<em>Ex vivo</em> Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Université Paris Descartes, CNRS (UMR 8104)

U1016, Paris, France

&#x5728;&#x5165;&#x4FB5;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;apicomplexan &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5F62;&#x6210;&#x4EB2;&#x5BC6;&#x7684;&#x5706;&#x5468;&#x63A5;&#x89E6;&#x4E0E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7D27;&#x5BC6;&#x8FDE;&#x63A5; (TJ)&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x6ED1;&#x7FD4;&#x3002;&#x4E0A;&#x6D77;&#x540C;&#x6D4E;&#xFF0C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7535;&#x673A;&#xFF0C;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x9876;&#x7AEF;&#x819C;&#x6297;&#x539F; 1 (AMA1) &#x548C;&#x68D2;&#x72B6;&#x4F53;&#x9888;&#x90E8; (RON) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x4F2F;&#x6C0F;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; AMA1 &#x548C; RON4 &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x88C2;&#x6B96;&#x5B50;&#x5165;&#x4FB5;&#x53EA;&#x6709; RON4 &#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x5165;&#x4FB5;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; RON4 &#x884C;&#x4E3A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E; AMA1 &#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x5728;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x901F;&#x6B96;&#x5B50;&#xFF0C;AMA1 &#x662F;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x6B63;&#x5E38; RON4 &#x73AF;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x6027; TJ &#x5927;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x5BF9;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x5185;&#x5316;&#x9891;&#x7387;&#x901F;&#x6B96;&#x5B50;&#x5B54;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x867D;&#x7136; RON &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728; TJ &#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;AMA1 &#x4E3B;&#x8981;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;zoite &#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x5141;&#x8BB8;&#x6B63;&#x786E;&#x9644;&#x7740;&#x5230;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x53EF;&#x65B9;&#x4FBF;&#x6839;&#x636E; zoite &#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;

&#x671F;&#x95F4;&#x7531; apicomplexa &#x4FB5;&#x5165;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9876;&#x7AEF;&#x819C;&#x6297;&#x539F; 1 &#x548C;&#x68D2;&#x72B6;&#x4F53;&#x9888;&#x90E8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

During invasion, apicomplexan parasites form an intimate circumferential contact with the host cell, the tight junction (TJ), through which they actively glide. The TJ, which links the parasite motor to the host cell cytoskeleton, is thought to be composed of interacting apical membrane antigen 1 (AMA1) and rhoptry neck (RON) proteins. Here we find that, in Plasmodium berghei, while both AMA1 and RON4 are important for merozoite invasion of erythrocytes, only RON4 is required for sporozoite invasion of hepatocytes, indicating that RON4 acts independently of AMA1 in the sporozoite. Further, in the Toxoplasma gondii tachyzoite, AMA1 is dispensable for normal RON4 ring and functional TJ assembly but enhances tachyzoite apposition to the cell and internalization frequency. We propose that while the RON proteins act at the TJ, AMA1 mainly functions on the zoite surface to permit correct attachment to the cell, which may facilitate invasion depending on the zoite-cell combination.

Independent roles of apical membrane antigen 1 and rhoptry neck proteins during host cell invasion by apicomplexa.

Au cours de l&#39;invasion, APICOMPLEXES parasites forment un contact intime circonf&eacute;rentiel avec la cellule h&ocirc;te, la jonction serr&eacute;e (TJ), &agrave; travers lequel ils glissent activement. Le TJ, qui relie le moteur parasite le cytosquelette de cellule h&ocirc;te, est consid&eacute;r&eacute; comme compos&eacute; d&#39;interaction antig&egrave;ne de la membrane apicale 1 (AMA1) et rhoptry cou prot&eacute;ines (RON). Ici nous constatons que, dans le Plasmodium berghei, tandis que AMA1 tant RON4 sont importants pour l&#39;invasion du m&eacute;rozo&iuml;te des &eacute;rythrocytes, seulement RON4 est n&eacute;cessaire pour l&#39;invasion de sporozo&iuml;tes des h&eacute;patocytes, indiquant que RON4 agit ind&eacute;pendamment AMA1 dans le sporozo&iuml;te. En outre, dans le Toxoplasma gondii tachyzo&iuml;te, AMA1 est dispensable pour sonnerie RON4 normale et fonctionnelle Assembl&eacute;e TJ mais am&eacute;liore tachyzo&iuml;te apposition &agrave; la fr&eacute;quence de la cellule et l&#39;internalisation. Nous proposons que tandis que les prot&eacute;ines de RON agissent les TJ, AMA1 fonctionnent principalement sur la surface zoite de permettre un raccordement correct &agrave; la cellule, ce qui peut faciliter l&#39;invasion selon la combinaison de cellules zoite.

R&ocirc;les ind&eacute;pendants de membrane apicale antig&egrave;ne 1 et rhoptry cou prot&eacute;ines au cours de l&#39;invasion des cellules h&ocirc;te par apicomplexa.

W&auml;hrend der Invasion bilden Apicomplexan Parasiten einen intimen umlaufenden Kontakt mit der Wirtszelle, die tight Junction (TJ), durch die sie aktiv gleiten. Die TJ, das den Parasit-Motor an das Host-Zelle-Zytoskelett bindet, wird angenommen, dass die interagierenden apikale Membran-Antigen bestehen 1 (AMA1) und Rhoptry Hals (RON) Proteine. Hier finden wir, in Plasmodium Berghei, AMA1 und RON4 sind zwar wichtig f&uuml;r Merozoite Invasion der Erythrozyten, nur RON4 erforderlich f&uuml;r Sporozoite Invasion von Hepatozyten ist, darauf hinweist, dass RON4 unabh&auml;ngig von AMA1 in die Sporozoite handelt. Weiter, in der Toxoplasma Gondii Tachyzoite AMA1 entbehrlich f&uuml;r normale RON4 Ring und funktionale TJ-Montage ist aber erh&ouml;ht Tachyzoite Anbringung auf die Zelle und Internalisierung Frequenz. Wir schlagen vor, dass w&auml;hrend der RON-Proteine auf die TJ handeln, AMA1 Funktionen haupts&auml;chlich oberfl&auml;chlich Zoite korrekte Befestigung an der Zelle erm&ouml;glichen die Invasion abh&auml;ngig von der Zoite-Zelle-Kombination erleichtern k&ouml;nnen.

Unabh&auml;ngige Rollen apikale Membran Antigen 1 und Rhoptry Hals Proteine w&auml;hrend Host Zelle Invasion durch Sporentierchen.

Durante l&#39;invasione, parassiti Apicomplexa formano un intimo contatto circonferenza con la cellula ospite, la stretta giunzione (TJ), attraverso cui attivamente glide. TJ, che collega il motore parassita del citoscheletro della cellula ospite, &egrave; pensato per essere composto di interazione antigene di membrana apicale 1 (AMA1) e rhoptry al collo le proteine (RON). Qui troviamo che, nel Plasmodium berghei, mentre sia AMA1 e RON4 sono importanti per invasione merozoite degli eritrociti, solo RON4 &egrave; obbligatorio per invasione di sporozoite di epatociti, che indica che RON4 agisce indipendentemente da AMA1 alla sporozoite. Ulteriormente, nel Toxoplasma gondii tachyzoite, AMA1 &egrave; superfluo per anello RON4 normale e funzionale TJ Assemblea ma migliora tachyzoite apposizione sulla frequenza delle cellule e interiorizzazione. Proponiamo che mentre le proteine RON agiscono presso il TJ, AMA1 principalmente funzioni sulla superficie zoite per consentire il corretto attaccamento alla cellula, che possa facilitare l&#39;invasione a seconda della combinazione zoite-cell.

Ruoli indipendenti della membrana apicale dell&#39;antigene 1 rhoptry collo proteine e durante l&#39;invasione delle cellule ospite da apicomplexa.

&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x9593;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x6ED1;&#x7A7A;&#x3092;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x5186;&#x5468;&#x5BC6;&#x7740;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; (TJ) &#x3092; apicomplexan &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3001;TJ &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30A2;&#x30D4;&#x30AB;&#x30EB;&#x819C;&#x6297;&#x539F;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 1 (AMA1) &#x3068; rhoptry &#x9996; (RON) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; AMA1 &#x3068; RON4 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x30E1;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x4FB5;&#x7565;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30E4;&#x3067; RON4 &#x306E;&#x307F; RON4 AMA1 &#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;, &#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x4FB5;&#x653B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305F;&#x304D;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x305E;&#x3044;&#x30C8; AMA1 &#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E; RON4 &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684; TJ &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x305F;&#x304D;&#x305E;&#x3044;&#x30C8;&#x540C;&#x683C;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x5185;&#x9762;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; TJ &#x3067;&#x884C;&#x52D5;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;AMA1 &#x4E3B;&#x306B;&#x4FB5;&#x7565; zoite &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B; zoite &#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x819C;&#x6297;&#x539F; 1 &#x3068; rhoptry &#x30CD;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x4FB5;&#x5165;&#x30A2;&#x30D4;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x9580;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x3002;

&#xCE68;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; apicomplexan &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C; &#xC8FC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140;, &#xAE34;&#xBC00; &#xC811;&#xD569; (TJ)&#xC640; &#xCE5C;&#xBC00; &#xD55C; &#xC6D0;&#xC8FC; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. TJ &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; cytoskeleton&#xC5D0; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xB9C9; &#xD56D; &#xC6D0; &#xAD6C;&#xC131; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4; 1 (AMA1) &#xBC0F; rhoptry (&#xB860;) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBAA9;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;, Plasmodium berghei&#xC5D0;&#xC11C; ama1&#xC640; ron4&#xB294; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;, merozoite &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xB9CC; RON4&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC3E;&#xC744; hepatocytes, sporozoite &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; ron4&#xC5D0; sporozoite&#xC5D0; AMA1 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xB610;&#xD55C;, Toxoplasma gondii tachyzoite ama1&#xC740; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; RON4 &#xBC18;&#xC9C0;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; TJ &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; tachyzoite apposition &#xC140; &#xBC0F; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB860; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; TJ&#xC5D0;&#xC11C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; AMA1 &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xB2A5; zoite &#xC140; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xCE68;&#xC785;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC140;&#xC5D0; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; zoite &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD600;&#xB05D; &#xB9C9; &#xD56D; &#xC6D0; 1&#xACFC; rhoptry &#xBAA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; apicomplexa&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xCE68;&#xACF5; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;.

Durante la invasi&oacute;n, apicomplejo par&aacute;sitos forman un &iacute;ntimo contacto circunferencial con la c&eacute;lula hu&eacute;sped, la ensambladura apretada (TJ), a trav&eacute;s de la cual se deslizan activamente. El TJ, que une el motor del par&aacute;sito con el citoesqueleto de la c&eacute;lula anfitriona, se cree que es compuesta por interacci&oacute;n ant&iacute;geno de membrana apical 1 (AMA1) y rhoptry cuello prote&iacute;nas (RON). Aqu&iacute; encontramos que, en Plasmodium berghei, mientras tanto AMA1 como RON4 son importantes para la invasi&oacute;n de merozoito de eritrocitos, s&oacute;lo RON4 se requiere para invasi&oacute;n de esporozoito de hepatocitos, indicando que el RON4 act&uacute;a independientemente de AMA1 en el esporozoito. Adem&aacute;s, en el tachyzoite de Toxoplasma gondii, AMA1 es prescindible para anillo de RON4 normal y funcional conjunto TJ pero mejora la aposici&oacute;n de tachyzoite a la frecuencia de la c&eacute;lula y la internalizaci&oacute;n. Proponemos que las prote&iacute;nas de RON act&uacute;an en el TJ, AMA1 principalmente funciona en la superficie zoite para permitir la correcta fijaci&oacute;n a la c&eacute;lula, que puede facilitar la invasi&oacute;n dependiendo de la combinaci&oacute;n de c&eacute;lulas zoite.

Funciones independientes de membrana apical ant&iacute;geno 1 rhoptry cuello prote&iacute;nas y durante la invasi&oacute;n de la c&eacute;lula hu&eacute;sped por apicomplexa.

Camille Lebugle

Institut Cochin

Université Paris Descartes, CNRS (UMR 8104)

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Camille Lebugle

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Institut Cochin

Université Paris Descartes, CNRS (UMR 8104)

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Institut Cochin