC721;&#xC801;) &#xBAA8;&#xB4DC; &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xC158; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC720;&#xC804; &#xACC4;&#xACE1; &#xB0A8;&#xC544; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; proneural &#xAE30;&#xBCF8; &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4;-&#xB8E8;&#xD504;-&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; (bHLH) &#xC720;&#xC804;&#xC790; Ngn2 &#xC9C0;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; (24 h;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xC21C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC18C;&#xC131; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC2DD; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF5; &#xBD80; telencephalic progenitors misexpressed &#xB54C; &#xBD80;&#xBD84; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; id&#xB97C; &#xC785;&#xC99D; Nscl2), &#xC911;&#xAE09; (48 h; BhlhB5), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2A6;&#xC740; (72 h; NeuroD, NeuroD2, Math2, &#xBC0F; Tbr1) &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xB4F1; telencephalon (12 ~ 24 &#xC2DC;&#xAC04;) &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; ngn2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; bHLH &#xC720;&#xC804;&#xC790; Math3 dorsally &#xC81C;&#xD55C; Ngn2 transcriptional &#xB300;&#xC0C1;&#xACFC; &#xB300;&#xC0C1; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D; &#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; ngn2&#xC640; synergizes cofactor&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; Ngn2 &#xBCF5; &#xC9C0; telencephalic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB300; Math3&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC15; &#xD65C;&#xB3D9; transcriptional &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xC758; 60%&#xB9CC; &#xC57D; &#xC0DD;&#xC131; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; Ngn2 &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC801; &#xCC28;&#xC774; &#xB300; &#xD55C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; bHLH &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC870;&#xC815; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC81C;&#xC5B4; transcriptional &#xAC15;&#xB3C4;&#xB97C; &#xD611;&#xC870;.

&#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xC120; &#xB8E8;&#xD504; &#xB098;&#xC120; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xD611;&#xC870; &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xC158; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0; id&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Varios factores de transcripci&#xF3;n son determinantes esenciales de la identidad de proyecci&#xF3;n neurona cortical, pero su modo de acci&#xF3;n (instructiva contra permisiva) y aguas abajo en cascada gen&#xE9;tica permanecen pobremente definidos. Aqu&#xED;, nos demuestran que la proneural b&#xE1;sica h&#xE9;lice-loop-h&#xE9;lice (bHLH) gen Ngn2 instruye una identidad cortical parcial cuando misexpressed en ventrales progenitores telencef&#xE1;licas, induciendo la expresi&#xF3;n de marcadores ect&#xF3;pico en una secuencia temporal definida, incluyendo principios (24 h; Nscl2), intermedio (48 h; BhlhB5) y tarde (72 h; NeuroD, NeuroD2, Math2 y Tbr1) los genes diana. Sorprendentemente, la expresi&#xF3;n de genes cortical fue mucho m&#xE1;s r&#xE1;pido inducido por Ngn2 en el telenc&#xE9;falo dorsal (a menos de 12 a 24 h). Se identifica el gen Math3 bHLH como dorsal restringida Ngn2 objetivo de la transcripci&#xF3;n y cofactores, que sinergiza con Ngn2 para acelerar la transcripci&#xF3;n del gen diana en la corteza. El uso de un novedoso ensayo de luciferasa in vivo, se muestra que Ngn2 genera s&#xF3;lo aproximadamente el 60% de la unidad de transcripci&#xF3;n en los dominios telencef&#xE1;licas ventral en comparaci&#xF3;n con dorsal, una actividad que se ve aumentada por Math3, proporcionando una base mec&#xE1;nica de las diferencias regionales en Ngn2 funci&#xF3;n. Los genes corticales bHLH as&#xED; cooperar para controlar la fuerza de la transcripci&#xF3;n, as&#xED; temporalmente la coordinaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica de aguas abajo.

Lisa Marie Langevin

Department of Biochemistry and Molecular Biology,
Hotchkiss Brain Institute,
Alberta Children’s Hospital Research Institute,
Department of Biochemistry and Molecular Biology, Hotchkiss Brain Institute, Alberta Children’s Hospital Research Institute

University of Calgary

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation