Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

University of Pennsylvania 

&#x4E00;&#x79CD;&#x5FEB;&#x901F;&#x7EAF;&#x5316;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x7684; 19 &#x548C; 20 &#x7684; nt oligoribonucleotides &#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E; RNA &#x53D1;&#x5939; SL3 &#x548C; SL2&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5728;&#x9632;&#x6269;&#x6563;&#x5B89;&#x5168;&#x5021;&#x8BAE;&#x8BC6;&#x522B;&#x5143;&#x7D20;&#x4E0A;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x79BB;&#x5B50;&#x914D;&#x5BF9;&#x53CD;&#x76F8;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5; (IP &#x5C5E;&#xFF09; &#x6765;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x5E72;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x8BC1;&#x636E; IP &#x5C5E;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0D;&#x540C;&#x4EBA;&#x4E91;&#x4EA6;&#x4E91;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5E72;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x548C;&#x9875;&#x3002;IP &#x5C5E;&#x7EAF;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x4F18;&#x4E8E;&#x9875;&#x9762;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5B89;&#x5168;&#xFF0C;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x3002;

&#x5FEB;&#x901F;&#x7EAF;&#x5316; RNA &#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

A new method for rapid purification and structural analysis of oligoribonucleotides of 19 and 20 nt is applied to RNA hairpins SL3 and SL2, which are stable secondary structures present on the psi recognition element of HIV-1. This approach uses ion-pairing reversed-phase liquid chromatography (IP-RPLC) to achieve the separation of the stem-loop from the transcription mix. Evidence is presented that IP-RPLC is sensitive to the different conformers of these secondary structures. The purity of each stem-loop was confirmed by mass spectrometry and PAGE. IP-RPLC purification was found to be superior to PAGE in terms of time, safety and, most importantly, purity.

Rapid purification of RNA secondary structures.

Une nouvelle m&eacute;thode pour la purification rapide et l&#39;analyse structurale des oligoribonucl&eacute;otides des 19 et 20 nt est appliqu&eacute;e &agrave; des &eacute;pingles &agrave; cheveux du RNA SL3 et SL2, qui sont des structures secondaires stables sur l&#39;&eacute;l&eacute;ment de reconnaissance lb/po2 du VIH-1. Cette approche utilise des paires d&#39;ions en phase inverse chromatographie liquide (IP-RPLC) pour obtenir la s&eacute;paration de la tige-boucle de la combinaison de la transcription. D&eacute;montrons que IP-RAC est sensible aux diff&eacute;rents conform&egrave;res de ces structures secondaires. La puret&eacute; de chaque tige-boucle a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e par spectrom&eacute;trie de masse et de la PAGE. Purification de IP-RAC s&#39;est av&eacute;r&eacute;e sup&eacute;rieure &agrave; la PAGE en termes de temps, s&eacute;curit&eacute; et, surtout, la puret&eacute;.

Purification rapide des structures secondaires d&#39;ARN.

Schnelle Aufreinigung von RNA Sekund&#xE4;rstrukturen.

Un nuovo metodo per rapida purificazione e analisi strutturale di oligoribonucleotides del 19 e 20 nt viene applicato a forcine RNA SL3 e SL2, che sono strutture secondarie stabili presenti nell&#39;elemento di riconoscimento del psi di HIV-1. Questo approccio USA accoppiamento ionico liquido cromatografia in controfase (IP-RPLC) per ottenere la separazione del gambo-ciclo dal mix di trascrizione. Prova &egrave; presentata che IP-RPLC &egrave; sensibile per i conformisti diversi di queste strutture secondarie. La purezza di ogni gambo-ciclo &egrave; stata confermata dalla pagina e spettrometria di massa. Purificazione RPLC IP &egrave; stato trovato per essere superiore a pagina in termini di tempo, sicurezza e, soprattutto, la purezza.

Rapida purificazione delle strutture secondarie del RNA.

&#x8FC5;&#x901F;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3068; 19 &#x3068; 20 nt &#x306E; oligoribonucleotides &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;RNA &#x306E;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3; SL3 &#x3068; SL2&#x3001;HIV-1 &#x306E; psi &#x8A8D;&#x8B58;&#x8981;&#x7D20;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x9006;&#x76F8;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; (IP &#x6E05;&#x6DBC;&#x98F2;&#x6599;&#x6C34;) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5E79;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;IP &#x6E05;&#x6DBC;&#x98F2;&#x6599;&#x6C34;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x5E79;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3068;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;IP &#x6E05;&#x6DBC;&#x98F2;&#x6599;&#x6C34;&#x6D44;&#x5316;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x512A;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x3068;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x7D14;&#x5EA6;&#x3002;

RNA &#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x6D44;&#x5316;&#x3002;

&#xBE60;&#xB978; &#xC815;&#xD654; &#xBC0F; 19 &#xBC0F; 20 nt oligoribonucleotides&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; RNA &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; SL3 &#xBC0F; SL2, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1&#xC758; psi &#xC778;&#xC2DD; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC18;&#xC804; &#xC0C1; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; &#xC774;&#xC628; &#xC30D; (IP RPLC) &#xC804;&#xC0AC; &#xBBF9;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC904;&#xAE30; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. IP RPLC&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; conformers&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xAC01; &#xC904;&#xAE30; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC21C;&#xB3C4; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. IP RPLC &#xC815;&#xD654; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xAC04; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xACE0;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC21C; &#xACB0;.

RNA &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC815;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un nuevo m&eacute;todo para la purificaci&oacute;n r&aacute;pida y an&aacute;lisis estructural de oligoribonucleotides de nt 19 y 20 se aplica a horquillas de RNA SL3 y SL2, que son estructuras secundarias estables presentes en el elemento de reconocimiento de la psi del VIH-1. Este enfoque utiliza el emparejamiento de ion cromatograf&iacute;a l&iacute;quida fase inversa (IP-TAGATOSA) para lograr la separaci&oacute;n de la madre-lazo de la mezcla de la transcripci&oacute;n. Evidencia se presenta que IP-TAGATOSA es sensible a las diferentes conformadores de estas estructuras secundarias. La pureza de cada lazo del v&aacute;stago fue confirmada por espectrometr&iacute;a de masas y de la p&aacute;gina. Purificaci&oacute;n de IP-TAGATOSA result&oacute; para ser superior a la p&aacute;gina en t&eacute;rminos de tiempo, seguridad y, lo m&aacute;s importante, la pureza.

Purificaci&oacute;n r&aacute;pida de las estructuras secundarias de RNA.

N 2-ethylGua&#x3001; O 6-ethylGua &#x548C; O 6-methylGua &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5728;&#x6A21;&#x677F;&#x4E2D;&#x5DF2;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BF9;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C; eta &#x805A;&#x5408;&#x7684; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x3002;N 2-ethylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5757;&#x805A;&#x5408;&#x5230;&#x66F4;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x6BD4; O (6)-&#x4E59;&#x57FA;-alpha &#x590D;&#x5236; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x6216; O 6-methylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x3002;DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; eta &#x9AD8;&#x6548;&#x548C;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x7ED5;&#x8FC7; N 2 ethylGua &#x75C5;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x50CF; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x540C;&#x6837;&#x53D7;&#x963B; (6)-&#x4E59;&#x57FA;-O &#x6216; O 6-methylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x63D2;&#x5165; N 2-ethylGua &#x548C; O 6-ethylGua &#x5BF9;&#x9762;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x7684; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C; eta &#x548C;&#x4ECE; 3&#39;-&#x603B;&#x7AD9;&#x63A8;&#x5E7F;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x76F8;&#x53CD;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x7684;&#x8FC7;&#x53BB;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75C5;&#x53D8; DNA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x5E02;&#x957F;&#x8FD0;&#x901A;&#x5BF9;&#x9762; N 2-ethylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x7531; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x662F;&#x5927;&#x7EA6; 10 4 &#x500D;&#x6BD4;&#x5E02;&#x957F;&#x8FD0;&#x901A;&#x5BF9;&#x9762; unadducted Gua &#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x63D2;&#x5165;&#x6548;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;&#x6269;&#x5C55;&#x4ECE; N (2)-&#x7531; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; ethylGua:Cyt 3&#39; &#x603B;&#x7AD9;-&#x662F;&#x5927;&#x7EA6; 3-&#x6298;&#x6BD4;&#x4ECE;&#x5BF9;&#x9762; unadducted Gua &#x5E02;&#x957F;&#x8FD0;&#x901A;&#x6269;&#x5C55;&#x540D;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;&#x5E02;&#x957F;&#x8FD0;&#x901A;&#x5BF9;&#x9762; N 2 ethylGua &#x75C5;&#x53D8; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; eta &#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x662F;&#x6BD4;&#x7531; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C;&#x4ECE; N (2) &#x5EF6;&#x957F;&#x7EA6; 370-fold &#x66F4;&#x6709;&#x6548;-&#x7531; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; eta ethylGua:Cyt 3&#39; &#x603B;&#x7AD9;-&#x662F;&#x6BD4;&#x7531; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x7EA6; 3-fold &#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; eta &#x6700;&#x597D;&#x63D2;&#x5165;&#x6B63;&#x786E;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E02;&#x957F;&#x8FD0;&#x901A;&#x5BF9;&#x9762;&#x8FD1;&#x540C;&#x6837;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x4E0E; N 2 ethylGua &#x75C5;&#x53D8;&#x5982;&#x5BF9;&#x9762; unadducted Gua&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5C3D;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x8BF1;&#x53D8;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684; misincorporation O 6-ethylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x7531; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C; eta &#x4F60;&#x5BF9;&#x9762;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x9C9C;&#x660E;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x3002;&#x5728;&#x542B;&#x6709; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C; eta &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5408;&#x6210;&#x8FC7;&#x53BB; N 2-ethylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5141;&#x8BB8;&#x70B9;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6A21;&#x677F;&#x7684;&#x5DF2;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; N 2-ethylGua &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x51C6;&#x786E;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x53BB;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x50AC;&#x5316; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; &alpha; &#x548C;&#x75C5;&#x53D8;&#x65C1;&#x8DEF;&#x50AC;&#x5316; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; eta &#x7684;&#x6682;&#x505C;&#x3002;

N2-ethylguanine &#x548C; O6-&#x4E59;&#x57FA;&#x548C; O6 methylguanine &#x75C5;&#x53D8;&#x4E2D; DNA&#xFF1A; &#x5BF9;&#x6BD4;&quot;&#x7ED5;&#x8FC7;&quot;DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; eta &#x548C;&#x590D;&#x5236; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; alpha &#x7684;&#x7B54;&#x590D;&#x3002;

The effects of N(2)-ethylGua, O(6)-ethylGua, and O(6)-methylGua adducts in template DNA on polymerization by mammalian DNA polymerases alpha and eta have been investigated. The N(2)-ethylGua adduct blocks polymerization by the replicative DNA polymerase alpha to a much greater extent than does the O(6)-ethyl- or the O(6)-methylGua adducts. The DNA polymerase eta efficiently and accurately bypasses the N(2)-ethylGua lesion but like DNA polymerase alpha is similarly blocked by the O(6)-ethyl- or the O(6)-methylGua adducts. A steady state kinetic analysis of nucleotide insertion opposite the N(2)-ethylGua and the O(6)-ethylGua adducts by the DNA polymerases alpha and eta and extension from 3'-termini positioned opposite these adducts was performed to measure the efficiency and the accuracy of DNA synthesis past these lesions. This analysis showed that insertion of Cyt opposite the N(2)-ethylGua adduct by DNA polymerase alpha is approximately 10(4)-fold less efficient than insertion of Cyt opposite an unadducted Gua residue at the same position. Extension from the N(2)-ethylGua:Cyt 3'-terminus by DNA polymerase alpha is approximately 10(3)-fold less efficient than extension from a Cyt opposite the unadducted Gua. Insertion of Cyt opposite the N(2)-ethylGua lesion by the DNA polymerase eta is about 370-fold more efficient than by the DNA polymerase alpha, and extension from the N(2)-ethylGua:Cyt 3'-terminus by the DNA polymerase eta is about 3-fold more efficient than by the DNA polymerase alpha. Furthermore, the DNA polymerase eta preferably inserts the correct nucleotide Cyt opposite the N(2)-ethylGua lesion with nearly the same level of accuracy as opposite an unadducted Gua, thus minimizing the mutagentic potential of this lesion. This result contrasts with the relatively high misincorporation efficiency of Thy opposite the O(6)-ethylGua adduct by the DNA polymerases alpha and eta. In reactions containing both DNA polymerases alpha and eta, synthesis past the N(2)-ethylGua adduct is detected to permit completed replication of the adducted oligonucleotide template. These results suggest that accurate replication past the N(2)-ethylGua adduct might be facilitated in cells by pausing of replication catalyzed by DNA polymerase alpha and lesion bypass catalyzed by DNA polymerase eta.

The N2-ethylguanine and the O6-ethyl- and O6-methylguanine lesions in DNA: contrasting responses from the "bypass" DNA polymerase eta and the replicative DNA polymerase alpha.

Les effets de N (2)-ethylGua, O (6) - ethylGua et O (6) - methylGua des adduits dans le mod&egrave;le de l&#39;ADN sur la polym&eacute;risation de l&#39;alpha de polym&eacute;rases d&#39;ADN chez les mammif&egrave;res et l&#39;eta ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s. Le N (2) - polym&eacute;risation de blocs d&#39;adduits ethylGua de l&#39;alpha r&eacute;plicative de l&#39;ADN polym&eacute;rase dans une mesure beaucoup plus grande que ne le fait la (6) - &eacute;thyl - O ou O (6) - adduits methylGua. L&#39;ADN polym&eacute;rase eta efficacement et pr&eacute;cis&eacute;ment contourne le N (2)-l&eacute;sion ethylGua mais comme l&#39;ADN polym&eacute;rase alpha est bloqu&eacute; de la m&ecirc;me fa&ccedil;on par le O (6) - &eacute;thyl - ou le O (6) - methylGua adduits. Une analyse cin&eacute;tique stationnaire d&#39;insertion de nucl&eacute;otides en face de la N (2) - ethylGua et le O (6) - ethylGua des adduits de l&#39;alpha de polym&eacute;rases d&#39;ADN et l&#39;eta et l&#39;extension de 3&#39;-termini positionn&eacute; en face de ces adduits a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e pour mesurer l&#39;efficacit&eacute; et la pr&eacute;cision de la synth&egrave;se de l&#39;ADN au-del&agrave; de ces l&eacute;sions. Cette analyse a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que d&#39;insertion du Cyt en face de la N (2)-ethylGua d&#39;adduits de l&#39;ADN polym&eacute;rase alpha est environ de 4-fois moins efficace que l&#39;insertion du Cyt en face d&#39;un r&eacute;sidu de Gua unadducted &agrave; la m&ecirc;me position. Extension au n (2)-ethylGua:Cyt 3&#39;--terminus de l&#39;ADN polym&eacute;rase alpha est environ de 3 fois moins efficace que l&#39;extension d&#39;un Cyt en face de la Gua unadducted. Insertion du Cyt en face de la N (2) - ethylGua des l&eacute;sions de l&#39;ADN polym&eacute;rase eta est environ 370-fold plus efficace que de l&#39;ADN polym&eacute;rase alpha et l&#39;extension au n (2) - ethylGua:Cyt 3&#39;-terminus par l&#39;eta de l&#39;ADN polym&eacute;rase est environ 3 fois plus efficace que de l&#39;ADN polym&eacute;rase alpha. De plus, l&#39;ADN polym&eacute;rase eta ins&egrave;re pr&eacute;f&eacute;rence le nucl&eacute;otide correct Cyt en face de la N (2)-l&eacute;sion ethylGua avec presque le m&ecirc;me niveau de pr&eacute;cision comme en face d&#39;un Gua unadducted, minimisant ainsi le potentiel de mutagentic de cette l&eacute;sion. Ce r&eacute;sultat contraste avec l&#39;efficacit&eacute; relativement &eacute;lev&eacute;e de misincorporation de ton oppos&eacute; le O (6)-ethylGua d&#39;adduits de l&#39;ADN polym&eacute;rases alpha et eta. Dans les r&eacute;actions contenant alpha de polym&eacute;rases d&#39;ADN et de l&#39;eta, synth&egrave;se devant le N (2)-adduit ethylGua est d&eacute;tect&eacute; &agrave; permis termin&eacute; la r&eacute;plication du mod&egrave;le d&#39;oligonucl&eacute;otides en adduction. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la r&eacute;plication exacte pass&eacute; le N (2)-ethylGua adduit pourrait &ecirc;tre facilit&eacute;e dans les cellules de la suspension de la r&eacute;plication, catalys&eacute;e par l&#39;ADN polym&eacute;rase alpha et l&eacute;sion bypass catalys&eacute;e par l&#39;ADN polym&eacute;rase eta.

La N2-&eacute;thylguanine et les l&eacute;sions de O6-&eacute;thyle et de O6-m&eacute;thylguanine dans l&#39;ADN : contrastant les r&eacute;ponses de l&#39;eta de l&#39;ADN polym&eacute;rase &laquo; bypass &raquo; et l&#39;alpha r&eacute;plicative de l&#39;ADN polym&eacute;rase.

Die N2-ethylguanine und die O6-Ethyl-und O6-Methylguanin L&#xE4;sionen in der DNA: kontrastierenden Antworten vom &#x26;quot;Bypass&#x26;quot;-DNA-Polymerase ETA und der replikativen DNA-Polymerase alpha.

Gli effetti di N (2)-ethylGua, O (6) - ethylGua e O (6) - methylGua addotti nel modello DNA sulla polimerizzazione di mammiferi DNA polimerasi alfa ed eta sono stati indagati. N (2) - ethylGua addotto polimerizzazione blocchi da replicativa del DNA polimerasi alfa in misura molto maggiore rispetto a quello della O (6) - etil - o la O (6) - methylGua addotti. L&#39;eta della polimerasi del DNA in modo efficiente e accurato bypassa la N (2)-lesione ethylGua ma come DNA polimerasi alfa allo stesso modo &egrave; bloccato da O (6) - etil - o O (6) - methylGua addotti. Un&#39;analisi cinetica dello stato stazionario di inserzione del nucleotide di fronte la N (2) - ethylGua e O (6) - ethylGua addotti di DNA polimerasi alfa ed eta e prolunga da 3&#39;-termini posizionato fronte questi addotti &egrave; stato eseguito per misurare l&#39;efficienza e l&#39;accuratezza della sintesi del DNA del passato queste lesioni. Questa analisi ha mostrato che inserimento di Cyt fronte N (2)-ethylGua addotto dalla DNA polimerasi alfa &egrave; circa 4-piega meno efficace inserimento di Cyt fronte un residuo di Gua unadducted nella stessa posizione. Estensione da N (2)-ethylGua:Cyt 3&#39;--capolinea di DNA polimerasi alfa &egrave; circa 3 fold meno efficiente che estensione da un Cyt fronte il Gua unadducted. Inserimento di Cyt fronte N (2) - lesione ethylGua da eta la DNA polimerasi &egrave; circa 370-fold pi&ugrave; efficiente per la DNA polimerasi alfa e l&#39;estensione da N (2) - ethylGua:Cyt 3&#39;-capolinea dall&#39;eta di DNA polimerasi &egrave; circa 3 volte pi&ugrave; efficiente della DNA polimerasi alfa. Inoltre, la DNA polimerasi eta preferibilmente inserisce il nucleotide corretto Cyt fronte N (2)-lesione ethylGua con quasi lo stesso livello di precisione di fronte un Gua unadducted, riducendo cos&igrave; al minimo il potenziale mutagentic di questa lesione. Questo risultato contrasta con l&#39;efficienza di misincorporation relativamente alta del tuo opposto O (6)-ethylGua addotti di DNA polimerasi alfa ed eta. Nelle reazioni contenenti sia DNA polimerasi alfa ed eta, sintesi del passato N (2)-ethylGua addotto viene rilevato a permesso completata la replica del modello del oligonucleotide addotti. Questi risultati suggeriscono che la replica accurata del passato N (2)-ethylGua addotto potrebbe essere facilitato in cellule da una pausa di replica catalizzata dalla DNA polimerasi alfa e lesione tangenziale catalizzata dalla DNA polimerasi eta.

N2-ethylguanine e le lesioni O6-etil - e O6-metilguanina DNA: contrastanti risposte da parte dell&#39;eta di DNA polimerasi &quot;bypass&quot; e l&#39;alfa replicativa del DNA polimerasi.

&#x52B9;&#x679C; N (2) &#x306E;-O (6) - ethylGua &#x3068; O (6) - ethylGua methylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3067;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E; DNA &#x91CD;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068; eta &#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;N &#xFF08;2&#xFF09; - ethylGua &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8907;&#x88FD; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; (6) - &#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; - O &#x307E;&#x305F;&#x306F; O (6) &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x91CD;&#x5408; - methylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B; N (2) DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; eta &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;-ethylGua &#x75C5;&#x5909;&#x304C;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53; methylGua &#x306E; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; O (6) - &#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; - &#x307E;&#x305F;&#x306F; O (6) - &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x633F;&#x5165; N (2) - ethylGua &#x3068; O (6) - &#x53CD;&#x5BFE;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x89E3;&#x6790; ethylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x306E; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068; eta &#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x304B;&#x3089; 3&#39;-&#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E; DNA &#x5408;&#x6210;&#x904E;&#x53BB;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3068;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x305D;&#x306E; Cyt N (2) &#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306E;&#x633F;&#x5165;-ethylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x308B; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x306F;&#x7D04; 4-&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9; Cyt &#x306E;&#x633F;&#x5165; unadducted &#x306E; Gua &#x6B8B;&#x6E23;&#x540C;&#x3058;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x3002;N (2) &#x304B;&#x3089;&#x62E1;&#x5F35;-ethylGua:Cyt 3&#39;--&#x672B;&#x7AEF; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3067;&#x306F;&#x7D04; 3 &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50; unadducted Gua &#x5411;&#x304B;&#x3044; Cyt &#x304B;&#x3089;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3002;Cyt N (2) &#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306E;&#x633F;&#x5165; - ethylGua &#x75C5;&#x5909;&#x306B;&#x3088;&#x308A; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; eta &#x306F;&#x7D04; 370-fold DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &alpha; &#x304A;&#x3088;&#x3073; N (2) &#x304B;&#x3089;&#x62E1;&#x5F35;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x7684; - ethylGua:Cyt 3&#39;-&#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CA;&#x30B9; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; eta &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3067;&#x7D04; 3 &#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x633F;&#x5165; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; eta &#x597D;&#x307E;&#x3057;&#x304F;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; Cyt N (2) &#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;-ethylGua &#x75C5;&#x5909;&#x3068;&#x307B;&#x307C;&#x540C;&#x3058;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x306E; mutagentic &#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x3001;unadducted Gua &#x53CD;&#x5BFE;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6C5D;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9AD8; misincorporation &#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684; O (6)-ethylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306F; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068; eta &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068; eta &#x5408;&#x6210; N (2) &#x904E;&#x53BB;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x53CD;&#x5FDC;-ethylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3092;&#x5185;&#x8EE2;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5B8C;&#x6210;&#x54C1;&#x8A31;&#x53EF;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;N (2) &#x904E;&#x53BB;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x793A;&#x5506;-ethylGua &#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068;&#x75C5;&#x5909;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; eta &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4E00;&#x6642;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

N2 ethylguanine &#x3068; DNA &#x306E; O6 &#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;-O6 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x75C5;&#x5909;:&#x300C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;&#x300D;DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; eta &#x3068;&#x8907;&#x88FD; DNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x304B;&#x3089;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3002;

N (2)-ethylGua, O (6)-ethylGua, O (6)-Methylgua&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; DNA &#xD3F4; &#xC54C;&#xD30C; &#xBC0F; &#xC5D0;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911; &#xD569;&#xC5D0; DNA &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. N (2)-ethylGua (6)-&#xC5D0;&#xD2F8;-&#xB294; O &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD070; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC77C;&#xCC28; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC54C;&#xD30C;&#xB85C; &#xBE14;&#xB85D; &#xD569; adduct &#xB610;&#xB294; O (6)-methylGua &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5D0;&#xD0C0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; N (2)-ethylGua &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC744; &#xBB34;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC54C;&#xD30C; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; O (6)-&#xC5D0;&#xD2F8;-&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB41C; &#xB610;&#xB294; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; O (6)-methylGua &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC0BD;&#xC785; &#xC704;&#xCE58;&#xB294; N (2)-ethylGua &#xACE0;&#xC740; O (6)-Ethylgua&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; DNA &#xD3F4; &#xC54C;&#xD30C; &#xBC0F; &#xC5D0;&#xD0C0; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xBC0F; 3&#39;-&#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; &#xBC30;&#xCE58; &#xBC18;&#xB300; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;&#xC774; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD6A8;&#xC728;&#xACFC; &#xACFC;&#xAC70;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCD1; &#xBCC0; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D; Cyt &#xBC18;&#xB300;&#xB294; N (2)-ethylGua adduct DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC54C;&#xD30C;&#xB85C;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785; &#xC57D; 10 (4) &#xBC30; &#xAC19;&#xC740; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; unadducted Gua &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC18;&#xB300; Cyt&#xC758; &#xC0BD;&#xC785; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. N (2) &#xD655;&#xC7A5;-ethylGua:Cyt 3&#39;-&#xB9D0;&#xB2E8; &#xC54C;&#xD30C; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB85C;&#xB294; &#xC57D; 10 (3)-&#xBC30; Cyt unadducted Gua &#xB9DE;&#xC740;&#xD3B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5;&#xC790; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC774; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB3C4;&#xCC29; &#xD558; &#xC5EC; N (2)-ethylGua &#xBCD1; &#xBCC0; &#xBC18;&#xB300; Cyt &#xC0BD;&#xC785; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; N (2)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC57D; 370-fold &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;-ethylGua:Cyt 3&#39;-&#xB9D0;&#xB2E8; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xB3C4;&#xCC29; &#xD558; &#xC5EC; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC54C;&#xD30C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC57D; 3-fold &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5D0;&#xD0C0; &#xC120;&#xD638;&#xC774; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC758; mutagentic &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; unadducted Gua &#xB9DE;&#xC740;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC70;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4;&#xC640; N (2)-ethylGua &#xBCD1; &#xBCC0; &#xBC18;&#xB300; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; Cyt &#xC0BD;&#xC785; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; O (6)-ethylGua adduct DNA &#xD3F4; &#xC54C;&#xD30C; &#xBC0F; &#xC5D0;&#xD0C0; &#xB108;&#xC758; &#xBC18;&#xB300;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; misincorporation &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; &#xB300;&#xC870;. DNA &#xD3F4; &#xC54C;&#xD30C; &#xBC0F; &#xC5D0;&#xD0C0;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xC751;, &#xD569;&#xC131; &#xC9C0;&#xB09C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; N (2)-ethylGua adduct&#xB97C; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xD558; adducted oligonucleotide &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC758; &#xC644;&#xB8CC; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; N (2)-ethylGua adduct &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC81C;&#xAC00; &#xACFC;&#xAC70; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xBC14;&#xC774;&#xD328;&#xC2A4; &#xC5D0;&#xD0C0; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC; &#xC911;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC218;&#xB3C4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

N2 ethylguanine &#xBC0F; DNA&#xC5D0; O6-&#xC5D0;&#xD2F8;-O6 methylguanine &#xBCD1; &#xBCC0;: &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &quot;&#xC6B0;&#xD68C;&quot; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5D0;&#xD0C0;&#xC640; &#xC77C;&#xCC28; DNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC54C;&#xD30C;&#xB97C; &#xB300;&#xC870;.

Los efectos de N 2-ethylGua O 6-ethylGua y O 6-methylGua aductores en plantilla de ADN en la polimerizaci&oacute;n por mam&iacute;feros ADN polimerasas alfa y eta han sido investigados. La N 2-ethylGua aducto polimerizaci&oacute;n de bloques por la polimerasa de la DNA replicativa alfa en mucho mayor medida que hace la O (6) - etil - o el O 6-methylGua aductores. La ADN polimerasa eta eficientemente y exactamente puentea la lesi&oacute;n de 2-ethylGua N pero como ADN polimerasa alfa igualmente est&aacute; bloqueada por la O (6) - etil - o la 6-methylGua O aductos. Un estado de constante cin&eacute;tico an&aacute;lisis de inserci&oacute;n de nucle&oacute;tidos enfrente de la N 2-ethylGua y la 6-ethylGua O aductos por las ADN polimerasas alfa y eta y extensi&oacute;n de 3&#39;-termini colocado enfrente estos aductos fue realizado para medir la eficacia y la exactitud de la s&iacute;ntesis de ADN m&aacute;s all&aacute; de estas lesiones. Este an&aacute;lisis mostr&oacute; que la inserci&oacute;n de Cyt opuesto el N 2-ethylGua aducto por la ADN polimerasa alfa es aproximadamente 10 4 veces menos eficiente que la inserci&oacute;n de Cyt enfrente de un residuo de Gua unadducted en la misma posici&oacute;n. Extensi&oacute;n de la N (2) - ethylGua:Cyt 3&#39;-terminal por la ADN polimerasa alfa es aproximadamente 3 - veces menos eficiente que la extensi&oacute;n de un Cyt enfrente la Gua unadducted. Inserci&oacute;n de Cyt frente a la lesi&oacute;n de 2-ethylGua N de la eta de la ADN polimerasa es unos 370-fold m&aacute;s eficiente que la ADN polimerasa alfa, y extensi&oacute;n de la N (2)-ethylGua:Cyt 3&#39;-terminal de la eta de la ADN polimerasa es unos 3-fold m&aacute;s eficiente que por la ADN polimerasa alfa. Adem&aacute;s, la ADN polimerasa eta preferiblemente inserta el nucle&oacute;tido correcto Cyt frente a la lesi&oacute;n de 2-ethylGua N con casi el mismo nivel de precisi&oacute;n como enfrente una Gua unadducted, minimizando as&iacute; el potencial de mutagentic de esta lesi&oacute;n. Este resultado contrasta con la eficiencia misincorporation relativamente alta de tu contrario el 6-ethylGua O aducci&oacute;n por el ADN polimerasas alfa y eta. En reacciones que contiene tanto de ADN polimerasas alfa y de eta, s&iacute;ntesis pasado aducci&oacute;n de la N 2-ethylGua se ha detectado que permiten la replicaci&oacute;n completa de la plantilla del oligonucle&oacute;tido aducidos. Estos resultados sugieren que pasado la replicaci&oacute;n exacta la N 2-ethylGua aducto podr&iacute;a facilitarse en las c&eacute;lulas por una pausa de replicaci&oacute;n catalizada por la ADN polimerasa alfa y lesi&oacute;n derivaci&oacute;n catalizada por la ADN polimerasa eta.

El N2-ethylguanine y las lesiones de O6-etil - y O6-metilguanina en ADN: contrastar las respuestas de la eta de la ADN polimerasa de &quot;by-pass&quot; y la alfa replicativa polimerasa de la DNA.

Non c&#39;&egrave; sostanziale evidenze che suggeriscono che idrocarburi policiclici aromatici (IPA) di idrocarburi quali il benzo [a] pirene (B[a]P) indurre il cancro ai polmoni attraverso l&#39;attivazione metabolica. Come parte di un programma di delineare percorsi di attivazione PAH, abbiamo esaminato DNA addotti che si formano nelle cellule del polmone umano. Una cromatografia liquida di diluizione isotopo stabile reazione pi&ugrave; monitoraggio metodo della spettrometria di massa &egrave; stato utilizzato per quantificare otto anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (PDE B [a])-DNA derivata addotti in quattro linee di cellule umane broncoalveolare H358 con diversi fenotipi. P450 1A1/P450 1B1-induced H358 cellule esposte a (+ /-)-B [a] P-7,8-diidro-7,8-diolo (B[a]P-7,8-dihydrodiol), (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-2&#39;-deoxyguanosine [(+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo] era il DNA principale addotti, ed ha formato con nessuna fase di lag. Nelle celle transfected AKR1A1 H358, (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo era anche i principali addotti con una fase di ritardo di 3 h prima significativa addotto formazione &egrave; stato rilevato. Nelle celle transfected AKR1A1 H358 con indotto P450 1A1/P450 1B1, (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo era formata con nessuna fase di lag in quantit&agrave; simili a quelle delle celle H358 con up-regolato P450 1A1/P450 1B1. Sorprendentemente, la pi&ugrave; grande quantit&agrave; di (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo era formata nelle cellule controllo H358. Inoltre, (formazione di +)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &egrave; stato 2 volte superiore in (-)-B [a] P-7,8-diidrodiolo-esposti H358 celle quando confrontato con (+)-cellule B [a] P-7,8-diidrodiolo-esposti. Il P450 1A1/1B1 inibitore 2,4, 3&#39;, 5&#39;-tetramethoxystilbene non ha fatto attenuare DNA addotto formazione nelle cellule di controllo H358, suggerendo che un altro P450 era responsabile. Questi dati sollevare la possibilit&agrave; intrigante che P450 1A1/P450 1B1 e AKR1A1 possono essere protettivi contro (+)-danni al DNA B [a] PDE-mediata.

Formazione di Aldo-cheto reduttasi e citocromo P450-dipendente di benzo [a] pirene-derivato DNA addotti nelle cellule umane broncoalveolare.

&#x6709;&#x5927;&#x91CF;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x78B3;&#x6C22;&#x5316;&#x5408;&#x7269; &#xFF08;PAHs&#xFF09; &#x5982;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298; (B[a]P) &#x8BF1;&#x53D1;&#x80BA;&#x764C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x5316;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x6765;&#x63CF;&#x7ED8;&#x7684;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x9999;&#x70C3;&#x6D3B;&#x5316;&#x8DEF;&#x7EBF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7814;&#x7A76; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x662F;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BA;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x7A00;&#x91CA;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31; / &#x591A;&#x53CD;&#x5E94;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8D28;&#x8C31;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7528;&#x6765;&#x91CF;&#x5316;&#x516B; anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B [a] PDE)-&#x6D3E;&#x751F;&#x7684; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x4E0D;&#x540C;&#x8868;&#x578B;&#x56DB; H358 &#x4EBA;&#x7C7B;&#x652F;&#x6C14;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;P450 &#x6C27;&#x5316; 1A1/p450 &#x6C27;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC; 1B1 H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; (+ /-)-B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#x6C22;-7&#xFF0C;8-&#x4E8C; &#xFF08;B[a]P-7,8-dihydrodiol)&#xFF0C;&#xFF08;+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-2&#39;-deoxyguanosine [(+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo] &#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x548C;&#x5B83;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x65E0;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x3002;AKR1A1 &#x8F6C;&#x67D3; H358 &#x7EC6;&#x80DE; (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &#x4E5F;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x524D; 3 h &#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x91CD;&#x5927;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;AKR1A1 &#x8F6C;&#x67D3; H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x8BF1;&#x5BFC; p450 &#x6C27;&#x5316; 1A1/p450 &#x6C27;&#x5316; 1B1&#xFF0C;&#xFF08;+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &#x6210;&#x7ACB;&#x4E0E;&#x6CA1;&#x6709;&#x6570;&#x989D;&#x4E0E;&#x4E0A;&#x8C03; p450 &#x6C27;&#x5316; 1A1/p450 &#x6C27;&#x5316; 1B1 H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x91CF; &#xFF08;+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &#x6210;&#x7ACB; H358 &#x63A7;&#x4EF6;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#xFF08;+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x662F;&#x5728; (-) 2 &#x6298;&#x9875;&#x9AD8;-B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#x6C22;&#x4E8C;&#x66B4;&#x9732; H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4; (+ /-)-B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#x6C22;&#x4E8C;&#x66B4;&#x9732;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;P450 &#x6C27;&#x5316; 1A1/1B1 &#x6291;&#x5236;&#x5242; 2&#xFF0C;4&#xFF0C;3&#39;&#xFF0C;5&#39;-tetramethoxystilbene &#x4E0D;&#x80FD;&#x51CF;&#x5F31; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210; H358 &#x63A7;&#x5236;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x53E6;&#x4E00; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4EFB;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4F7F;&#x5438;&#x5F15;&#x4EBA;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#xFF0C;p450 &#x6C27;&#x5316; 1A1/p450 &#x6C27;&#x5316; 1B1 &#x548C; AKR1A1 &#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4FDD;&#x62A4;&#x53CD;&#x5BF9; (+)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x3002;

&#x963F;&#x5C14;&#x591A; &middot; &#x916E;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x652F;&#x6C14;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;

There is substantial evidence to suggest that polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) such as benzo[a]pyrene (B[a]P) induce lung cancer through metabolic activation. As part of a program to delineate the routes of PAH activation, we have examined DNA adducts that are formed in human lung cells. A stable isotope dilution liquid chromatography/multiple reaction monitoring mass spectrometry method was used to quantify eight anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B[a]PDE)-derived DNA adducts in four H358 human bronchoalveolar cell lines with different phenotypes. In P450 1A1/P450 1B1-induced H358 cells exposed to (+/-)-B[a]P-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-2'-deoxyguanosine [(+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo] was the major DNA adduct, and it formed with no lag phase. In AKR1A1-transfected H358 cells, (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo was also the major adduct with a 3 h lag phase before significant adduct formation was detected. In AKR1A1-transfected H358 cells with induced P450 1A1/P450 1B1, (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo was formed with no lag phase in amounts similar to those in the H358 cells with up-regulated P450 1A1/P450 1B1. Surprisingly, the greatest amount of (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo was formed in the control H358 cells. Furthermore, (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo formation was 2-fold higher in (-)-B[a]P-7,8-dihydrodiol-exposed H358 cells when compared with (+/-)-B[a]P-7,8-dihydrodiol-exposed cells. The P450 1A1/1B1 inhibitor 2,4,3',5'-tetramethoxystilbene did not attenuate DNA adduct formation in the control H358 cells, suggesting that another P450 was responsible. These data raise the intriguing possibility that P450 1A1/P450 1B1 and AKR1A1 may be protective against (+)-B[a]PDE-mediated DNA damage.

Aldo-keto reductase- and cytochrome P450-dependent formation of benzo[a]pyrene-derived DNA adducts in human bronchoalveolar cells.

Il existe des preuves substantielles &#xE0; penser que les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) comme le benzo [a] pyr&#xE8;ne (B [a] P) induisent le cancer du poumon gr&#xE2;ce &#xE0; l&#x26;#39;activation m&#xE9;tabolique. Dans le cadre d&#x26;#39;un programme pour d&#xE9;limiter les voies d&#x26;#39;activation des HAP, nous avons examin&#xE9; adduits &#xE0; l&#x26;#39;ADN qui se forment dans les cellules pulmonaires humaines. Une dilution liquide stable isotope chromatographie / spectrom&#xE9;trie de multiples r&#xE9;actions de surveillance m&#xE9;thode de la masse a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour quantifier la lutte contre huit-7 ,8-dihydroxy-9 ,10-&#xE9;poxy-7 ,8,9,10-t&#xE9;trahydro-B [a] P (B [ a] PDE) d&#xE9;riv&#xE9; adduits &#xE0; l&#x26;#39;ADN dans quatre lign&#xE9;es cellulaires humaines H358 broncho avec diff&#xE9;rents ph&#xE9;notypes. Dans P450 1A1/P450 1B1-induites H358 cellules expos&#xE9;es &#xE0; (+ / -)-B [a] P-7 ,8-dihydro-7 ,8-diol (B [a] P-7 ,8-dihydrodiol), ( +)-anti-trans-B [a] de la PDE-N2-2&#x26;#39;-d&#xE9;soxyguanosine [(+)-anti-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo] a &#xE9;t&#xE9; le grand adduits &#xE0; l&#x26;#39;ADN, et qu&#x26;#39;elle forme avec aucun lag de phase. Dans AKR1A1 transfect&#xE9;es H358 cellules, (+)-trans-anti-B [a]-N2-PDE dGuo est &#xE9;galement le produit d&#x26;#39;addition avec un grand retard de phase 3 h avant la formation d&#x26;#39;adduits majeure est d&#xE9;tect&#xE9;e. En AKR1A1-transfect&#xE9;es avec H358 cellules induites P450 1A1/P450 1B1, (+)-anti-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo a &#xE9;t&#xE9; form&#xE9; sans phase de latence dans des quantit&#xE9;s similaires &#xE0; celles des cellules H358 avec un maximum r&#xE9;glement&#xE9; P450 1B1 1A1/P450. &#xC9;tonnamment, la plus grande quantit&#xE9; de (+)-anti-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo a &#xE9;t&#xE9; form&#xE9; dans les cellules H358 de contr&#xF4;le. En outre, (+)-anti-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo formation &#xE9;tait 2 fois plus &#xE9;lev&#xE9;e dans les (-)-B [a] P-7 ,8-dihydrodiol expos&#xE9;s H358 cellules par rapport &#xE0; (+ / -)-B [a] P-7 ,8-dihydrodiol-ont expos&#xE9; des cellules. L&#x26;#39;inhibiteur de P450 1A1/1B1 2,4,3 &#x26;#39;, 5&#x26;#39;-tetramethoxystilbene ne pas att&#xE9;nuer la formation d&#x26;#39;adduits d&#x26;#39;ADN dans le contr&#xF4;le H358 cellules, sugg&#xE9;rant une autre P450 charg&#xE9;e. Ces donn&#xE9;es soul&#xE8;vent la possibilit&#xE9; intrigante que P450 1A1/P450 1B1 et AKR1A1 peut &#xEA;tre protecteur contre (+)-B [a] dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN de la PDE-m&#xE9;diation.

Aldo-c&#xE9;to r&#xE9;ductase et le cytochrome P450-d&#xE9;pendante de la formation du benzo [a] pyr&#xE8;ne-adduits &#xE0; l&#x26;#39;ADN dans des cellules humaines d&#xE9;riv&#xE9;es broncho

Es gibt deutliche Hinweise darauf, dass polyzyklische aromatische Kohlenwasserstoffe (PAK) wie z. B. Benzo [a] pyren (B[a]P) induzieren Lungenkrebs durch Stoffwechselaktivierung. Als Teil eines Programms, die Routen der PAH-Aktivierung abzugrenzen, haben wir gepr&uuml;ft DNA Addukte, die in menschliche Lungenzellen gebildet werden. Ein stabiles Isotop Verd&uuml;nnung fl&uuml;ssige Chromatographie / mehrere Reaktion &Uuml;berwachung Massenspektrometrie-Methode wurde verwendet, um die acht Anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B [a] PDE) quantifizieren-abgeleiteten DNA Addukte in vier H358 menschlichen Bronchoalveol&auml;re Zelllinien mit unterschiedlichen Ph&auml;notypen. In P450 1A1/P450 1B1 induziert H358 Zellen ausgesetzt (+/-)-B [a] P-7, 8-Dihydro-7,8-Diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-2&#39;-deoxyguanosine [(+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo] war die gro&szlig;e DNA-Addukt, und es bildete mit keine Verz&ouml;gerung-Phase. In H358 AKR1A1 transfected Zellen (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo war auch die gro&szlig;en Addukt mit 3 h Verz&ouml;gerung Phase vor erhebliche Addukt Bildung wurde erkannt. In H358 AKR1A1 transfected Zellen mit induzierten P450 1A1/P450 1B1 (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo wurde mit keine Verz&ouml;gerung-Phase in Mengen &auml;hnlich denen in den Zellen H358 mit oben-geregelt P450 1A1/P450 1B1 gebildet. &Uuml;berraschenderweise den gr&ouml;&szlig;ten Betrag an (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo wurde in das Steuerelement H358 Zellen gebildet. Dar&uuml;ber hinaus (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo Bildung war in (-) 2-fach h&ouml;her-B [a] P-7,8-Dihydrodiol-gemachten H358 Zellen im Vergleich mit (+/-)-B [a] P-7,8-Dihydrodiol-exponierten Zellen. Der P450 1A1/1B1 Hemmer 2,4, 3&#39;, 5&#39;-Tetramethoxystilbene nicht d&auml;mpfen DNA-Addukt Bildung in den Zellen Steuerelement H358 darauf hindeutet, dass ein weiteres P450 verantwortlich war. Diese Daten erheben der faszinierenden M&ouml;glichkeit, P450 1A1/P450 1B1 und AKR1A1 m&ouml;glicherweise Schutzfunktion gegen (+)-B [a] PDE-vermittelte DNA-Sch&auml;den.

Aldo-Keto-Reduktase und Cytochrom P450-abh&auml;ngige Bildung von Benzo Addukte [a] pyren abgeleitete DNA in menschliche Bronchoalveol&auml;re Zellen.

[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#xFF08;B [1] P&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x80BA;&#x764C;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x591A;&#x74B0;&#x5F0F;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x70AD;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#xFF08;PAH&#xFF09;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAH&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63CF;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x74B0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x80BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x5E0C;&#x91C8;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;/&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306F;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;8&#x6297;-7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9,10  - &#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;-7 ,8,9,10-&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-B [1] P&#xFF08;B [&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;4&#x3064;&#x306E;H358&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;] PDE&#xFF09;&#x7531;&#x6765;&#x306E;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3002; &#xFF08;+ /  - &#xFF09;-B [1] P--7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-7,8  - &#x30B8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#xFF09;&#x3001;&#xFF08;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;P450 1A1/P450 1B1&#x8A98;&#x8D77;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N2-2&#x26;#39;-&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;[&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N2-dGuo]&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x9045;&#x308C;&#x7121;&#x3057;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x76F8;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x524D;&#x306B;AKR1A1&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N2-dGuo&#x3067;&#x3082;3&#x6642;&#x9593;&#x9045;&#x308C;&#x76F8;&#x3068;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;P450 1A1/P450 1B1&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;AKR1A1&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N2-dGuo&#x304C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x91CF;&#x306E;&#x9045;&#x308C;&#x7121;&#x3057;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;P450 1A1/P450 1B1&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6700;&#x5927;&#x91CF;&#x306E;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N2-dGuo&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N2-dGuo&#x5F62;&#x6210;&#x304C;2&#x500D;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#xFF08; - &#xFF09;-B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;H358&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;+&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;/  - &#xFF09;-B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-&#x66DD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002; P450 1A1/1B1&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;2,4,3 &#x26;#39;&#x3001;5&#x26;#39;-tetramethoxystilbene&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;P450&#x306F;&#x3001;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;P450 1A1/P450 1B1&#x3068;AKR1A1&#x304C;&#xFF08;+&#xFF09;-B [A] PDE-&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4FDD;&#x8B77;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;

&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9; - &#x30B1;&#x30C8;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;P450&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#x7531;&#x6765;&#x306E;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;

&#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; polycyclic &#xC544;&#xB85C;&#xB9C8; &#xD0C4; &#xD654; &#xC218;&#xC18C; (PAHs) &#xAC19;&#xC740; benzo&#xC758; [a] pyrene (B[a]P) &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD3D0;&#xC554;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C;. PAH &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB178;&#xC120; &#xC724;&#xACFD;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC; &#xB2E4; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC77C;&#xD658;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB294; DNA&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD76C;&#xC11D; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; / &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC18;&#xC751; 8 anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P ([a] B PDE) &#xCC99;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;-&#xB2E4;&#xB978; &#xACE0;&#xAE30; 4 H358 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; bronchoalveolar &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD;&#xB41C; DNA &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. P450 1A1/P450 1B1 &#xC720;&#xB3C4; H358 &#xC140; (+ /-)&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;-B [a] P-7, 8-dihydro-7, 8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-2&#39;-deoxyguanosine [(+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo] &#xC8FC;&#xC694; DNA adduct &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5C6;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xC704;&#xC0C1; &#xD615;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. AKR1A1 &#xD398; H358 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; (+)-anti-trans-b[a]pde-n2-dguo&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; adduct &#xC804;&#xC5D0; 3 h &#xB798;&#xADF8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; adduct &#xD615;&#xC131; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. AKR1A1 &#xD398; H358 &#xC140; &#xC720;&#xB3C4; P450 1A1/P450 1b1&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo P450 1A1/P450 1B1 &#xC704;&#xB85C;&#xC640; H358 &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xC704;&#xC0C1; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xB9CE;&#xC740; (+)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &#xC81C;&#xC5B4; H358 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, ((-) +)-anti-trans-B[a]PDE-N2-dGuo &#xD615;&#xC131; 2-fold &#xB192;&#xC558;&#xB2E4;.-B P-7, 8 dihydrodiol &#xB178;&#xCD9C; H358 [a] (+)&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;-B [a] P 7, 8 dihydrodiol &#xB178;&#xCD9C; &#xC140;. P450 1A1/1B1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 2, 4, 3&#39;, 5&#39;-tetramethoxystilbene DNA &#xAC10;&#xC1E0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; adduct &#xD615;&#xC131; &#xC81C;&#xC5B4; H358 &#xC140;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; P450 &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C0;&#xC9C0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC778;&#xC0C1; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; P450 1A1/P450 1B1 &#xADF8;&#xC640; AKR1A1 (+)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638; &#xC218;-B [a] PDE &#xC911;&#xC7AC; DNA &#xC190;&#xC0C1;.

Benzo&#xC758; &#xC54C;&#xB3C4;-keto reductase-&#xC640; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 &#xC885;&#xC18D; &#xD615;&#xC131; pyrene &#xD30C;&#xC0DD; DNA [a] &#xC778;&#xAC04;&#xC758; bronchoalveolar &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;.

No hay evidencia sustancial que sugiere que los hidrocarburos arom&#xE1;ticos polic&#xED;clicos (HAP), tales como el benzo [a] pireno (B [a] P) inducen el c&#xE1;ncer de pulm&#xF3;n a trav&#xE9;s de la activaci&#xF3;n metab&#xF3;lica. Como parte de un programa para delinear las rutas de activaci&#xF3;n de la HAP, hemos examinado aductos de ADN que se forman en las c&#xE9;lulas pulmonares humanas. Una diluci&#xF3;n de is&#xF3;topos estables cromatograf&#xED;a l&#xED;quida / m&#xFA;ltiple reacci&#xF3;n vigilancia masa m&#xE9;todo de espectrometr&#xED;a se utiliz&#xF3; para cuantificar ocho anti-7 ,8-dihidroxi-9 ,10-epoxi-7 ,8,9,10-tetrahidro-B [a] P (B [ a] PDE) derivado de aductos de ADN en cuatro l&#xED;neas celulares humanas H358 broncoalveolar con fenotipos diferentes. En P450 1B1 1A1/P450 inducidas por las c&#xE9;lulas expuestas a H358 (+ / -)-B [a] P-7 ,8-dihidro-7 ,8-diol (B [a] P-7 ,8-dihidrodiol), ( +)-contra-trans-B [a] de la PDE-N2-2&#x26;#39;-desoxiguanosina [(+)-contra-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo] era el aducto mayor del ADN, y se form&#xF3; con ning&#xFA;n retraso fase. En AKR1A1 transfectadas H358 c&#xE9;lulas, (+)-trans-anti-B [a] la PDE-N2-dGuo era tambi&#xE9;n el aducto principal con una fase de retardo 3 h antes de la formaci&#xF3;n de aducto significativa se detect&#xF3;. En AKR1A1-H358 transfectadas con c&#xE9;lulas inducidas P450 1A1/P450 1B1, (+)-anti-trans-B [a] la PDE-N2-dGuo se form&#xF3; con ninguna fase de retardo en cantidades similares a las de las c&#xE9;lulas H358 con hasta reguladas P450 1B1 1A1/P450. Sorprendentemente, la mayor cantidad de (+)-contra-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo se form&#xF3; en las c&#xE9;lulas de control H358. Por otra parte, (+)-contra-trans-B [a] de la PDE-N2-dGuo formaci&#xF3;n fue dos veces mayor en (-)-B [a] P-7 ,8-dihidrodiol expuestos H358 c&#xE9;lulas en comparaci&#xF3;n con (+ / -)-B [a] P-7 ,8-dihidrodiol c&#xE9;lulas expuestas. El P450 1A1/1B1 inhibidor 2,4,3 &#x26;#39;, 5&#x26;#39;-tetramethoxystilbene no atenuar la formaci&#xF3;n de aductos de ADN en el control H358 c&#xE9;lulas, lo que sugiere que otro P450 fue responsable. Estos datos plantean la intrigante posibilidad de que P450 1B1 y 1A1/P450 AKR1A1 puede tener un efecto protector contra el (+)-B [a] de la PDE-mediada por el da&#xF1;o del ADN.

Aldo-ceto reductasa y citocromo P450 dependiente de Formaci&#xF3;n de benzo [a] pireno derivados de aductos de ADN en c&#xE9;lulas humanas broncoalveolar

&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298; ([a] P B)&#xFF0C;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x9999;&#x70C3; (PAH) &#x65B0;&#x9648;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9176;&#x8FD9;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9014;&#x5F84;&#xFF1A; &#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176; &#xFF08;&#x5982;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;) &#x4EA7;&#x751F;&#x81EA;&#x7531;&#x57FA;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#xFF0C;&#x7531; P4501A1/1B1 &#x5355;&#x5145;&#x6C27;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x73AF;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E8C;&#x9187;&#x73AF;&#x6C27;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x800C;&#x7531; P4501A1/1B1 &#x5355;&#x5145;&#x6C27;&#x53CD;&#x5E94;&#x3001; &#x73AF;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x548C;&#x963F;&#x5C14;&#x591A; &middot; &#x916E;&#x57FA;&#x8FD8;&#x539F; &#xFF08;AKRs&#xFF09; &#x4EA7;&#x751F; o &#x57FA;&#x5C3C;&#x5965;&#x5185;&#x65AF;&#x3002;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x5927;&#x7684;&#x66DD;&#x5149;&#x5EA6;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E3A;&#x73AF;&#x5883;&#x548C;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x9999;&#x70C3;&#x662F;&#x80BA; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;B [a] P &#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x5728;&#x6B64;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x5DF2;&#x4E0D;&#x597D;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x652F;&#x6C14;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1; H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230; B [a] P &#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176; (B [a] P-1&#xFF0C;6-&#x548C; B [a] P-3&#xFF0C;6-diones&#xFF09;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P4501A1/1B1 &#x5355;&#x5145;&#x6C27;&#x53CD;&#x5E94; [3-&#x7F9F;&#x57FA;-B [a] P&#x3001; B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x548C; 9&#xFF0C;10-&#x8DE8;-dihydrodiols &#x548C; B [a] P r 7&#xFF0C;t 8&#x3001; t-9 c-10-tetrahydrotetrol (B [a] P-tetraol-1)]&#xFF0C;&#x4ECE;&#x548C; AKRs (B [a] P-7&#x3001; 8-&#x8FEA;&#x5965;&#x5185;&#xFF09; &#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x548C;&#x53CD;&#x76F8;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x4E32;&#x8054;&#x5149;&#x7535;&#x4E8C;&#x6781;&#x7BA1;&#x9635;&#x5217;&#x4E0E;&#x8F90;&#x5C04;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3001; &#x91CF;&#x5316;&#x548C;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31; (LC-MS) &#x7531;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;&#x8FDB;&#x5EA6;&#x66F2;&#x7EBF;&#x663E;&#x793A;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; 3-&#x7F9F;&#x57FA;-B [a] P B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x53CD;&#x5F0F;-&#x4E8C;&#x6C22;&#x4E8C;&#x3001; B [a] P tetraol 1 &#x548C; B &#x8FEA;&#x5965; [a] P-7&#xFF0C;8-&#x5185;&#x8D85;&#x8FC7; 24 h.&#x5317;&#x90E8;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;B [a] P &#x8BF1;&#x5BFC; H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; P4501B1 &#x548C; AKR1C &#x9176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x3002;H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; 10 nM 2,378-&#x56DB;-p-&#x4E8C;&#x6076;&#x82F1; (&#x5B50;&#x9F20;) &#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x6D88;&#x9664;&#x6B64;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x6307;&#x51FA;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; B [a] P &#x548C;&#x5B50;&#x9F20;&#x611F;&#x5E94;&#x6700;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x751F;&#x76F8;&#x540C;&#x7684; B [a] P &#x4EE3;&#x8C22;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x7EA7;&#x522B;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x4F8B;&#x5916;&#x7684;&#x662F; B &#x8FEA;&#x5965; [a] P-3&#xFF0C;6-&#x5185;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4E0E;&#x5728;&#x573A;&#x7684;&#x5B50;&#x9F20;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5176;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269; P4501A1 &#x65E2; 1B1 &#x6210;&#x7ACB;&#x65E0;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x3002;&#x4FDD;&#x6301;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x5305;&#x62EC;&#x732A;&#x751F;&#x957F;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5408;&#x9176;&#x548C;&#x975E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x540C; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; P4501A1/1B1 &#x548C; AKR &#x901A;&#x8DEF;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BA;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0D;&#x662F;&#x3002;&#x5B83;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7684;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x9999;&#x70C3;&#x6D3B;&#x5316;&#x9014;&#x5F84;&#x4EA7;&#x91CF;&#x53CA;&#x5176;&#x72EC;&#x7279; H358 &#x4EBA;&#x80BA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x548C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x4E3A;&#x81F4;&#x764C;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

&#x4EBA;&#x4F53;&#x80BA;&#x6CE1; H358 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x4E2D;&#x7684;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3002;

Benzo[ a]pyrene (B[ a]P), a representative polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH), is metabolically activated by three enzymatic pathways: by peroxidases (e.g., cytochrome P450 peroxidase) to yield radical cations, by P4501A1/1B1 monooxygenation and epoxide hydrolase to yield diol epoxides, and by P4501A1/1B1 monooxygenation, epoxide hydrolase, and aldo-keto reductases (AKRs) to yield o-quinones. In humans, a major exposure site for environmental and tobacco smoke PAH is the lung; however, the profile of B[ a]P metabolites formed at this site has not been well characterized. In this study, human bronchoalveolar H358 cells were exposed to B[ a]P, and metabolites generated by peroxidase (B[ a]P-1,6- and B[ a]P-3,6-diones), from cytochrome P4501A1/1B1 monooxygenation [3-hydroxy-B[ a]P, B[ a]P-7,8- and 9,10- trans-dihydrodiols, and B[ a]P- r-7, t-8, t-9, c-10-tetrahydrotetrol (B[ a]P-tetraol-1)], and from AKRs (B[ a]P-7,8-dione) were detected and quantified by RP-HPLC, with in-line photo-diode array and radiometric detection, and identified by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). Progress curves showed a lag phase in the formation of 3-hydroxy-B[ a]P, B[ a]P-7,8- trans-dihydrodiol, B[ a]P-tetraol-1, and B[ a]P-7,8-dione over 24 h. Northern blot analysis showed that B[ a]P induced P4501B1 and AKR1C isoforms in H358 cells in a time-dependent manner, providing an explanation for the lag phase. Pretreatment of H358 cells with 10 nM 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo- p-dioxin (TCDD) eliminated this lag phase but did not alter the levels of the individual metabolites observed, suggesting that both B[ a]P and TCDD induction ultimately yield the same B[ a]P metabolic profile. The one exception was B[ a]P-3,6-dione which was formed without a lag phase in the absence and presence of TCDD, suggesting that the peroxidase responsible for its formation was neither P4501A1 nor 1B1. Candidate peroxidases that remain include PGH synthases and uninduced P450 isoforms. This study shows that the P4501A1/1B1 and AKR pathways are inducible in human lung cells and that the peroxidase pathway was not. It also provides evidence that each of the pathways of PAH activation yields their distinctive metabolites in H358 human lung cells and that each pathway may contribute to the carcinogenic process.

Metabolism of benzo[a]pyrene in human bronchoalveolar H358 cells using liquid chromatography-mass spectrometry.

Benzo [a] pyr&#xE8;ne (B [a] P), un hydrocarbure repr&#xE9;sentant aromatiques polycycliques (HAP), est m&#xE9;tabolis&#xE9;e par trois voies enzymatiques: par les peroxydases (par exemple, le cytochrome P450 peroxydase) pour donner des cations radicaux, par P4501A1/1B1 monooxygenation et &#xE9;poxyde hydrolase pour donner &#xE9;poxydes diol, et par P4501A1/1B1 monooxygenation, &#xE9;poxyde hydrolase, et Aldo-c&#xE9;to r&#xE9;ductases (AKRs) pour donner o-quinones. Chez les humains, un site d&#x26;#39;exposition importante pour les HAP de la fum&#xE9;e de tabac environnementale et est le poumon, mais le profil de B [a] P m&#xE9;tabolites form&#xE9;s &#xE0; ce site n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; bien caract&#xE9;ris&#xE9;s. Dans cette &#xE9;tude, l&#x26;#39;homme broncho-H358 cellules ont &#xE9;t&#xE9; expos&#xE9;es au B [a] P, et les m&#xE9;tabolites g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s par la peroxydase (B [a] P-1, 6 - et B [a] P-3 ,6-diones), &#xE0; partir du cytochrome P4501A1 / monooxygenation 1B1 [3-hydroxy-B [a] P, B [a] P-7, 8 - et 9,10 - trans-dihydrodiols, et B [a] P-r-7, t-8, t- 9, c-10-tetrahydrotetrol (B [a] P-t&#xE9;traol-1)], et de AKRs (B [a] P-7 ,8-dione) ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s et quantifi&#xE9;s par RP-HPLC, avec en ligne de photos -&#xE0; barrettes de diodes et de d&#xE9;tection radiom&#xE9;trique, et identifi&#xE9;s par chromatographie en phase liquide-spectrom&#xE9;trie de masse (LC-MS). Courbes d&#x26;#39;avancement a montr&#xE9; une phase de latence dans la formation de 3-hydroxy-B [a] P, B [a] P-7, 8 - trans-dihydrodiol, B [a] P-t&#xE9;traol-1, et B [a] P -7,8-dione de plus de 24 h. Northern blot analyse a montr&#xE9; que le B [a] P induit P4501B1 et isoformes AKR1C en H358 cellules d&#x26;#39;une mani&#xE8;re d&#xE9;pendante du temps, en fournissant une explication pour la phase de latence. Le pr&#xE9;traitement des cellules H358 avec 10 nM 2,3,7,8-t&#xE9;trachlorodibenzo-p-dioxine (TCDD) a &#xE9;limin&#xE9; cette phase de latence, mais ne modifie pas les niveaux de m&#xE9;tabolites individuels observ&#xE9;s, sugg&#xE9;rant que l&#x26;#39;induction &#xE0; la fois en B [a] P et TCDD en fin de compte donner le m&#xEA;me B [a] P profil m&#xE9;tabolique. La seule exception &#xE9;tait le B [a] P-3 ,6-dione, qui a &#xE9;t&#xE9; form&#xE9; sans une phase de latence en l&#x26;#39;absence et la pr&#xE9;sence de TCDD, ce qui sugg&#xE8;re que la peroxydase responsable de sa formation n&#x26;#39;&#xE9;tait ni P4501A1 ni 1B1. Peroxydases candidats qui restent comprennent synthases PGH et non induites isoformes du cytochrome P450. Cette &#xE9;tude montre que les voies P4501A1/1B1 et AKR sont inductible dans des cellules pulmonaires humaines et que la voie n&#x26;#39;&#xE9;tait pas la peroxydase. Il fournit &#xE9;galement la preuve que chacune des voies d&#x26;#39;activation des HAP donne leurs m&#xE9;tabolites dans distinctifs H358 cellules pulmonaires humaines et que chacune de ces voies peut contribuer au processus canc&#xE9;rog&#xE8;ne.

M&#xE9;tabolisme du benzo [a] pyr&#xE8;ne dans l&#x26;#39;homme broncho H358 cellules en utilisant la chromatographie liquide-spectrom&#xE9;trie de masse

Benzo [a] pyren B [a] P, eine repr&auml;sentative polyzyklischer aromatischer Kohlenwasserstoffe (PAK), wird durch drei enzymatische Wege metabolisch aktiviert: durch Peroxidasen (z. B. Cytochrom P450 Peroxydase), radikale-Kationen, von Monooxygenation und Epoxid-Hydrolase P4501A1/1B1 zu erbringen, um Diol Epoxide zu erzielen und durch P4501A1/1B1 Monooxygenation, Epoxid-Hydrolase und Aldo-Keto Reductases (AKRs), o-Chinone zu erbringen. Beim Menschen, eine gro&szlig;e Ausstellung Platz f&uuml;r Umwelt- und Tabakrauch PAH ist die Lunge; jedoch war das Profil B [a] P-Metaboliten gebildet an diesem Standort nicht gut charakterisiert. In dieser Studie wurden menschliche Bronchoalveol&auml;re H358 Zellen B [a] P und Metaboliten durch Peroxydase generiert ausgesetzt (B [a] P-1,6- und B [a] P-3,6-Diones), von Zellfarbstoff P4501A1/1B1 Monooxygenation [3-hydroxy-B [a] P, B [a] P-7,8 - und 9,10-Trans-Dihydrodiols, und B [a] P-R-7, t-8, t-9, c-10-Tetrahydrotetrol (B [a] P-Tetraol-1)] und von AKRs (B [a] P-78-Dione) wurden erkannt und quantifiziert durch RP-HPLC, mit Inline-Foto-Dioden-Array und radiometrische Erkennung, und durch fl&uuml;ssige Chromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) identifiziert. Fortschritt Kurven zeigte einer Verz&ouml;gerung-Phase bei der Bildung von 3-hydroxy-B [a] P, B [a] P-7,8-Trans-Dihydrodiol, B [a] P-Tetraol-1 und B [a] P-7,8-Dione &uuml;ber 24 h. Northern blot Analyse zeigte, dass B [a] P P4501B1 und AKR1C-Isoformen in H358 Zellen in gewissem zeitabh&auml;ngige induzierte bietet eine Erkl&auml;rung f&uuml;r die Verz&ouml;gerung-Phase. Vorbehandlung der H358 Zellen mit 10 nM 2.378-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin (TCDD) beseitigt diese Verz&ouml;gerung-Phase aber nicht die Ebenen der einzelnen Metaboliten beobachtet, was darauf hindeutet, dass B [a] P und Induktion TCDD letztlich der gleichen B [a] P metabolische Profil Ausbeute &auml;ndern. Die einzige Ausnahme war B [a] P-3, 6-Dione, ohne Verz&ouml;gerung Phase in und Abwesenheit von TCDD, was darauf hindeutet, dass die Peroxydase f&uuml;r seine Entstehung verantwortlich, weder P4501A1 noch 1B1 war gebildet wurde. Kandidaten-Peroxidasen, die bleiben sind PGH-Synthasen und uninduced P450-Isoformen. Diese Studie zeigt, dass diese P4501A1/1B1 und AKR Wege in menschliche Lungenzellen durch Induktion sind und dass die Peroxydase-Pathway nicht war. Sondern bietet auch Beweise daf&uuml;r, dass jeder der Bahnen der PAH-Aktivierung ihre unverwechselbaren Metaboliten im H358 menschliche Lungenzellen ergibt und dass jede Bahn an den krebserregenden Prozess beitragen kann.

Stoffwechsel von Benzo [a] pyren in menschlichen Bronchoalveol&auml;re H358 Zellen mit liquid Chromatographie-Massenspektrometrie.

Benzo [a] pirene (B [a] P), un rappresentante idrocarburi policiclici aromatici (IPA), &egrave; metabolicamente attiva da tre vie enzimatiche: perossidasi (ad es., perossidasi del citocromo P450) di cedere i cationi radicali, da P4501A1/1B1 monooxygenation ed epossido idrolasi per resa diolo epossidi e P4501A1/1B1 monooxygenation, epossido idrolasi e aldo-cheto reductases (AKRs) a cedere o-chinoni. Negli esseri umani, il sito per una maggiore esposizione ambientale e del fumo di tabacco IPA &egrave; il polmone; Tuttavia, il profilo dei metaboliti B [a] P formata in questo sito non &egrave; stato ben caratterizzato. In questo studio, le cellule umane broncoalveolare H358 sono stati esposti a P B [a] e metaboliti generati dalla perossidasi (B [a] P-1,6 - e B [a] P-3,6-diones), dal citocromo P4501A1/1B1 monooxygenation [3-idrossi-B [a] P, B [a] P-7,8 - e 9,10-trans-dihydrodiols e B [a] P-r-7, t-8, t-9, c-10-tetrahydrotetrol (B [a] P-tetraolo-1)] e da AKRs (B [a] P-78-dione) sono stati rilevati e quantificato mediante RP-HPLC, con serie di foto in linea-diodi e rilevazione radiometrica e identificato da liquida cromatografia spettrometria di massa (LC-MS). Curve di progresso ha mostrato una fase di ritardo nella formazione di 3-idrossi-B [a] P, B [a] P--trans-diidrodiolo, B [a] P-tetraolo-1 e B [a] P-7,8-dione oltre 24 h. Northern blot analisi ha mostrato che B [a] P indotta isoforme P4501B1 e AKR1C nelle cellule H358 in modo tempo-dipendente, fornendo una spiegazione per la fase di lag. Pretrattamento delle cellule H358 con 10 nM 2.378-tetraclorodibenzo-p-diossina (TCDD) eliminato questa fase lag ma non ha modificato i livelli dei metaboliti individuali osservate, suggerendo che sia B [a] P e induzione di TCDD in definitiva resa della stessa B [a] profilo metabolico P. L&#39;unica eccezione era B [a] P-3,6-dione che nasce senza una fase di lag in assenza che in presenza di TCDD, suggerendo che la perossidasi responsabile della sua formazione era n&eacute; P4501A1 n&eacute; 1B1. Le perossidasi candidato che rimangono includono PGH synthases e uninduced P450 isoforme. Questo studio dimostra che i percorsi P4501A1/1B1 e AKR sono inducibili in cellule polmonari umane e che il percorso di perossidasi non era. Fornisce inoltre evidenza che ognuno dei percorsi di attivazione PAH rese loro metaboliti distintivi in cellule polmonari umane H358 e che ogni percorso pu&ograve; contribuire al processo cancerogeno.

Metabolismo di benzo [a] pirene in cellule umane broncoalveolare H358 utilizzando liquida cromatografia spettrometria di massa.

&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#xFF08;B [1] P&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x306A;&#x591A;&#x74B0;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x70AD;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#xFF08;PAH&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7684;&#x306B;3&#x9175;&#x7D20;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P4501A1/1B1 1&#x539F;&#x5B50;&#x9178;&#x7D20;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P450&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x30B8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x5F97;&#x305F;&#x3001;&#x3068;P4501A1/1B1 1&#x539F;&#x5B50;&#x9178;&#x7D20;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3001;&#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9; - &#x30B1;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AKRs&#xFF09;&#x3067;O-&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x985E;&#x3092;&#x5F97;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x7159;PAH&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x66B4;&#x9732;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x80BA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;B [1] P&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;B [1] P&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#xFF08;B [1] P-1&#x3001;6  - &#x53CA;&#x3073;B [1] P-3 ,6-&#x30B8;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF09;&#x3001;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;P4501A1&#x304B;&#x3089;/ 1B1 1&#x539F;&#x5B50;&#x9178;&#x7D20;&#x6DFB;&#x52A0;[3  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-B [1] P&#x3001;B [] P-7&#x3001;8  - &#x304A;&#x3088;&#x3073;9,10  - &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3001;B [1] P-R-7&#x3001;T-8&#x3001;T- C-10-tetrahydrotetrol&#xFF08;B [1] P-&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;-1&#xFF09;]&#x3068;AKRs&#xFF08;B [1] P--7,8  - &#x30B8;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x56F3;9&#x306B;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5199;&#x771F;&#x3068;&#x3001;RP-HPLC&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C9;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3068;&#x653E;&#x5C04;&#x691C;&#x51FA;&#x3001;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; - &#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF08;LC-MS&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x3001;B [1] P-&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;-1&#x3001;B [1] P  - &#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x306E;&#x66F2;&#x7DDA;&#x306F;&#x3001;3  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-B [1] P&#x3001;B [1] P-7&#x3001;8&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x8A98;&#x5C0E;&#x671F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;24&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x4E0A;-7,8  - &#x30B8;&#x30AA;&#x30F3;&#x3002;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B6;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;B [1] P&#x8A98;&#x767A;P4501B1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;AKR1C&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x30E9;&#x30B0;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 10nM&#x306E;2,3,7,8  - &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B8;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;-p-&#x30C0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;TCDD&#xFF09;&#x3053;&#x306E;&#x30E9;&#x30B0;&#x76F8;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;B [1] P&#x3068;TCDD&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x540C;&#x3058;B [1] P&#x4EE3;&#x8B1D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x4F8B;&#x5916;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;P4501A1&#x3082;1B1&#x3082;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;TCDD&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3068;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x671F;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;B [1] P -3,6  - &#x30B8;&#x30AA;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; PGH&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;P450&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6B8B;&#x308B;&#x5019;&#x88DC;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;P4501A1/1B1&#x3068;AKR&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x80BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;PAH&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5404;&#x3005;&#x306F;H358&#x30D2;&#x30C8;&#x80BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x764C;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x305D;&#x306E;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; - &#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;

Benzo [a] pyrene ([a] P B) &#xB300;&#xD45C; polycyclic &#xBC29;&#xD5A5;&#xC871; &#xD0C4;&#xD654;&#xC218;&#xC18C; (PAH) metabolically &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xACBD;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;: diol epoxides&#xB97C; P4501A1/1B1 monooxygenation &#xBC0F; &#xC5D0;&#xD3ED;&#xC2DC; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE09;&#xC9C4;&#xC801;&#xC778; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC0DD;&#xC131; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;) peroxidases &#xBC0F; P4501A1/1B1 monooxygenation, &#xC5D0;&#xD3ED;&#xC2DC; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC0F; &#xC54C;&#xB3C4;-keto reductases (AKRs) o-&#xD034; &#xD56D;&#xBCF5;. &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294;, &#xC8FC;&#xC694; &#xB178;&#xCD9C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD658;&#xACBD; &#xBC0F; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; PAH&#xB294; &#xD3D0;; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; [a] B P metabolites &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xD558;&#xC9C0; &#xC798; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; bronchoalveolar H358 &#xC140; [a] B P&#xC640; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; ([a] B P-1, 6-&#xBC0F; B [a] P-3, 6-&#xB514;), &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P4501A1/1B1 monooxygenation [3-hydroxy-B [a] P, B [a] P-7, 8 &#xC6D4; &#xBC0F; 9, 10-&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-dihydrodiols, &#xBC0F; B [] P-r-7, 8 t, t-9, c-10-tetrahydrotetrol (B P-tetraol-1 [a])], &#xBC0F; AKRs (B P-7 [a]8 dione) &#xD0D0;&#xC9C0; &#xB418; &#xACE0; &#xC778;&#xB77C;&#xC778; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xB2E4;&#xC774;&#xC624;&#xB4DC; &#xBC30;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xBC29;&#xC0AC;&#xB2A5; &#xD0D0;&#xC9C0; RP HPLC&#xB85C; &#xC815;&#xB7C9; &#xACE0; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;-&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS LC)&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C4;&#xD589; &#xACE1;&#xC120; B [a] P-7, 8-&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-dihydrodiol, B [a] P-tetraol-1, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; B [a] P-7, 8-&#xB514;&#xC624;&#xB124; &#xC774;&#xC0C1; 24 h. &#xBD81;&#xBD80; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;&#xB294; [a] B P &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD; &#xB798;&#xADF8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; H358 &#xC140;&#xC5D0; P4501B1 &#xBC0F; AKR1C isoforms &#xC720;&#xBC1C; 3-hydroxy-B [a] P&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB798;&#xADF8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. 10 NM 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-&#xB2E4;&#xC774;&#xC625;&#xC2E0; (&#xC99D;&#xB300;)&#xC640; H358 &#xC140;&#xC758; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB798;&#xADF8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; B P [a]&#xC640; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD56D;&#xBCF5; &#xAC19;&#xC740; B P &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; [a], &#xAC1C;&#xBCC4; metabolites&#xC758; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC608;&#xC678;&#xB294; B [a] P-3, 6-&#xB514;&#xC624;&#xB124; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC640; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xC99D;&#xB300;, &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; p4501a1&#xB3C4; 1B1 &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xB798;&#xADF8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB294; &#xD6C4;&#xBCF4; peroxidases PGH synthases &#xBC0F; uninduced P450 isoforms &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; P4501A1/1B1 &#xBC0F; AKR &#xACBD;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC5C6;&#xC74C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xAC01; PAH &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACBD;&#xB85C; H358 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xAC01; &#xD1B5;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC554; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;-&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; bronchoalveolar H358 &#xC140;&#xC5D0; [a] benzo pyrene&#xC758; &#xB300;&#xC0AC;.

El benzo [a] pireno (B [a] P), un representante de hidrocarburos arom&#xE1;ticos polic&#xED;clicos (HAP), es metab&#xF3;licamente activa por tres v&#xED;as enzim&#xE1;ticas: por peroxidasas (por ejemplo, peroxidasa del citocromo P450), para dar cationes radicales, por P4501A1/1B1 monooxigenaci&#xF3;n y hidrolasa ep&#xF3;xido para dar ep&#xF3;xidos diol, y por P4501A1/1B1 monooxigenaci&#xF3;n, hidrolasa ep&#xF3;xido, y aldo-ceto reductasas (AKRs) para dar O-quinonas. En los seres humanos, un sitio de mayor exposici&#xF3;n a los HAP humo ambiental del tabaco, y es el pulm&#xF3;n, sin embargo, el perfil de B [a] P metabolitos formados en este sitio no ha sido bien caracterizado. En este estudio, humanos broncoalveolar H358 c&#xE9;lulas fueron expuestas a B [a] P, y los metabolitos generados por la peroxidasa (B [a] P-1, 6 - y B [a] P-3 ,6-dionas), de la citocromo P4501A1 / monooxigenaci&#xF3;n 1B1 [3-hidroxi-B [a] P, B [a] P-7, 8 - y el 9,10 - Trans-dihydrodiols, y B [a] P-R-7, T-8, T- 9, C-10-tetrahydrotetrol (B [a] P-tetraol-1)], y de AKRs (B [a] P-7 ,8-diona) fueron detectados y cuantificados por RP-HPLC, con una fotograf&#xED;a en l&#xED;nea -arreglo de diodos y detecci&#xF3;n radiom&#xE9;trica, e identificados por cromatograf&#xED;a l&#xED;quida-espectrometr&#xED;a de masas (LC-MS). Curvas de progreso mostr&#xF3; una fase de retraso en la formaci&#xF3;n de 3-hidroxi-B [a] P, B [a] P-7, 8 - trans-dihidrodiol, B [a] P-tetraol-1 y B [a] P -7,8-diona en 24 h. Blot del Norte mostr&#xF3; que el B [a] P inducida P4501B1 y las isoformas AKR1C en H358 c&#xE9;lulas de una manera dependiente del tiempo, proporcionando una explicaci&#xF3;n de la fase de latencia. El pretratamiento de las c&#xE9;lulas H358 con 10 nM 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) elimin&#xF3; esta fase de latencia, pero no alter&#xF3; los niveles de los metabolitos individuales observados, lo que sugiere que la inducci&#xF3;n tanto de B [a] P y TCDD en &#xFA;ltima instancia, dar la misma B [a] P perfil metab&#xF3;lico. La &#xFA;nica excepci&#xF3;n fue el B [a] P-3 ,6-diona que se form&#xF3; sin una fase de latencia en ausencia y presencia de TCDD, lo que sugiere que la peroxidasa responsable de su formaci&#xF3;n no era ni P4501A1 ni 1B1. Peroxidasas candidatos que quedan son sintasas PGH y no inducidas isoformas del citocromo P450. Este estudio muestra que las v&#xED;as P4501A1/1B1 y AKR son inducibles en las c&#xE9;lulas pulmonares humanas, y que la v&#xED;a de la peroxidasa no lo era. Tambi&#xE9;n proporciona evidencia de que cada una de las v&#xED;as de activaci&#xF3;n de HAP produce sus metabolitos distintivos en H358 c&#xE9;lulas pulmonares humanas, y que cada v&#xED;a puede contribuir al proceso carcinog&#xE9;nico.

El metabolismo del benzo [a] pireno en los humanos broncoalveolar H358 c&#xE9;lulas por medio de cromatograf&#xED;a l&#xED;quida-espectrometr&#xED;a de masas

&#x5728;&#x85AA;&#x91D1;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2D;&#x516C;&#x5F00;&#x7684;&#x4E0D;&#x5E73;&#x7B49;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;

Inequities exposed in salary survey.

In&eacute;galit&eacute;s expos&eacute;es dans l&#39;enqu&ecirc;te sur les salaires.

Ungerechtigkeiten in Gehaltsumfrage verf&uuml;gbar gemacht werden.

Ingiustizie esposte nell&#39;indagine di stipendio.

&#x7D66;&#x4E0E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E0D;&#x5E73;&#x7B49;&#x3002;

&#xBD88;&#xD3C9;&#xB4F1; &#xAE09;&#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Desigualdades expuestas en el estudio de sueldos.

&#x73AF;&#x5883;&#x81F4;&#x764C;&#x7269;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5982;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x70C3; (PAHs)&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5BF9; DNA &#x6D3B;&#x6027;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x5316;&#x65BD;&#x52A0;&#x5176;&#x81F4;&#x7624;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298; &#xFF08;B[a]P)&#xFF0C;&#x539F;&#x578B;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x9999;&#x70C3;&#xFF0C;&#x4F1A;&#x7531;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x4EE3;&#x8C22; (p450 &#x6C27;&#x5316;) 1A1/1B1 &#x548C;&#x73AF;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x5BF9; (-)-B[a]P-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol)&#x3002;B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#x6C22;&#x4E8C;&#x7136;&#x540E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7ECF;&#x5386;&#x5230;&#x6700;&#x7EC8;&#x7684;&#x81F4;&#x764C;&#x7269;&#xFF0C;P4501A1 1B1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4EE3;&#x8C22; (+)-anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B[a]PDE)&#xFF0C;&#x6784;&#x6210; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E0E; 2&#39;-&#x8131;&#x6C27; (dGuo) &#x5411;&#x7A97;&#x4F53; (+)-&#x53CD;-&#x8DE8;-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; N 2-dGuo (B[a]PDE-dGuo) &#x7684; DNA&#x3002;2,378-&#x56DB;-p-&#x4E8C;&#x6076;&#x82F1; (&#x5B50;&#x9F20;) &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x82B3;&#x9999;&#x70C3;&#x53D7;&#x4F53; (AhR) &#x9014;&#x5F84; P4501A1/1B1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x5C06;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; dGuo &#x5F62;&#x6210;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5B50;&#x9F20; H358 &#x80BA;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ADF;&#x7136;&#x9020;&#x6210;&#x51CF;&#x5C11; (-)-B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#x6C22;&#x4E8C;&#x4ECB;&#x5BFC; (+)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; dGuo &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x975E;&#x5B50;&#x9F20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;(&plusmn;) &#x5B50;&#x9F20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11; (+)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; dGuo &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x975E;&#x5B50;&#x9F20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x4E0A;&#x8C03;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8DEF;&#x5DF2;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684;&#x6392;&#x6BD2;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790; B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; dGuo &#x548C; B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;-&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-&#x52A0;&#x5408; H358 &#x80BA;&#x548C;&#x809D;&#x7684; HepG2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6709;&#x4E86;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0; (-)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;-&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-&#x52A0;&#x5408;&#x9AD8;&#x5BF9;&#x6620;&#x4F53;&#x8FC7;&#x91CF;&#x81F4;&#x5B50;&#x9F20; H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; (&plusmn;) &#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x4E0E;-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;&#x4E0E; noninduced &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E3A;&#x4EC0;&#x4E48;&#x589E;&#x52A0;&#x6FC0;&#x6D3B; (-)-B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#x6C22;&#x4E8C;&#x901A;&#x8FC7; P4501A1/1B1 &#x5B50;&#x9F20;&#x4E0A;&#x8C03;&#x4E0D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0; (+)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; dGuo &#x52A0;&#x5408;&#x7269; H358 &#x80BA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B50;&#x9F20;&#x786E;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x4FC3;&#x4F7F; B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;-&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-&#x52A0;&#x5408; HepG2 &#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;(&plusmn;)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;-&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-&#x52A0;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x8F83;&#x591A;&#x4F4E;&#x7EA7;&#x522B;&#x5B50;&#x9F20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C; noninduced HepG2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4; (-)-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;-&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-&#x52A0;&#x5408; H358 &#x80BA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x8FD9;&#x5C06;&#x786E;&#x5B9A;&#x591A;&#x5C11; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x53D1;&#x751F;&#x4E0E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x6212;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x80BA;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684; B [a] P &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5FAE;&#x5999;&#x5E73;&#x8861;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;

2,378-&#x56DB;-p-&#x4E8C;&#x6076;&#x82F1;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BA;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298;&#x4ECB;&#x5BFC; DNA-&#x548C;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-&#x52A0;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

Environmental carcinogens, such as polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), require metabolic activation to DNA-reactive metabolites in order to exert their tumorigenic effects. Benzo[a]pyrene (B[a]P), a prototypic PAH, is metabolized by cytochrome P450 (P450) 1A1/1B1 and epoxide hydrolase to (-)-B[a]P-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol). B[a]P-7,8-dihydrodiol then undergoes further P4501A1/1B1-mediated metabolism to the ultimate carcinogen, (+)-anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B[a]PDE), which forms DNA-adducts primarily with 2'-deoxyguanosine (dGuo) to form (+)-anti-trans-B[a]PDE-N(2)-dGuo (B[a]PDE-dGuo) in DNA. Pretreatment of cells with 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) is known to induce P4501A1/1B1 mRNA expression through the aryl hydrocarbon receptor (AhR) pathway. This causes increased B[a]PDE-dGuo formation in liver cells. In contrast, TCDD induction of H358 lung cells surprisingly caused a decrease in (-)-B[a]P-7,8-dihydrodiol-mediated (+)-B[a]PDE-dGuo adduct formation when compared with the non-TCDD-induced cells. Furthermore, treatment of the TCDD-induced cells with (Â±)-B[a]PDE also resulted in decreased (+)-B[a]PDE-dGuo adduct formation when compared with the non-TCDD-induced cells. These data suggested that it was a detoxification pathway that had been up-regulated rather than an activation pathway that had been down-regulated. LC-MS was used to analyze B[a]PDE-dGuo and B[a]PDE-GSH-adducts in H358 lung and HepG2 liver cells. There was a significant increase in the (-)-B[a]PDE-GSH-adduct with high enantiomeric excess after treatment of the TCDD-induced H358 cells with (Â±)-B[a]PDE when compared with the noninduced cells. This could explain why increased activation of (-)-B[a]P-7,8-dihydrodiol through TCDD up-regulation of P4501A1/1B1 did not lead to increased (+)-B[a]PDE-dGuo adducts in the H358 lung cells. In addition, TCDD did not induce B[a]PDE-GSH-adduct formation in HepG2 liver cells. (Â±)-B[a]PDE-GSH-adducts were formed at much lower levels in both TCDD-induced and noninduced HepG2 cells when compared with (-)-B[a]PDE-GSH-adducts in the H358 lung cells. Therefore, our study has revealed that there is a subtle balance between activation and detoxification of B[a]P in lung-derived compared with liver-derived cells and that this determines how much DNA damage occurs.

Regulation of benzo[a]pyrene-mediated DNA- and glutathione-adduct formation by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in human lung cells.

L&#x26;#39;environnement des agents canc&#xE9;rig&#xE8;nes, tels que les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP), n&#xE9;cessitent une activation m&#xE9;tabolique &#xE0; l&#x26;#39;ADN-m&#xE9;tabolites r&#xE9;actifs afin d&#x26;#39;exercer leurs effets tumorig&#xE8;nes. Benzo [a] pyr&#xE8;ne (B [a] P), un HAP prototypique, est m&#xE9;tabolis&#xE9; par le cytochrome P450 (P450) 1A1/1B1 et &#xE9;poxyde hydrolase &#xE0; (-)-B [a] P-7 ,8-dihydro-7, 8-diol (B [a] P-7 ,8-dihydrodiol). B [a] P-7 ,8-dihydrodiol subit ensuite un m&#xE9;tabolisme suppl&#xE9;mentaire P4501A1/1B1-mediated &#xE0; l&#x26;#39;agent canc&#xE9;rig&#xE8;ne ultime, (+)-anti-7 ,8-dihydroxy-9 ,10-&#xE9;poxy-7, 8,9,10 -t&#xE9;trahydro-B [a] P (B [a] PDE), qui forme ADN-adduits principalement 2&#x26;#39;-d&#xE9;soxyguanosine (dGuo) pour former (+)-trans-anti-B [a] PDE-N (2) -dGuo (B [a] de la PDE-dGuo) dans l&#x26;#39;ADN. Le pr&#xE9;traitement des cellules avec la 2,3,7,8-t&#xE9;trachlorodibenzo-p-dioxine (TCDD) est connue pour induire l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;ARNm P4501A1/1B1 &#xE0; travers le r&#xE9;cepteur aryl-hydrocarbone (AhR) voie. Ceci provoque une augmentation de B [a] de la PDE-dGuo formation dans les cellules h&#xE9;patiques. En revanche, l&#x26;#39;induction de la TCDD H358 cellules pulmonaires &#xE9;tonnamment entra&#xEE;n&#xE9; une baisse de (-)-B [a] P-7 ,8-dihydrodiol m&#xE9;diation (+)-B [a] la formation d&#x26;#39;adduits de la PDE-dGuo par rapport &#xE0; la non- TCDD cellules induites. En outre, le traitement des cellules induites par la TCDD avec (&#xB1;)-B [a] PDE a &#xE9;galement entra&#xEE;n&#xE9; une diminution de (+)-B [a] la formation d&#x26;#39;adduits de la PDE-dGuo par rapport aux cellules non-TCDD-induites. Ces donn&#xE9;es ont sugg&#xE9;r&#xE9; que c&#x26;#39;&#xE9;tait une voie de d&#xE9;sintoxication qui avait &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la hausse plut&#xF4;t que d&#x26;#39;une voie d&#x26;#39;activation qui avait &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la baisse. LC-MS a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour analyser le B [a] de la PDE-dGuo et B [a] de la PDE-GSH-adduits &#xE0; H358 du poumon et du foie HepG2 cellules. Il y avait une augmentation significative de la (-)-B [a] de la PDE-GSH-adduit avec un exc&#xE8;s &#xE9;nantiom&#xE9;rique &#xE9;lev&#xE9; apr&#xE8;s le traitement des H358 TCDD cellules induites &#xE0; (&#xB1;)-B [a] PDE en comparaison avec les cellules non induites. Cela pourrait expliquer pourquoi l&#x26;#39;activation accrue de (-)-B [a] P-7 ,8-dihydrodiols par TCDD up-r&#xE9;gulation de la P4501A1/1B1 n&#x26;#39;a pas conduit &#xE0; augmenter (+)-B [a] de la PDE-dGuo adduits &#xE0; l&#x26;#39; H358 cellules pulmonaires. En outre, la TCDD n&#x26;#39;a pas induit de B [a] de la PDE-GSH la formation d&#x26;#39;adduits dans les cellules HepG2 foie. (&#xB1;)-B [a] de la PDE-GSH-adduits ont &#xE9;t&#xE9; form&#xE9;s &#xE0; des niveaux beaucoup plus faibles dans les deux TCDD-induite et non induites cellules HepG2 par rapport &#xE0; (-)-B [a] de la PDE-GSH-adduits dans les cellules pulmonaires H358. Par cons&#xE9;quent, notre &#xE9;tude a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; qu&#x26;#39;il existe un &#xE9;quilibre subtil entre l&#x26;#39;activation et la d&#xE9;toxication de B [a] P dans le poumon-foie d&#xE9;riv&#xE9;e par rapport &#xE0; des cellules d&#xE9;riv&#xE9;es et que ce qui d&#xE9;termine combien de dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN se produit.

R&#xE8;glement du benzo [a] pyr&#xE8;ne-m&#xE9;diation de l&#x26;#39;ADN et la formation d&#x26;#39;adduits glutathion par la 2,3,7,8-t&#xE9;trachlorodibenzo-p-dioxine dans les cellules pulmonaires humaines

Karzinogene widmen, wie polyzyklische aromatische Kohlenwasserstoffe (PAK), erfordern Stoffwechselaktivierung zu DNA-reaktive Metaboliten, um ihre tumorigenic Wirkung aus&uuml;ben. Benzo [a] pyren (B[a]P), eine prototypische PAH, ist von Cytochrom P450 metabolisiert (P450) 1A1/1B1 und Epoxid-Hydrolase, (-)-B[a]P-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol). B [a] P-7,8-Dihydrodiol erf&auml;hrt dann weiter P4501A1/1B1-vermittelten Metabolismus zu dem ultimativen karzinogen (+)-anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B[a]PDE), die DNA-Addukte bildet in erster Linie mit 2&#39;-Pentanatriumtriphosphat (dGuo) Formular (+)-Anti-Trans-B [a] PDE-N 2-dGuo (B[a]PDE-dGuo) in DNA. Vorbehandlung der Zellen mit 2.378-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin (TCDD) ist bekannt, dass durch die Aryl-Kohlenwasserstoff-Rezeptor (AhR)-Pathway P4501A1/1B1 mRNA Ausdruck zu induzieren. Dies bewirkt erh&ouml;hte B [a] PDE-dGuo-Bildung in Leberzellen. Im Gegensatz dazu verursacht TCDD Induktion von H358 Lungenzellen &uuml;berraschend einen R&uuml;ckgang (-)-B [a] P-7,8-Dihydrodiol-vermittelter (+)-B [a] PDE-dGuo-Addukt-Bildung im Vergleich mit den nicht-TCDD-induzierte Zellen. Au&szlig;erdem Behandlung der TCDD-induzierte Zellen mit (&plusmn;)-B [a] PDE f&uuml;hrte auch zu verminderter (+)-B [a] PDE-dGuo-Addukt-Bildung im Vergleich mit den nicht-TCDD-induzierte Zellen. Diese Daten vorgeschlagen, dass es eine Entgiftung Weg war, die oben geregelt werden, anstatt eine Aktivierung Weg gewesen, die unten-geregelt worden. LC-MS wurde zur B [a] PDE-dGuo und B [a] PDE-GSH-Addukte in H358 Lunge und Leber HepG2-Zellen zu analysieren. Gab es ein deutlichen Anstieg der (-)-B [a] PDE-GSH-Addukt mit hohem Enantiomeren&uuml;berschuss nach Behandlung der TCDD-induzierte H358 Zellen mit (&plusmn;)-B [a] PDE im Vergleich mit den noninduced Zellen. Dies k&ouml;nnte erkl&auml;ren, warum erh&ouml;hte Aktivierung (-)-B [a] P-7,8-Dihydrodiol durch TCDD bis-Regelung der P4501A1/1B1 f&uuml;hrten nicht zu erh&ouml;hten (+)-B [a] PDE-dGuo in den Lungenzellen H358 Addukte. Dar&uuml;ber hinaus TCDD nicht B [a] PDE-GSH-Addukt-Bildung in der Leber HepG2-Zellen induzieren. (&plusmn;)-B [a] PDE-GSH-Addukte bildeten sich bei wesentlich geringeren Mengen in TCDD induziert und noninduced HepG2-Zellen mit (-) im Vergleich-B [a] PDE-GSH-Addukte in die H358 Lungenzellen. Daher hat unsere Studie ergab, dass es eine subtile Balance zwischen Aktivierung und Entgiftung von B [a] P in die Lunge abgeleitete mit Leber-abgeleitete Zellen verglichen und, dass dies bestimmt, wie viel DNA-Schaden eintritt.

Verordnung von Benzo [a] pyren-vermittelte DNA - und Glutathion-Addukt-Bildung von 2.378-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin in menschliche Lungenzellen.

Agenti cancerogeni ambientali, quali gli idrocarburi policiclici aromatici (IPA), richiedono l&#39;attivazione metabolica a metaboliti reattivi del DNA al fine di esercitare i loro effetti cancerogeni. Benzo [a] pirene (B[a]P), un PAH prototipiche, viene metabolizzato dal citocromo P450 (P450) 1A1/1B1 ed epossido idrolasi a (-)-B[a]P-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol). B [a] P--diidrodiolo poi subisce ulteriore metabolismo P4501A1/1B1-mediato per la ultimate cancerogeno, (+)-anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B[a]PDE), che forma addotti del DNA principalmente con 2&#39;--deossiguanosina (dGuo) alla forma (+) anti-trans-B [a] PDE-N (2)-dGuo (B[a]PDE-dGuo) nel DNA. Pretrattamento delle cellule con 2.378-tetraclorodibenzo-p-diossina (TCDD) &egrave; noto per indurre l&#39;espressione del mRNA P4501A1/1B1 attraverso il pathway del recettore (AhR) di idrocarburi arilici. Questo provoca aumento B [a] formazione PDE-dGuo nelle cellule del fegato. Al contrario, induzione di TCDD delle cellule polmonari H358 sorprendentemente ha causato una diminuzione (-)-B [a] P-7,8-diidrodiolo-mediata (+)-B [a] PDE-dGuo addotto formazione rispetto alle cellule non-TCDD-indotta. Inoltre, trattamento delle cellule indotta da TCDD con (&plusmn;)-PDE B [a] ha portato anche in diminuzione (+)-B [a] PDE-dGuo addotto formazione rispetto alle cellule non-TCDD-indotta. Questi dati suggerirono che si trattava di un percorso di disintossicazione che era stato up-regolato piuttosto che un percorso di attivazione che era stato down-regolato. LC-MS &egrave; stato utilizzato per analizzare B [a] dGuo PDE e B [a] PDE-GSH-addotti nel polmone H358 e cellule HepG2 fegato. C&#39;&egrave; stato un aumento significativo (-)-B [a] PDE-GSH-addotto con eccesso enantiomeric alta dopo il trattamento delle cellule indotta da TCDD H358 con (&plusmn;)-PDE B [a] se confrontato con le cellule noninduced. Questo potrebbe spiegare perch&eacute; aumentata attivazione di (-)-B [a] P--diidrodiolo attraverso TCDD up-regulation di P4501A1/1B1 non ha portato all&#39;aumento (+)-B [a] PDE-dGuo addotti nelle cellule polmonari H358. Inoltre, TCDD non ha indotto la formazione B [a] PDE-GSH-addotto in cellule HepG2 fegato. (&plusmn;)-B [a] PDE-GSH-addotti sono stati formati a livelli notevolmente inferiori nelle cellule HepG2 indotta da TCDD e noninduced quando confrontato con (-)-B [a] PDE-GSH-addotti nelle cellule polmonari H358. Pertanto, il nostro studio ha rivelato che c&#39;&egrave; un sottile equilibrio tra attivazione e disintossicazione di B [a] P nel polmone-derivata rispetto a cellule derivate dal fegato e che ci&ograve; determina quanti danni del DNA si verificano.

Regolamento del benzo [a] pirene-mediata del DNA e glutatione-addotti formazione da 2.378-tetraclorodibenzo-p-diossina in cellule polmonari umane.

&#x74B0;&#x5883;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x591A;&#x74B0;&#x5F0F;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x70AD;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#xFF08;PAHs&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x767A;&#x304C;&#x3093;&#x6027;&#x7269;&#x8CEA;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x5F62;&#x6210;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;DNA-&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#xFF08;B [1] P&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x578B;&#x306E;PAH&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;P450&#xFF08;P450&#xFF09;1A1/1B1&#x3068;&#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#xFF08; - &#xFF09;-B [1] P--7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-7&#x3001; 8  - &#x30B8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#xFF09;&#x3002; B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x7A76;&#x6975;&#x767A;&#x764C;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;P4501A1/1B1-mediated&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;-7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9,10  - &#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;-7&#x3001;8,9,10&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-B [1] P&#xFF08;B [a]&#x306E;PDE&#xFF09;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;dGuo&#xFF09;2&#x26;#39;-&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-N&#xFF08;2&#xFF09; DNA&#x5185;&#x306E;dGuo&#xFF08;B [1] PDE-dGuo&#xFF09;&#x3002; 2,3,7,8  - &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B8;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;-p-&#x30C0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;TCDD&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x304C;&#x30A2;&#x30EA;&#x30FC;&#x30EB;&#x70AD;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;AhR&#xFF09;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;P4501A1/1B1 mRNA&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x306F;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;B [1] PDE-dGuo&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;H358&#x80BA;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;TCDD&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;-B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x5A92;&#x4ECB;&#xFF08;+&#xFF09;-B [1] PDE-dGuo&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x975E;TCDD&#x8A98;&#x5C0E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;TCDD&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#xFF08;&#xB1;&#xFF09;-B [A] PDE&#x3067;&#x3082;&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;-B [1]&#x975E;TCDD&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;PDE-dGuo&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x89E3;&#x6BD2;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002; LC-MS&#x306F;&#x3001;H358&#x80BA;&#x764C;&#x3068;HepG2&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;B [1] PDE-dGuo&#x3068;B [1] PDE-GSH-&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x306E;TCDD&#x8A98;&#x767A;&#x6027;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x93E1;&#x50CF;&#x4F53;&#x904E;&#x5270;&#x7387;&#x3067;-B [1] PDE-GSH-&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#xFF08;&#xB1;&#xFF09;-B [a]&#x3092;&#x975E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PDE&#x3002;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x7406;&#x7531;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF08; - &#xFF09;&#x3067;-B [A] P4501A1/1B1&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;TCDD&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-B [1] PDE-dGuo&#x4ED8;&#x52A0;H358&#x80BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;TCDD&#x306F;&#x3001;HepG2&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;B [1] PDE-GSH-&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;H358&#x80BA;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;-B [A] PDE-GSH-&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#xFF08;&#xB1;&#xFF09;-B [A] PDE-GSH-&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;TCDD&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x3068;&#x975E;&#x8A98;&#x5C0E;HepG2&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;B&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x200B;&#x200B;&#x3068;&#x89E3;&#x6BD2;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5FAE;&#x5999;&#x306A;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3069;&#x306E;&#x304F;&#x3089;&#x3044;&#x304B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;[1] P&#x3001;&#x80BA;&#x7531;&#x6765;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3; - &#x5A92;&#x4ECB;DNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;&#x80BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;2,3,7,8  - &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B8;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;-p-&#x30B8;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;

Polycyclic &#xC544;&#xB85C;&#xB9C8; &#xD0C4; &#xD654; &#xC218;&#xC18C; (PAHs) &#xAC19;&#xC740; &#xD658;&#xACBD; &#xBC1C;&#xC554; &#xBB3C;&#xC9C8; tumorigenic &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC1C;&#xD718; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; DNA &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. [A] pyrene Benzo (B[a]P), prototypic PAH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 &#xB300;&#xC0AC; (P450) 1A1/1B1 &#xBC0F; &#xC5D0;&#xD3ED;&#xC2DC; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; (-)-B[a]P-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol). B P 7, 8 dihydrodiol [a]&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB354; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C;&#xC554; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC0AC; P4501A1/1B1-&#xC911;&#xC7AC; &#xC218;&#xD589; (+)-anti-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (B[a]PDE), 2&#39;-deoxyguanosine (dGuo) &#xD3FC; (+)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC8FC;&#xB85C; DNA &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131;-&#xC548;&#xD2F0;-&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-B PDE N [a] (2)-dGuo (B[a]PDE-dGuo) DNA&#xC5D0;&#xC11C;. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-&#xB2E4;&#xC774;&#xC625;&#xC2E0; (&#xC99D;&#xB300;)&#xC640; &#xC140;&#xC758; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC; aryl &#xD0C4; &#xD654; &#xC218;&#xC18C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (a h r) &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; P4501A1/1B1 mRNA &#xC2DD; &#xC720;&#xB3C4; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xAC04;&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; [a] PDE-dGuo &#xD615;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; B &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, H358 &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; &#xC758;&#xC678;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; (-)&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;-B [a] P 7, 8 dihydrodiol &#xC911;&#xC7AC; (+)-B [a] PDE dGuo adduct &#xD615;&#xC131; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xC744; &#xB54C;. &#xB610;&#xD55C;, (&plusmn;)&#xB85C; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;-B [a] PDE &#xB610;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; (+) &#xACB0;&#xACFC;-B [a] PDE dGuo adduct &#xD615;&#xC131; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xC744; &#xB54C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC544;&#xB798;&#xB85C; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC5C5; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418;&#xC5B4; &#xD574;&#xB3C5; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB77C;&#xACE0; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. LC MS B [a] PDE-dGuo &#xBC0F; B H358 &#xD3D0;&#xC640; &#xAC04; HepG2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; [a] PDE-GSH-&#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. (-)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;-&#xB192;&#xC740; enantiomeric &#xCD08;&#xACFC; (&plusmn;)&#xB85C; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; H358 &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; [a] PDE-GSH-adduct B-B [a] PDE noninduced &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. &#xC774; &#xC774;&#xC720;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC99D;&#xAC00; (-)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;-B P-7, 8-dihydrodiol [a] P4501A1/1b1&#xC758; &#xC99D;&#xB300; &#xC5C5; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; (+)&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;-B [a] PDE dGuo H358 &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC99D;&#xB300; &#xAC04; HepG2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; B [a] PDE-GSH-adduct &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. (&plusmn;)-B [a] PDE-GSH-&#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xC99D;&#xB300; &#xC720;&#xB3C4; noninduced HepG2 &#xC138;&#xD3EC; (-)&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558;&#xBA74; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;-[a] PDE-GSH-&#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; H358 &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; B. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xD574;&#xB3C5; &#xD3D0; &#xD30C;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; [a] B p &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBBF8;&#xBB18;&#xD55C; &#xADE0;&#xD615;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC04; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC140;&#xACFC; &#xACB0;&#xC815;&#xC774; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xB9CE;&#xC740; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC740; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;.

[A] benzo pyrene &#xC911;&#xC7AC; DNA-&#xBC0F; glutathione-adduct &#xD615;&#xC131; 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-&#xB2E4;&#xC774;&#xC625;&#xC2E0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD3D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;.

Carcin&#xF3;genos ambientales, tales como hidrocarburos arom&#xE1;ticos polic&#xED;clicos (HAP), requieren la activaci&#xF3;n metab&#xF3;lica de reactivos con el DNA metabolitos con el fin de ejercer sus efectos tumorig&#xE9;nicos. El benzo [a] pireno (B [a] P), un PAH protot&#xED;pico, es metabolizado por el citocromo P450 (P450) y 1A1/1B1 ep&#xF3;xido hidrolasa de (-)-B [a] P-7 ,8-dihidro-7, 8-diol (B [a] P-7 ,8-dihidrodiol). B [a] P-7 ,8-dihidrodiol continuaci&#xF3;n sufre metabolismo m&#xE1;s P4501A1/1B1-mediated al carcin&#xF3;geno &#xFA;ltimo, (+)-contra-7 ,8-dihidroxi-9 ,10-epoxi-7, 8,9,10 -tetrahidro-B [a] P (B [a] PDE), que forma aductos de ADN sobre todo con 2&#x26;#39;-desoxiguanosina (dGuo) para formar (+)-contra-trans-B [a] de la PDE-N (2) -dGuo (B [a] de la PDE-dGuo) en el ADN. El pretratamiento de las c&#xE9;lulas con la 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD), se sabe que inducen la expresi&#xF3;n del ARNm P4501A1/1B1 a trav&#xE9;s del receptor de aril hidrocarburos (AHR) y la v&#xED;a. Esto provoca un aumento de B [a] de la PDE-dGuo formaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas del h&#xED;gado. En contraste, la inducci&#xF3;n de TCDD H358 c&#xE9;lulas pulmonares sorprendentemente caus&#xF3; una disminuci&#xF3;n en (-)-B [a] P-7 ,8-dihidrodiol mediada (+)-B [a] la PDE-dGuo formaci&#xF3;n de aductos en comparaci&#xF3;n con la no- TCDD inducida por las c&#xE9;lulas. Adem&#xE1;s, el tratamiento de las c&#xE9;lulas inducidas con TCDD (&#xB1;)-B [a] PDE tambi&#xE9;n result&#xF3; en disminuci&#xF3;n (+)-B [a] la PDE-dGuo formaci&#xF3;n de aductos en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas no-TCDD inducidas. Estos datos sugirieron que era una v&#xED;a de desintoxicaci&#xF3;n que hab&#xED;a sido regulado hasta en lugar de una v&#xED;a de activaci&#xF3;n que hab&#xED;a sido regulados. LC-MS se utiliz&#xF3; para analizar el B [a] de la PDE-dGuo y B [a] de la PDE-aductos de GSH-H358 en los pulmones y las c&#xE9;lulas del h&#xED;gado HepG2. Hubo un aumento significativo en la (-)-B [a] la PDE-AAG-aducto con exceso enantiom&#xE9;rico de alta despu&#xE9;s del tratamiento de las TCDD inducidas H358 c&#xE9;lulas con (&#xB1;)-B [a] PDE en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas noninduced. Esto podr&#xED;a explicar por qu&#xE9; la mayor activaci&#xF3;n de (-)-B [a] P-7 ,8-TCDD dihidrodiol trav&#xE9;s de la regulaci&#xF3;n de P4501A1/1B1 no dio lugar a un aumento (+) de B [a] de la PDE-dGuo aductos en el H358 c&#xE9;lulas del pulm&#xF3;n. Adem&#xE1;s, la TCDD no indujo B [a] de la PDE-GSH-aducto de la formaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas HepG2 h&#xED;gado. (&#xB1;)-B [a] de la PDE-GSH-aductos se forman en niveles mucho m&#xE1;s bajos, tanto en la TCDD inducida y noninduced c&#xE9;lulas HepG2 en comparaci&#xF3;n con (-)-B [a] de la PDE-GSH-aductos en las c&#xE9;lulas del pulm&#xF3;n H358. Por lo tanto, nuestro estudio ha revelado que existe un equilibrio sutil entre la activaci&#xF3;n y desintoxicaci&#xF3;n de B [a] P en el pulm&#xF3;n derivado de derivados en comparaci&#xF3;n con el h&#xED;gado, las c&#xE9;lulas y que esto determina la cantidad de da&#xF1;o del ADN se produce.

Reglamento de benzo [a] pireno mediada por el ADN y Formaci&#xF3;n glutati&#xF3;n-aducto por 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina en c&#xE9;lulas pulmonares humanas

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (&#x7814;&#x7A76;) &#x662F;&#x70DF;&#x8349;&#x70D8;&#x70E4;&#x540E;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x81F4;&#x764C;&#x7269;&#x8D28;&#x4E9A;&#x785D;&#x80FA;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x70DF;&#x8349;&#x70DF;&#x96FE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x80BA;&#x91CC;&#x7ECF;&#x5386;&#x5230; 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) &#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3002;NNAL &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7ECF;&#x5386;&#x5C3F;&#x82F7;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x679C;&#x7CD6;&#x919B; &#xFF08;UGT&#xFF09;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6765;&#x7ED9;&#x8461;&#x7CD6;&#x82F7; N-&#x548C; O-&#x9178;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E0E;&#x81EA;&#x7531; &#xFF08;&#x975E;&#x5171;&#x8F6D;&#xFF09; NNAL &#x7136;&#x540E;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x6392;&#x51FA;&#x3002;&#x8FDB;&#x884C;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x548C;&#x5171;&#x8F6D; NNAL &#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x80FD;&#x529B;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x80BA;&#x764C;&#x98CE;&#x9669;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x9999;&#x70DF;&#x70DF;&#x96FE;&#x7684;&#x4E2A;&#x4F53;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x91C7;&#x7528;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x7A00;&#x91CA; (SID) &#x65B9;&#x6CD5;&#x591A;&#x53CD;&#x5E94;&#x76D1;&#x6D4B;/&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (LC/MRM-MS) &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6700;&#x9AD8;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x6790;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x65B0;&#x578B;&#x884D;&#x751F;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4; pre-ionized N-&#x4E19;&#x57FA;-NNAL &#x5BFC;&#x6570;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x5F15;&#x8D77;&#x6B64;&#x884D;&#x751F;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;/&#x8D28;&#x8C31;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x7684;&#x63D0;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x80FD;&#x591F;&#x5206;&#x6790;&#x514D;&#x8D39; NNAL &#x4EC5; 0.25 &#x6BEB;&#x5347;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x5C3F;&#x91CF;&#x65F6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5236;&#x5B9A;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x5E2E;&#x52A9;&#x4FDD;&#x6301;&#x6301;&#x7EED;&#x5BF9;&#x7EB5;&#x5411;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x7814;&#x7A76;&#x4ECE;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x5B58;&#x50A8;&#x7684;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x65B0;&#x7684;&#x9AD8;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x7684; SID LC MRM &#x8D28;&#x8C31;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x88AB;&#x53D7;&#x96C7;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x81EA;&#x7531;&#x548C;&#x5171;&#x8F6D; NNAL 60 &#x4E2A;&#x4EBA;&#x65E0;&#x75C5;&#x5438;&#x70DF;&#x8005;&#x5C3F;&#x6DB2;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x542B;&#x91CF;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x5728;&#x5C3F;&#x808C;&#x9150; NNAL &#x6D53;&#x5EA6;&#x4E2A;&#x4F53;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x548C;&#x5C3F; NNAL &#x6444;&#x53D6;/&#x514D;&#x8D39; NNAL &#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x7531; 60 &#x79D1;&#x76EE;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E09;&#x4E2A; metabolizer &#x578B;&#x3002;&#x5DEE;&#x5FEB;&#x6162; (PMs&#xFF0C;14 &#x79D1;&#x76EE;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x7387;&#x4E3A; NNAL &#x6444;&#x53D6;/&#x514D;&#x8D39; NNAL &lt; 2 &#xFF08;&#x610F;&#x5473;&#x7740; = 1.3)&#xFF0C;&#x4E2D;&#x7EA7;&#x5FEB;&#x6162; &#xFF08;IMs&#xFF0C;36 &#x79D1;&#x76EE;&#xFF09; 2 &#x548C; 5 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387; &#xFF08;&#x610F;&#x5473;&#x7740; = 3.4)&#xFF0C;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5FEB;&#x6162; &#xFF08;EMs&#xFF0C;10 &#x79D1;&#x76EE;&#xFF09; &#x6BD4; &gt; 5 &#xFF08;&#x610F;&#x5473;&#x7740; = 11.1)&#x3002;

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) &#x5C3F;&#x4E2D;&#x65B0;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;/&#x8D28;&#x8C31;&#x5149;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) is a carcinogenic nitrosamine produced upon curing tobacco. It is present in tobacco smoke and undergoes metabolism to 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) in the lungs. NNAL undergoes further uridine diphosphate glucuronosyltransferase (UGT)-mediated metabolism to give N- and O-glucuronide metabolites, which together with free (non-conjugated) NNAL are then excreted in the urine. The ability to conduct validated analyses of free and conjugated NNAL in human urine is important in order to assess inter-individual differences in lung cancer risk from exposure to cigarette smoke. The use of stable isotope dilution (SID) methodology in combination with liquid chromatography/multiple reaction monitoring/mass spectrometry (LC/MRM-MS) provides the highest bioanalytical specificity possible for such analyses. We describe a novel derivatization procedure, which results in the formation of a pre-ionized N-propyl-NNAL derivative. The increased LC/MS sensitivity arising from this derivative then makes it possible to analyze free NNAL in only 0.25â€‰mL urine. This substantial reduction in urine volume when compared with other methods that have been developed will help preserve the limited amounts of stored urine samples that are available from on-going longitudinal biomarker studies. The new high sensitivity SID LC/MRM-MS assay was employed to determine free and conjugated NNAL concentrations in urine samples from 60 individual disease-free smokers. Effects of inter-individual differences in urinary creatinine clearance on NNAL concentrations were then assessed and three metabolizer phenotypes were identified in the 60 subjects from the ratio of urinary NNAL glucuronides/free NNAL. Poor metabolizers (PMs, 14 subjects) with a ratio of NNAL glucuronides/free NNAL <2 (meanâ€‰=â€‰1.3), intermediate metabolizers (IMs, 36 subjects) with a ratio between 2 and 5 (meanâ€‰=â€‰3.4), and extensive metabolizers (EMs, 10 subjects) with a ratio >5 (meanâ€‰=â€‰11.1).

A new liquid chromatography/mass spectrometry method for 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) in urine.

4 - (m&#xE9;thylnitrosamino) -1 - (3-pyridyl)-1-butanone (NNK) est une nitrosamine canc&#xE9;rig&#xE8;ne produite sur le tabac de durcissement. Il est pr&#xE9;sent dans la fum&#xE9;e de tabac et subit un m&#xE9;tabolisme &#xE0; 4 - (m&#xE9;thylnitrosamino) -1 - (3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) dans les poumons. NNAL subit en outre l&#x26;#39;uridine diphosphate glucuronosyltransf&#xE9;rase (UGT) m&#xE9;tabolisme m&#xE9;di&#xE9; &#xE0; donner le N-et O-glucuronide m&#xE9;tabolites qui, ensemble, avec free (non-conjugu&#xE9;) NNAL sont ensuite excr&#xE9;t&#xE9;s dans l&#x26;#39;urine. La capacit&#xE9; d&#x26;#39;effectuer des analyses valid&#xE9;es de NNAL libre et conjugu&#xE9;e dans l&#x26;#39;urine humaine est important afin d&#x26;#39;&#xE9;valuer les diff&#xE9;rences inter-individuelles dans le risque de cancer du poumon de l&#x26;#39;exposition &#xE0; la fum&#xE9;e de cigarette. L&#x26;#39;utilisation de la dilution des isotopes stables (SID) la m&#xE9;thodologie en combinaison avec la chromatographie liquide / multiple r&#xE9;action de surveillance / spectrom&#xE9;trie de masse (LC / MRM-MS) fournit la plus grande sp&#xE9;cificit&#xE9; bioanalytique possible pour de telles analyses. On d&#xE9;crit une proc&#xE9;dure de d&#xE9;rivatisation nouvelle, qui aboutit &#xE0; la formation d&#x26;#39;un pr&#xE9;-ionis&#xE9; N-propyl-NNAL d&#xE9;riv&#xE9;. L&#x26;#39;augmentation de LC / MS de sensibilit&#xE9; d&#xE9;coulant de ce d&#xE9;riv&#xE9; permet alors d&#x26;#39;analyser NNAL libre dans seulement 0,25 ml d&#x26;#39;urine. Cette r&#xE9;duction substantielle du volume d&#x26;#39;urine par rapport &#xE0; d&#x26;#39;autres m&#xE9;thodes qui ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9;s aidera &#xE0; pr&#xE9;server les quantit&#xE9;s limit&#xE9;es d&#x26;#39;&#xE9;chantillons d&#x26;#39;urine stock&#xE9;s qui sont disponibles &#xE0; partir en cours d&#x26;#39;&#xE9;tudes longitudinales de biomarqueurs. La nouvelle sensibilit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e SID LC / MS MRM-test a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour d&#xE9;terminer les concentrations libres et conjugu&#xE9;es NNAL dans des &#xE9;chantillons d&#x26;#39;urine de 60 individuels indemnes de la maladie des fumeurs. Effets de diff&#xE9;rences inter-individuelles de la clairance de la cr&#xE9;atinine urinaire sur les concentrations NNAL ont ensuite &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;s et trois ph&#xE9;notypes m&#xE9;taboliseurs ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s au cours des 60 sujets par rapport au ratio de la urinaires glucuronides NNAL ou NNAL libre. M&#xE9;taboliseurs lents (PMS, 14 sujets) avec un ratio de glucuronides NNAL / gratuit NNAL &#x26;lt;2 (moyenne = 1,3), les m&#xE9;taboliseurs interm&#xE9;diaires (IMS, 36 sujets) avec un ratio compris entre 2 et 5 (moyenne = 3,4) et m&#xE9;taboliseurs rapides ( EM, 10 sujets) avec un ratio&#x26;gt; 5 (moyenne = 11,1).

Une nouvelle m&#xE9;thode de spectrom&#xE9;trie de liquide chromatographie / masse pour 4 - (m&#xE9;thylnitrosamino) -1 - (3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) dans l&#x26;#39;urine

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) ist eine krebserregende Nitrosamin produzieren nach Kurieren des Tabaks. Es ist in Tabakrauch und erf&auml;hrt Stoffwechsel auf 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) in der Lunge. NNAL erf&auml;hrt weitere Uridin-Diphosphat Glucuronosyltransferase (UGT)-vermittelten Metabolismus zu geben, N und O-Glucuronid Metaboliten, die zusammen mit der freien (nicht-konjugierte) NNAL dann im Urin ausgeschieden werden. Die F&auml;higkeit zur validierten Leistungsanalysen der freien und konjugierten NNAL im menschlichen Urin ist wichtig um Interindividuelle Unterschiede in der Lunge-Krebs-Risiko durch Exposition gegen&uuml;ber Zigarettenrauch zu beurteilen. Die Verwendung von stabilen Isotop Verd&uuml;nnung (SID) Methodik in Kombination mit fl&uuml;ssige Chromatographie / mehrere Reaktion &Uuml;berwachung/Massenspektrometrie (LC/MRM-MS) bietet die h&ouml;chste Bioanalytische Spezifit&auml;t f&uuml;r solche Analysen m&ouml;glich. Wir beschreiben eine neuartige Derivatisierung-Prozedur, die Ergebnisse in die Bildung eines pre-ionized N-Propyl-NNAL-Derivats. Der LC/MS-empfindlicher, die infolge dieses Derivat dann macht es m&ouml;glich, kostenlose NNAL in nur 0,25 mL Urin zu analysieren. Diese erheblichen R&uuml;ckgang der Urinvolumen im Vergleich zu anderen Methoden, die entwickelt wurden hilft die begrenzten Mengen von gespeicherten Urinproben beibehalten, die aus laufenden l&auml;ngs Biomarker Untersuchungen sind. Der neue hohe Empfindlichkeit-SID LC/MRM-MS-Assay wurde eingesetzt, um freie und konjugierte NNAL Konzentrationen in Urinproben von 60 einzelne krankheitsfreie Raucher zu bestimmen. Auswirkungen Interindividuelle Unterschiede im Harn Kreatinin-Clearance auf NNAL Konzentrationen wurden dann bewertet und drei Metabolizer Ph&auml;notypen wurden in den 60 F&auml;chern aus dem Verh&auml;ltnis von Harn NNAL Glucuronides/freies NNAL identifiziert. Schlechte Metabolizers (PMs, 14 Probanden) mit einem Verh&auml;ltnis von NNAL Glucuronides/freies NNAL &lt; 2 (bedeuten = 1.3), mittelstufe Metabolizers (IMs, 36 themen) mit einem verh&auml;ltnis zwischen 2 und 5 (bedeuten = 3,4), und umfangreiche Metabolizers (EMs, 10 f&auml;cher) mit einem verh&auml;ltnis &gt; 5 (bedeuten = 11.1).

Eine neue fl&uuml;ssige Chromatographie/Masse-Spektrometrie-Methode f&uuml;r 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) im Urin.

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) &egrave; un cancerogeno nitrosamina prodotto dopo la polimerizzazione del tabacco. &Egrave; presente nel fumo di tabacco e subisce metabolismo a 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) nei polmoni. NNAL subisce ulteriori uridina difosfato glucuronosiltransferasi (UGT)-mediata metabolismo per dare metaboliti N - e O-glucuronide, che insieme a libera (non coniugato) NNAL sono poi escreti nelle urine. La capacit&agrave; di condurre analisi Validate di NNAL liberi e coniugati nell&#39;urina umana &egrave; importante al fine di valutare le differenze interindividuali nel rischio di cancro al polmone da esposizione al fumo di sigaretta. L&#39;utilizzo della metodologia diluizione (SID) dell&#39;isotopo stabile in combinazione con cromatografia liquida pi&ugrave; reazione monitoraggio/spettrometria di massa (LC/MRM-MS) fornisce la pi&ugrave; alta specificit&agrave; bioanalytical possibile per tale analisi. Descriviamo una procedura di derivatizzazione romanzo, che si traduce nella formazione di un derivato N-propil-NNAL pre-ionized. La maggiore sensibilit&agrave; di LC/MS derivanti da questo derivato poi rende possibile analizzare NNAL gratis in solo urina 0,25 mL. Questa sostanziale riduzione del volume di urina quando confrontato con altri metodi che sono stati sviluppati vi aiuter&agrave; a conservare una quantit&agrave; limitata di campioni di urina memorizzati sono disponibili da studi longitudinali biomarcatore on-going. La nuova sensibilit&agrave; alta SID LC/MRM-MS dosaggio fu impiegato per determinare concentrazioni di NNAL liberi e coniugati nei campioni di urina da 60 singoli fumatori libera da malattia. Quindi sono stati valutati gli effetti delle differenze interindividuali nella clearance della creatinina urinaria su concentrazioni di NNAL e in 60 soggetti dal rapporto urinario NNAL glucuronides libero NNAL sono stati identificati tre fenotipi metabolizer. Poor metabolizers (PMs, 14 soggetti) con un rapporto di NNAL glucuronides libero NNAL &lt; 2 (significa = 1.3), intermedio metabolizers (IMs, 36 soggetti) con un rapporto tra 2 e 5 (significa = 3.4) e vasta metabolizers (EMs, 10 soggetti) con un rapporto &amp;gt; 5 (significa = 11,1).

Un nuovo metodo di spettrometria massa cromatografia liquida per 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) nelle urine.

4  - &#xFF08;Methylnitrosamino&#xFF09;-1  - &#xFF08;3  - &#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EB;&#xFF09;-1  - &#x30D6;&#x30BF;&#x30CE;&#x30F3;&#xFF08;NNK&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x786C;&#x5316;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x767A;&#x764C;&#x6027;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30BD;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x306E;&#x7159;&#x4E2D;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3001;4&#x306B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066; - &#xFF08;methylnitrosamino&#xFF09;-1  - &#xFF08;3  - &#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EB;&#xFF09;-1  - &#x30D6;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;NNAL&#xFF09;&#x80BA;&#x306B;&#x3002; NNAL&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x81EA;&#x7531;&#x306B;&#xFF08;&#x975E;&#x5171;&#x5F79;&#xFF09;NNAL&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5C3F;&#x4E2D;&#x306B;&#x6392;&#x6CC4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;N-&#x304A;&#x3088;&#x3073;O-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30CB;&#x30C9;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x3092;&#x3001;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x4E8C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30F3;&#x9178;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;UGT&#xFF09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x5C3F;&#x4E2D;&#x306B;&#x904A;&#x96E2;&#x578B;&#x3068;&#x62B1;&#x5408;&#x578B;NNAL&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3070;&#x3053;&#x306E;&#x7159;&#x3078;&#x306E;&#x66DD;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80BA;&#x304C;&#x3093;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x500B;&#x4EBA;&#x5DEE;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;/&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;/&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#xFF08;LC / MRM-MS&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x5E0C;&#x91C8;&#xFF08;SID&#xFF09;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9650;&#x308A;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;N-&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EB;-NNAL&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x5316;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x3001;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;LC / MS&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x308F;&#x305A;&#x304B;0.25 mL&#x306E;&#x5C3F;&#x4E2D;&#x306B;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;NNAL&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5C3F;&#x91CF;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x306E;&#x7E26;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x683C;&#x7D0D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C3F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x91CF;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;SID LC / MRM-MS&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;60&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7121;&#x75C5;&#x55AB;&#x7159;&#x8005;&#x306E;&#x5C3F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x4E2D;&#x306E;&#x904A;&#x96E2;&#x578B;&#x3068;&#x62B1;&#x5408;&#x578B;NNAL&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; NNAL&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5C3F;&#x4E2D;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x500B;&#x4EBA;&#x5DEE;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E09;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DC;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x5C3F;NNAL&#x30B0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30CB;&#x30C9;/&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;NNAL&#x306E;&#x6BD4;&#x304B;&#x3089;60&#x79D1;&#x76EE;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; 2&#x304A;&#x3088;&#x3073;5&#xFF08;= 3.4&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6BD4;NNAL&#x30B0;&#x30EB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30CB;&#x30C9;/&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;NNAL &#x26;lt;2&#xFF08;= 1.3&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#xFF09;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x8005;&#xFF08;IMS&#x3001;36&#x79D1;&#x76EE;&#xFF09;&#x306E;&#x6BD4;&#x3067;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x8005;&#xFF08;PMS&#x3001;14&#x4F8B;&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x8005;&#xFF08;&#x6BD4;&#x26;gt; 5&#xFF08;= 11.1&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#xFF09;&#x3068;EMS&#x3001;10&#x540D;&#xFF09;&#x3002;

4&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;/&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5; - &#xFF08;methylnitrosamino&#xFF09;-1  - &#xFF08;3  - &#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30EB;&#xFF09;-1  - &#x30D6;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x5C3F;&#x4E2D;&#xFF08;NNAL&#xFF09;

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK)&#xB294; &#xBC1C;&#xC554; nitrosamine &#xB2F4;&#xBC30; &#xACBD;&#xD654; &#xC2DC; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xD3D0;&#xC5D0;&#xC11C; 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL)&#xC758; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5;. NNAL &#xACAA; &#xC2B5; &#xCD94;&#xAC00; uridine diphosphate glucuronosyltransferase (UGT)-&#xBB34;&#xB8CC; (&#xBE44; &#xD65C;&#xC6A9;) NNAL &#xD568;&#xAED8; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC18C;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC124; &#xD558;&#xB294; N&#xACFC; O glucuronide metabolites &#xC8FC;&#xACE0; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC18C;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xC720;&#xB86D;&#xACE0; &#xD65C;&#xC6A9; NNAL&#xC758; &#xAC80;&#xC99D; &#xB41C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30; &#xB178;&#xCD9C; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xD3D0; &#xC554; &#xC704;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; inter-individual &#xCC28;&#xC774; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC561;&#xCCB4; &#xCC29; &#xC0C9; &#xC778;&#xC1C4;&#xAE30;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD76C;&#xC11D; (SID) &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; / &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; bioanalytical &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC18;&#xC751; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;/&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (LC/MRM-MS). Pre-ionized N-&#xD504;&#xB85C;&#xD544;-NNAL &#xD30C;&#xC0DD; &#xD615;&#xC131; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; derivatization &#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC99D;&#xAC00; LC/MS &#xAC10;&#xB3C4; 0.25 mL &#xC18C;&#xBCC0;&#xB9CC; &#xBB34;&#xB8CC; NNAL &#xBD84;&#xC11D;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xBCC0; &#xBCFC;&#xB968; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xAC00; &#xC628;&#xAC00; &#xACBD;&#xB3C4; biomarker &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC800;&#xC7A5; &#xB41C; &#xC18C;&#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xAE08;&#xC561;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB192;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4; SID LC/MRM MS &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; 60 &#xAC1C;&#xC778; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xD761;&#xC5F0; &#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xC720;&#xB86D;&#xACE0; &#xD65C;&#xC6A9; NNAL &#xB18D;&#xB3C4; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. NNAL &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC694;&#xB3C4; creatinine &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4; inter-individual &#xCC28;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD6C4; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC138; metabolizer &#xACE0;&#xAE30; &#xC694;&#xB3C4; NNAL glucuronides/&#xBB34;&#xB8CC; NNAL&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; 60 &#xACFC;&#xBAA9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; metabolizers (14 &#xACFC;&#xBAA9;, PMs) NNAL glucuronides/&#xBB34;&#xB8CC; NNAL&#xC758; &#xBE44;&#xC728; &lt; 2 (&#xC758;&#xBBF8; = 1.3), 2&#xC5D0;&#xC11C; 5 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBE44;&#xC728; metabolizers (IMs, 36 &#xACFC;&#xBAA9;) &#xC911;&#xAC04; (&#xC758;&#xBBF8; 3.4 =), &#xBC0F; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; metabolizers (EMs, 10 &#xACFC;&#xBAA9;) &#xBE44;&#xC728; &amp;gt; 5 (&#xB73B; = 11.1).

4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNAL) &#xC18C;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;/&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xBC95;.

4 - (methylnitrosamino) -1 - (3-piridil)-1-butanona (NNK) es un carcin&#xF3;geno nitrosamina producido en el tabaco curado. Est&#xE1; presente en el humo del tabaco y se metaboliza a 4 - (methylnitrosamino) -1 - (3-piridil)-1-butanol (NNAL) en los pulmones. NNAL se somete a difosfato de uridina m&#xE1;s glucuronosiltransferasa (UGT), el metabolismo mediado para dar N-y O-glucur&#xF3;nidos metabolitos, que junto con libre (no conjugado) NNAL son excretados en la orina. La capacidad de realizar an&#xE1;lisis validados de NNAL libre y conjugada en la orina humana es importante a fin de evaluar las diferencias entre individuos en el riesgo de c&#xE1;ncer de pulm&#xF3;n por exposici&#xF3;n al humo del cigarrillo. El uso de la diluci&#xF3;n de is&#xF3;topos estables (SID) en combinaci&#xF3;n con la metodolog&#xED;a de cromatograf&#xED;a l&#xED;quida / reacci&#xF3;n m&#xFA;ltiple de seguimiento / espectrometr&#xED;a de masas (LC / MS-MRM) ofrece la mayor especificidad bioanal&#xED;tica posible para este tipo de an&#xE1;lisis. Se describe un procedimiento de derivatizaci&#xF3;n novedoso, que resulta en la formaci&#xF3;n de un pre-ionizado N-propil-NNAL derivado. El aumento de LC / MS de la sensibilidad derivada de este derivado a continuaci&#xF3;n, hace posible el an&#xE1;lisis de NNAL en la orina libre de s&#xF3;lo el 0,25 ml. Esta importante reducci&#xF3;n en el volumen de la orina en comparaci&#xF3;n con otros m&#xE9;todos que se han desarrollado ayudar&#xE1; a preservar las cantidades limitadas de muestras de orina almacenadas que est&#xE1;n disponibles en en curso los estudios de biomarcadores longitudinales. La alta sensibilidad nueva SID LC / MS MRM-ensayo se emplea para determinar la concentraci&#xF3;n de NNAL libres y conjugados en muestras de orina de 60 individuales libres de la enfermedad los fumadores. Efectos de las diferencias interindividuales en el aclaramiento de creatinina en orina en concentraciones NNAL fueron evaluados y de tres fenotipos metabolizadores fueron identificados en los 60 sujetos de la relaci&#xF3;n de la orina o glucur&#xF3;nidos NNAL NNAL libre. Metabolizadores lentos (ML, 14 sujetos) con una proporci&#xF3;n de glucur&#xF3;nidos NNAL o libres de NNAL &#x26;lt;2 (media = 1,3), los metabolizadores intermedios (IMS, 36 sujetos) con una proporci&#xF3;n de entre 2 y 5 (media = 3,4) y metabolizadores r&#xE1;pidos ( EM, 10 sujetos) con una relaci&#xF3;n de&#x26;gt; 5 (media = 11,1).

Una nueva cromatograf&#xED;a l&#xED;quida / espectrometr&#xED;a de masas M&#xE9;todo para 4 - (methylnitrosamino) -1 - (3-piridil)-1-butanol (NNAL) en la orina

&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x7A00;&#x91CA;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (MS) &#x662F;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x9EC4;&#x91D1;&#x6807;&#x51C6;&#x6B65;&#x4E4B;&#x9065;&#x5F62;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8F85;&#x9176; A (CoA) &#x548C;&#x8102;&#x9170; CoA &#x786B;&#x916F;&#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#x4E2D;&#x592E;&#x73A9;&#x5BB6;&#x5728;&#x4F17;&#x591A;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x60F0;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0; CoA &#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x4E25;&#x683C;&#x57FA;&#x4E8E; MS &#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x662F;&#x9002;&#x5E94;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x542B;&#x91CF; &#xFF08;SILAC&#xFF09; biosynthetically &#x751F;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x51C6;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x4E2D;&#x7684; CoA &#x548C;&#x786B;&#x916F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5; / &#x591A;&#x53CD;&#x5E94;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5; (LC/MRM-MS) &#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FD9;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B75;&#x5316;&#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;Hepa 1c1c7) &#x5728;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x6CDB;&#x9178; (&#x524D;&#x4F53;&#x7684; CoA&#xFF09; &#x88AB;&#x66FF;&#x6362; [(13)C(3)(15)N(1)]-&#x6CDB;&#x9178;&#x3002;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x7EB3;&#x5165;&#x5404;&#x79CD; CoA &#x7269;&#x79CD;&#x4F18;&#x5316;&#x7684; &gt; 99%[(13)C(3)(15)N(1)]-&#x4E09;&#x4E2A;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x540E;&#x6CDB;&#x9178;&#x3002;&#x6728;&#x70AD;-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x5265;&#x80CE;&#x725B;&#x8840;&#x6E05; (FBS) &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x8840;&#x6E05;&#x8865;&#x5145;&#x900F;&#x6790;&#x6216; undialyzed FBS&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x4F4E;&#x6C61;&#x67D3;&#x672A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6CDB;&#x9178;&#x542B;&#x91CF;&#x6BD4;&#x4EFB;&#x4F55;&#x65F6;&#x5019;&#x90FD;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0; CoA &#x7269;&#x79CD;&#x88AB;&#x63D0;&#x53D6;&#x548C;&#x5229;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A; CoA &#x786B;&#x916F;&#x5206;&#x6790;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x8425;&#x517B;&#x7269;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B; (SILEC) &#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8425;&#x517B;&#x7269;&#x8D28;&#x751F;&#x6210;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8F7B;&#x6613;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;

&#x7A33;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7528;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8F85;&#x9176; A &#x548C;&#x5176;&#x786B;&#x7684;&#x5236;&#x5907;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x8425;&#x517B;&#x7269;&#x8D28;&#x3002;

Stable isotope dilution mass spectrometry (MS) represents the gold standard for quantification of endogenously formed cellular metabolites. Although coenzyme A (CoA) and acyl-CoA thioester derivatives are central players in numerous metabolic pathways, the lack of a commercially available isotopically labeled CoA limits the development of rigorous MS-based methods. In this study, we adapted stable isotope labeling by amino acids in cell culture (SILAC) methodology to biosynthetically generate stable isotope labeled CoA and thioester analogues for use as internal standards in liquid chromatography/multiple reaction monitoring mass spectrometry (LC/MRM-MS) assays. This was accomplished by incubating murine hepatocytes (Hepa 1c1c7) in media in which pantothenate (a precursor of CoA) was replaced with [(13)C(3)(15)N(1)]-pantothenate. Efficient incorporation into various CoA species was optimized to >99% [(13)C(3)(15)N(1)]-pantothenate after three passages of the murine cells in culture. Charcoal-dextran-stripped fetal bovine serum (FBS) was found to be more efficient for serum supplementation than dialyzed or undialyzed FBS, due to lower contaminating unlabeled pantothenate content. Stable isotope labeled CoA species were extracted and utilized as internal standards for CoA thioester analysis in cell culture models. This methodology of stable isotope labeling by essential nutrients in cell culture (SILEC) can serve as a paradigm for using vitamins and other essential nutrients to generate stable isotope standards that cannot be readily synthesized.

Stable isotope labeling by essential nutrients in cell culture for preparation of labeled coenzyme A and its thioesters.

Stable isotope dilution spectrom&#xE9;trie de masse (MS) repr&#xE9;sente l&#x26;#39;&#xE9;talon-or pour la quantification des m&#xE9;tabolites form&#xE9;s endog&#xE8;ne cellulaires. Bien que la coenzyme A (CoA) et des d&#xE9;riv&#xE9;s acyl-CoA thioester sont des acteurs centraux dans les voies m&#xE9;taboliques de nombreuses, l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;un commerce CoA isotopiquement marqu&#xE9; limite le d&#xE9;veloppement de rigoureuses m&#xE9;thodes bas&#xE9;es sur MS-. Dans cette &#xE9;tude, nous avons adapt&#xE9; l&#x26;#39;&#xE9;tiquetage des isotopes stables par les acides amin&#xE9;s en culture cellulaire (SILAC) m&#xE9;thodologie pour g&#xE9;n&#xE9;rer des isotopes stables biosynth&#xE8;se marqu&#xE9; analogues CoA et thioester pour une utilisation en tant que normes internes en chromatographie liquide / multiple r&#xE9;action suivi par spectrom&#xE9;trie de masse (LC / MRM-MS) dosages. Cela a &#xE9;t&#xE9; accompli par l&#x26;#39;incubation des h&#xE9;patocytes murins (Hepa 1c1c7) dans les m&#xE9;dias, dans lequel pantoth&#xE9;nate (un pr&#xE9;curseur de la CoA) a &#xE9;t&#xE9; remplac&#xE9; par [(13) C (3) (15) N (1)]-pantoth&#xE9;nate. L&#x26;#39;incorporation efficace en esp&#xE8;ces CoA divers a &#xE9;t&#xE9; optimis&#xE9; pour&#x26;gt; 99% [(13) C (3) (15) N (1)]-pantoth&#xE9;nate apr&#xE8;s trois passages des cellules murines en culture. Charbon de bois-dextrane d&#xE9;pouill&#xE9; de s&#xE9;rum bovin foetal (FBS) a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9;e plus efficace pour la suppl&#xE9;mentation de s&#xE9;rum que dialyse ou FBS undialyzed, en raison de faible teneur en contaminant pantoth&#xE9;nate non &#xE9;tiquet&#xE9;s. Isotopes stables &#xE9;tiquet&#xE9;s esp&#xE8;ces CoA ont &#xE9;t&#xE9; extraits et utilis&#xE9;s comme standards internes pour CoA thioester analyse dans les mod&#xE8;les de culture cellulaire. Cette m&#xE9;thodologie de marquage isotopique stable en nutriments essentiels en culture cellulaire (SILEC) peut servir de paradigme pour l&#x26;#39;utilisation de vitamines et autres nutriments essentiels &#xE0; g&#xE9;n&#xE9;rer un niveau d&#x26;#39;isotopes stables qui ne peuvent pas &#xEA;tre facilement synth&#xE9;tis&#xE9;s.

&#xC9;tiquetage des isotopes stables par &#xE9;l&#xE9;ments nutritifs essentiels &#xE0; la culture cellulaire pour la pr&#xE9;paration de &#xC9;tiquet&#xE9; coenzyme A et de ses thioesters

Stabile Isotope Dilution vertretenen Massenspektrometrie (MS) der Goldstandard f&uuml;r die Quantifizierung der endogen gebildet zellul&auml;re Metaboliten. Obwohl Coenzym A (CoA) und Coenzym a-Thioester-Derivaten zentralen Akteuren in zahlreichen Stoffwechselwegen sind, schr&auml;nkt das Fehlen eines handels&uuml;blichen isotopischer beschriftete CoA die Entwicklung von MS-basierte rigoroses. In dieser Studie angepasst wir Stabiles Isotop Kennzeichnung von Aminos&auml;uren in der Zellkultur (SILAC) Methodik generieren biosynthetically Stabiles Isotop mit der Bezeichnung CoA und Thioester-Analoga f&uuml;r die Verwendung als interne Standards in fl&uuml;ssige Chromatographie / mehrere Reaktion Massenspektrometrie (LC/MRM-MS) Proben zu &uuml;berwachen. Dies wurde erreicht durch Inkubation murine Hepatozyten (Hepa-1c1c7) in den Medien, in denen Pantothenat (ein Vorl&auml;ufer des CoA) mit [(13)C(3)(15)N(1) ersetzt wurde]-Pantothenat. Effiziente Einbindung in artenreichen CoA wurde optimiert, um &gt; 99 % [(13)C(3)(15)N(1)]-Pantothenat nach drei Passagen der murinen Zellen in Kultur. Kohle-Dextran-abgestreift Rinderf&ouml;tenserum (FBS) wurde festgestellt, dass effizienter f&uuml;r Serum-Supplementierung als dialyzed oder undialyzed FBS, aufgrund der niedrigeren Gehalt an kontaminierenden unbeschriftete Pantothenat. Stabiles Isotop CoA Arten beschriftet wurden extrahiert und als interne Regeln f&uuml;r die CoA-Thioester-Analyse in Zelle Kultur Modellen genutzt. Diese Methodik des stabilen Isotops Kennzeichnung von essentiellen N&auml;hrstoffen in der Zellkultur (SILEC) dient als Paradigma f&uuml;r die Verwendung von Vitaminen und anderen essentiellen N&auml;hrstoffen Stabiles Isotop Normen zu generieren, die leicht synthetisiert werden kann nicht.

Stabile Isotope Kennzeichnung von essentiellen N&auml;hrstoffen in der Zellkultur zur Herstellung von beschrifteten Coenzym A und seine Thioesters.

Diluizione dell&#39;isotopo stabile, spettrometria di massa (MS) rappresenta il gold standard per la quantificazione di endogena formata metaboliti cellulari. Sebbene coenzima A (CoA) e acil-CoA tioestere derivati sono giocatori centrali in numerose vie metaboliche, la mancanza di un CoA marcato isotopicamente commercialmente disponibile limita lo sviluppo di metodi rigorosi basati su MS. In questo studio, abbiamo adattato isotopo stabile etichettatura di amminoacidi nella coltura delle cellule metodologia (SILAC) per generare biosynthetically isotopo stabile con l&#39;etichetta CoA e tioesteri analoghi per uso come standard interno in cromatografia liquida / reazione pi&ugrave; monitoraggio analisi di spettrometria di massa (LC/MRM-MS). Questo &egrave; stato compiuto incubando murini epatociti (Hepa 1c1c7) in media in cui pantotenato (un precursore del CoA) &egrave; stato sostituito con [(13)C(3)(15)N(1)]-pantotenato. Incorporazione efficace in varie specie di CoA &egrave; stato ottimizzato per &amp;gt; 99% [(13)C(3)(15)N(1)]-pantotenato dopo tre passaggi delle cellule murine in cultura. Carbone-Destrano-spogliato fetale siero bovino (FBS) &egrave; stato trovato per essere pi&ugrave; efficiente per la somministrazione di siero di FBS dializzato o undialyzed, a causa della minore contenuto di contaminanti pantotenato adenoide. Isotopo stabile etichettato specie CoA furono estratti e utilizzati come standard interni per analisi tioestere CoA in modelli di cultura cellulare. Questa metodologia di isotopo stabile di etichettatura di sostanze nutrienti essenziali nella coltura delle cellule (SILEC) pu&ograve; servire come un paradigma per l&#39;utilizzo di vitamine e altri nutrienti essenziali per generare norme isotopo stabile che non possono essere facilmente sintetizzati.

Stabile dell&#39;isotopo etichettatura di nutrienti essenziali nella coltura delle cellule per la preparazione di etichettati coenzima A e relativo tioesteri.

&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x5E0C;&#x91C8;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#xFF08;MS&#xFF09;&#x306F;&#x5185;&#x751F;&#x7684;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x88DC;&#x9175;&#x7D20;A&#xFF08;CoA&#xFF09;&#x3068;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E4;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5E02;&#x8CA9;&#x306E;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;CoA&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x53B3;&#x683C;&#x306A;MS&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x200B;&#x200B;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;/&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF08;LC / MRM-MS&#xFF09;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x6A19;&#x6E96;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CoA&#x3068;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#xFF08;SILAC&#xFF09;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;&#x3092;&#x9069;&#x5FDC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30C6;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;CoA&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#xFF09;&#x306F;[&#xFF08;13&#xFF09;C&#xFF08;3&#xFF09;&#xFF08;15&#xFF09;N&#xFF08;1&#xFF09;]-&#x30D1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30C6;&#x30F3;&#x9178;&#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3057;&#x305F;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;HEPA 1c1c7&#xFF09;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;CoA&#x306E;&#x7A2E;&#x3078;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;3&#x7D99;&#x4EE3;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x26;gt; 99&#xFF05;[&#xFF08;13&#xFF09;C&#xFF08;3&#xFF09;&#xFF08;15&#xFF09;N&#xFF08;1&#xFF09;]-&#x30D1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30C6;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6728;&#x70AD;-&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x9664;&#x53BB;&#x30A6;&#x30B7;&#x80CE;&#x5150;&#x8840;&#x6E05;&#xFF08;FBS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x6C5A;&#x67D3;&#x6A19;&#x8B58;&#x30D1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30C6;&#x30F3;&#x9178;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x900F;&#x6790;&#x307E;&#x305F;&#x306F;undialyzed FBS&#x3088;&#x308A;&#x8840;&#x6E05;&#x88DC;&#x5145;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CoA&#x306E;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CoA&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x5206;&#x6790;&#x7528;&#x5185;&#x90E8;&#x6A19;&#x6E96;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x62BD;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#xFF08;SILEC&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x306E;&#x57FA;&#x6E96;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x306E;&#x8ABF;&#x88FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x540C;&#x4F4D;&#x4F53;&#x6A19;&#x8B58;

&#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD76C;&#xC11D; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS) &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD669;&#xAE08; &#xD45C;&#xC900; endogenously &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xC870; &#xD6A8;&#xC18C; A (CoA)&#xC640; acyl CoA thioester &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xB300;&#xC0AC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC559; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0C1;&#xC6A9; isotopically &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; Coa&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C; MS &#xAE30;&#xBC18; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; biosynthetically &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; CoA &#xBC0F; thioester analogues &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; (SILAC) &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC801;&#xC751; / &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (LC/MRM MS) &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC18;&#xC751;. &#xC774; &#xC7A0;&#xBCF5;&#xAE30; murine hepatocytes (Hepa 1c1c7) pantothenate (Coa&#xC758; &#xC804;&#xC870;) [(13)C(3)(15)N(1)]&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC131;&#xCDE8; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;-pantothenate. &#xC5EC;&#xB7EC; CoA &#xC885;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC124;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB410;&#xB2E4; &amp;gt; 99% [(13)C(3)(15)N(1)]-&#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; murine &#xC140;&#xC758; 3 &#xAD6C;&#xC808; &#xD6C4; pantothenate. &#xC22F; dextran &#xBC15;&#xD0C8; &#xD0DC;&#xC544; &#xC18C; &#xC138;&#xB7FC; (FBS) &#xB0AE;&#xC740; &#xC624;&#xC5FC; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; pantothenate &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xC778; dialyzed &#xB610;&#xB294; undialyzed FBS &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD608; &#xCCAD; &#xBCF4;&#xC644;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; CoA &#xC885; &#xBD84;&#xB958; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558; &#xACE0; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; CoA thioester &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; (SILEC)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218; &#xC601;&#xC591;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC;&#xACFC; &#xAE30;&#xD0C0; &#xD544;&#xC218; &#xC601;&#xC591;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC27D;&#xAC8C; &#xD569;&#xC131; &#xB420; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xD45C;&#xC900; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC548;&#xC815; &#xB3D9;&#xC704; &#xC6D0;&#xC18C; &#xB77C;&#xBCA8; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xCF54;&#xC5D4;&#xC790;&#xC784; A &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; thioesters&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xC591;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;.

Estable diluci&#xF3;n de is&#xF3;topos con espectrometr&#xED;a de masas (MS) representa el est&#xE1;ndar de oro para la cuantificaci&#xF3;n de los metabolitos formados end&#xF3;genamente celulares. Aunque coenzima A (CoA) y acil-CoA derivados tio&#xE9;ster son actores centrales en numerosas v&#xED;as metab&#xF3;licas, la falta de un comercialmente disponible CoA marcado isot&#xF3;picamente limita el desarrollo de rigurosos MS basados &#x200B;&#x200B;en m&#xE9;todos. En este estudio, hemos adaptado el etiquetado de is&#xF3;topos estables de amino&#xE1;cidos en cultivo celular (SILAC) metodolog&#xED;a para generar biosint&#xE9;ticamente is&#xF3;topos estables etiquetados an&#xE1;logos CoA y tio&#xE9;ster para su uso como patrones internos en la cromatograf&#xED;a l&#xED;quida / reacci&#xF3;n de monitoreo m&#xFA;ltiple de la espectrometr&#xED;a de masas (LC / MS-MRM) ensayos. Esto se logr&#xF3; mediante la incubaci&#xF3;n de hepatocitos murinos (HEPA 1c1c7) en medios de comunicaci&#xF3;n en el que se sustituy&#xF3; pantotenato (un precursor de CoA) con [(13) C (3) (15) N (1)]-pantotenato. Incorporaci&#xF3;n eficaz en diversas especies CoA se optimiz&#xF3; a&#x26;gt; 99% [(13) C (3) (15) N (1)]-pantotenato despu&#xE9;s de tres pasajes de las c&#xE9;lulas murinas en cultivo. Carb&#xF3;n-dextrano-despojado de suero fetal bovino (SFB) fue encontrado para ser m&#xE1;s eficiente para la administraci&#xF3;n de suplementos de suero que se dializan o FBS no dializados, debido a la menor contaminaci&#xF3;n de contenidos sin marcar pantotenato. Is&#xF3;topos estables etiquetados especies CoA fueron extra&#xED;dos y utilizados como patrones internos en el COA, el an&#xE1;lisis de tio&#xE9;ster en los modelos de cultivo celular. Esta metodolog&#xED;a de is&#xF3;topos estables de etiquetado nutrientes esenciales en el cultivo de c&#xE9;lulas (SILEC) puede servir como un paradigma para el uso de vitaminas y otros nutrientes esenciales para generar normas de is&#xF3;topos estables, que no pueden ser f&#xE1;cilmente sintetizados.

Is&#xF3;topos estables de etiquetado nutrientes esenciales en el cultivo celular para la preparaci&#xF3;n de Etiquetada Coenzima A y sus tio&#xE9;steres

&#x591A;&#x836F;&#x8010;&#x836F;&#x86CB;&#x767D; (MRP) 4&#x3001; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x76D2;&#x5F0F;&#x78C1;&#x5E26; &#xFF08;ABC&#xFF09; &#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#xFF0C;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#x3002;&#x5B83;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x80C6;&#x76D0;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3001; &#x5171;&#x8F6D;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x3001; &#x6838;&#x82F7;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x3001; eicosanoids&#x3001; &#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7C7B;&#x836F;&#x7269;&#x3002;&#x809D;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; MRP4 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x53D7;&#x7684;&#x82B3;&#x57FA;&#x70C3;&#x53D7;&#x4F53; (AhR) &#x548C;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50; E2 &#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50; 2 (Nrf2)&#x3002;&#x673A;&#x573A;&#x969C;&#x788D;&#x7269;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x5728;&#x80BA;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x7279;&#x522B;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x610F;&#x4E49;&#x548C;&#x6700;&#x5E38;&#x4E0E;&#x5411;&#x4E0A;-&#x4EE3;&#x8C22;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P 450 CYP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298; &#xFF08;B[a]P) &#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x3002;&#x6CBB;&#x7597; H358&#x3001; &#x4EBA;&#x7C7B;&#x652F;&#x6C14;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; 2,378-&#x56DB;-p-&#x4E8C;&#x6076;&#x82F1; (&#x5B50;&#x9F20;) &#x6216; (-)-benzo[a]pyrene-7,8-dihydro-7,8-diol &#xFF08;B[a]P-7,8-dihydrodiol)&#xFF0C;B [a] P&#x3001; &#x900F;&#x9732; MRP4 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x589E;&#x52A0;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x63A7;&#x4EF6;&#x7684;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x7684;&#x81F4;&#x764C;&#x7269;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x5EFA;&#x8BAE; MRP4 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E8B;&#x4E0E;&#x613F;&#x8FDD;&#x7684; &#xFF08;+)-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydrobenzo[a]pyrene-2&#39;-deoxyguanosine ((+)-anti-trans-B[a]PDE-dGuo) DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5B50;&#x9F20;&#x6CBB;&#x7597; H358 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x627E;&#x5230;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; MRP4 &#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA (shRNA) &#x6216;&#x5316;&#x5B66;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E0E;&#x4E19;&#x78FA;&#x8212;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0; (+)-&#x53CD;-&#x53CD;&#x5F0F;-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B; dGuo &#x5F62;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597; (-)-&#x4E8C;&#x6C22; B [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x6700;&#x7EC8;&#x7684;&#x81F4;&#x764C;&#x7269; (+)-&#x53CD;-&#x8DE8;-B [a] &#x504F;&#x5FAE;&#x5206;&#x65B9;&#x7A0B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;MRP4 &#x4E0A;&#x8C03;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x6392;&#x7684; (-)-B &#x4E8C;&#x6C22; [a] P-7&#xFF0C;8-&#x4E8C;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x51CF;&#x6BD2; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x51CF;&#x5C11;&#x73AF;&#x5883;&#x81F4;&#x764C;&#x7269;&#x8D28;&#x6240;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x5177;&#x4F53; MRP &#x5C04;&#x6D41;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;

&#x591A;&#x836F;&#x8010;&#x836F;&#x86CB;&#x767D; (MRP) 4 &#x6291;&#x5236;&#x82EF;&#x5E76; [a] &#x8298;&#x4ECB;&#x5BFC; DNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x652F;&#x6C14;&#x7BA1;&#x80BA;&#x6CE1; H358 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

Multi-drug resistance protein (MRP) 4, an ATP-binding cassette (ABC) transporter, has broad substrate specificity. It facilitates the transport of bile salt conjugates, conjugated steroids, nucleoside analogs, eicosanoids, and cardiovascular drugs. Recent studies in liver carcinoma cells and hepatocytes showed that MRP4 expression is regulated by the aryl hydrocarbon receptor (AhR) and nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2). The AhR has particular importance in the lung and is most commonly associated with the up-regulation of cytochrome P-450 (CYP)-mediated metabolism of benzo[a]pyrene (B[a]P) to reactive intermediates. Treatment of H358, human bronchoalveolar, cells with 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) or (-)-benzo[a]pyrene-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), the proximate carcinogen of B[a]P, revealed that MRP4 expression was increased compared to control. This suggested that MRP4 expression might contribute to the paradoxical decrease in (+)-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydrobenzo[a]pyrene-2'-deoxyguanosine ((+)-anti-trans-B[a]PDE-dGuo) DNA-adducts observed in TCDD-treated H358 cells. We have now found that decreased MRP4 expression induced by a short hairpin RNA (shRNA), or chemical inhibition with probenecid, increased (+)-anti-trans-B[a]PDE-dGuo formation in cells treated with (-)-B[a]P-7,8-dihydrodiol, but not the ultimate carcinogen (+)-anti-trans-B[a]PDE. Thus, up-regulation of MRP4 increased cellular efflux of (-)-B[a]P-7,8-dihydrodiol, which attenuated DNA-adduct formation. This is the first report identifying a specific MRP efflux transporter that decreases DNA damage arising from an environmental carcinogen.

Multidrug resistance protein (MRP) 4 attenuates benzo[a]pyrene-mediated DNA-adduct formation in human bronchoalveolar H358 cells.

Prot&#xE9;ine de r&#xE9;sistance multi-drogues (MRP) 4, une ATP-binding cassette (ABC) du transporteur, a large sp&#xE9;cificit&#xE9; de substrat. Il facilite le transport des sels biliaires conjugu&#xE9;s, les st&#xE9;ro&#xEF;des conjugu&#xE9;s, analogues nucl&#xE9;osidiques, eicosano&#xEF;des, et les m&#xE9;dicaments cardio-vasculaires. Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes dans les cellules de carcinome du foie et les h&#xE9;patocytes ont montr&#xE9; que MRP4 expression est r&#xE9;gul&#xE9;e par le r&#xE9;cepteur aryl-hydrocarbone (AhR) et du facteur nucl&#xE9;aire E2-facteur li&#xE9; aux 2 (Nrf2). Le AhR rev&#xEA;t une importance particuli&#xE8;re dans le poumon et est le plus souvent associ&#xE9;e &#xE0; la r&#xE9;gulation &#xE0; la hausse du cytochrome P-450 (CYP) le m&#xE9;tabolisme du benzo [a] pyr&#xE8;ne (B [a] P) en interm&#xE9;diaires r&#xE9;actifs. Traitement de H358, broncho-humain, les cellules avec la 2,3,7,8-t&#xE9;trachlorodibenzo-p-dioxine (TCDD) ou (-)-benzo [a] pyr&#xE8;ne-7 ,8-dihydro-7 ,8-diol (B [ a] P-7 ,8-dihydrodiol), l&#x26;#39;agent canc&#xE9;rig&#xE8;ne &#xE0; proximit&#xE9; du B [a] P, a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que l&#x26;#39;expression a &#xE9;t&#xE9; MRP4 augment&#xE9; par rapport &#xE0; contr&#xF4;ler. Cela sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;expression MRP4 pourrait contribuer &#xE0; la diminution paradoxale (+) -7,8-dihydroxy-9 ,10-&#xE9;poxy-7 ,8,9,10-t&#xE9;trahydrobenzo [a] pyr&#xE8;ne-2&#x26;#39;-d&#xE9;soxyguanosine ((+) -anti-trans-B [a] de la PDE-dGuo) ADN-adduits observ&#xE9;s dans la TCDD-trait&#xE9;s H358 cellules. Nous avons maintenant trouv&#xE9; que la diminution d&#x26;#39;expression MRP4 induite par une &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts ARN (shRNA), ou chimique d&#x26;#39;inhibition avec le prob&#xE9;n&#xE9;cide, augment&#xE9; (+)-anti-trans-B [a] de la PDE-dGuo formation dans les cellules trait&#xE9;es avec (-)-B [a] P-7 ,8-dihydrodiol, mais pas le carcinog&#xE8;ne ultime (+)-trans-anti-B [a] PDE. Ainsi, la r&#xE9;gulation positive de MRP4 augmentation de l&#x26;#39;efflux cellulaire de (-)-B [a] P-7 ,8-dihydrodiol, qui att&#xE9;nu&#xE9;e adduits &#xE0; l&#x26;#39;ADN de formation. Ce rapport est le premier &#xE0; identifier un particulier MRP efflux transporteur qui diminue dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN r&#xE9;sultant d&#x26;#39;une substance canc&#xE9;rog&#xE8;ne de l&#x26;#39;environnement.

La multir&#xE9;sistance Resistance Protein (MRP) 4 Att&#xE9;nue benzo [a] pyr&#xE8;ne &#xE0; m&#xE9;diation adduits &#xE0; l&#x26;#39;ADN de l&#x26;#39;homme dans la formation des cellules broncho H358

Multiresistenz Protein (MRP) 4, ein ATP-Bindung-Kassette (ABC)-Transporter, hat breite Substratspezifit&auml;t. Es erleichtert den Transport von Bile Salt-Konjugaten, konjugierte Steroide Nukleosid-Analoga, Eicosanoide und Herz-Kreislauf-Medikamente. Neuere Studien in Leber-Karzinom-Zellen und Hepatozyten zeigte, dass MRP4 Ausdruck durch die Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor (AhR) und nukleare Faktor E2 im Zusammenhang mit Faktor 2 (Nrf2) geregelt ist. Die AhR hat besonderen Bedeutung in der Lunge und ist am h&auml;ufigsten im Zusammenhang mit der oben-Verordnung des Cytochrom P-450-CYP-vermittelten Metabolismus von Benzo [a] pyren (B[a]P) um reaktive Zwischenprodukte. Behandlung von H358, menschliche Bronchoalveol&auml;re, Zellen mit 2.378-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin (TCDD) oder (-)-benzo[a]pyrene-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), dem unmittelbaren karzinogen B [a] p, ergab, dass MRP4 Ausdruck im Vergleich zur Kontrolle erh&ouml;ht wurde. Dies schlug MRP4 Ausdruck k&ouml;nnte dazu beitragen, die paradoxe R&uuml;ckgang (+)-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydrobenzo[a]pyrene-2&#39;-deoxyguanosine ((+)-anti-trans-B[a]PDE-dGuo), die DNA-Addukte in H358 TCDD-behandelten Zellen beobachtet. Wir haben jetzt festgestellt, dass induzierte verminderte MRP4 Ausdruck durch eine kurze Haarnadel RNA (ShRNA) oder chemische Hemmung mit Probenecid, erh&ouml;ht (+)-Anti-Trans-B [a] PDE-dGuo-Formation in Zellen mit (-) behandelt-B [a] P-7,8-Dihydrodiol, aber nicht die ultimative karzinogen (+)-Anti-Trans-B [a] PDE. Damit erh&ouml;hte sich bis-Regelung der MRP4 zellul&auml;re Efflux (-)-B [a] P-7,8-Dihydrodiol, die DNA-Addukt-Bildung vermindert. Dies ist der erste Bericht identifiziert einen bestimmten WWS Efflux-Transporter, der DNA-Sch&auml;den, die aus einer &ouml;kologischen karzinogen verringert.

Erfolgt mit breiter Widerstand Protein (MRP) 4 d&auml;mpft Benzo [a] pyren-vermittelte DNA-Addukt Bildung in menschlichen Bronchoalveol&auml;re H358 Zellen.

Proteina resistenza farmacologiche (MRP) 4, un trasportatore di ATP-binding cassette (ABC), ha vasto substrato specificit&agrave;. Facilita il trasporto dei sali biliari coniugati, steroidi coniugati, analoghi nucleosidici, eicosanoidi e farmaci cardiovascolari. Recenti studi in cellule di carcinoma epatico e negli epatociti hanno mostrato che MRP4 espressione &egrave; regolata dal recettore idrocarburo arilico (AhR) e fattore nucleare E2-related factor 2 (Nrf2). AhR ha un&#39;importanza particolare nel polmone ed &egrave; pi&ugrave; comunemente associato con up-regolazione del citocromo P-450 CYP-mediata metabolismo del benzo [a] pirene (B[a]P) di intermedi reattivi. Trattamento di H358, broncoalveolare umano, cellule con 2.378-tetraclorodibenzo-p-diossina (TCDD) o (-)-benzo[a]pyrene-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), la prossima cancerogeno di P B [a], ha rivelato che espressione MRP4 &egrave; stata aumentata rispetto al controllo. Questo ha suggerito che MRP4 espressione potrebbe contribuire alla diminuzione paradossale in (+)-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydrobenzo[a]pyrene-2&#39;-deoxyguanosine ((+)-anti-trans-B[a]PDE-dGuo) addotti del DNA osservato nelle cellule trattate TCDD H358. Ora abbiamo trovato che la diminuita espressione MRP4 indotta da una short hairpin RNA (shRNA), o l&#39;inibizione chimica con probenecid, aumentato (+)-anti-trans-formazione B [a] PDE-dGuo nelle cellule trattate con (-)-B [a] P--diidrodiolo, ma non l&#39;ultimo cancerogeno (+)-anti-trans-B [a] PDE. Cos&igrave;, up-regulation di MRP4 aumentato efflusso cellulare di (-)-B [a] P--diidrodiolo, che ha attenuato la formazione di addotti del DNA. Questa &egrave; la prima relazione identifica un trasportatore di efflusso MRP specifico che riduce i danni al DNA derivante da un cancerogeno ambientale.

Proteina multidrug resistenza (MRP) 4 attenua il benzo [a] pirene-mediata addotti del DNA formazione nelle cellule umane broncoalveolare H358.

&#x591A;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF08;MRP&#xFF09;4&#x3001;ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;ABC&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x3044;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x80C6;&#x6C41;&#x9178;&#x5869;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3001;&#x5171;&#x5F79;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30B7;&#x30C9;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3001;&#x30A8;&#x30A4;&#x30B3;&#x30B5;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x809D;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MRP4&#x5F0F;&#x304C;&#x30A2;&#x30EA;&#x30FC;&#x30EB;&#x70AD;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;AhR&#xFF09;&#x3068;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;E2&#x95A2;&#x9023;&#x56E0;&#x5B50;2&#xFF08;NRF2&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; AhR&#x306F;&#x80BA;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P-450&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF08;CYP&#xFF09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;&#xFF08;B [1] P&#xFF09;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3002; H358&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;&#x3001;2,3,7,8  - &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30B8;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;-p-&#x30C0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;TCDD&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08; - &#xFF09; - &#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;-7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;-7,8  - &#x30B8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;B [ P--7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#xFF09;&#x3001;B [1] P&#x306E;&#x8FD1;&#x508D;&#x306B;&#x767A;&#x764C;&#x6027;&#x7269;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;MRP4&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x5BFE;&#x7167;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;MRP4&#x5F0F;&#x304C;&#x3067;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#xFF08;+&#xFF09;-7,8  - &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9,10  - &#x30A8;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;-7 ,8,9,10&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3;-2&#x26;#39;-&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1] PDE-dGuo&#xFF09;TCDD&#x51E6;&#x7406;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x77ED;&#x3044;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#xFF08;shRNA&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5316;&#x5B66;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D9;&#x30CD;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;MRP4&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [1]&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PDE-dGuo&#x5F62;&#x6210;&#xFF08; - &#xFF09;-B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7A76;&#x6975;&#x767A;&#x764C;&#x7269;&#x8CEA;&#xFF08;+&#xFF09;&#x6297;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-B [a]&#x306E;PDE&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;-B [1] P-7 ,8-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B8;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x5F31;&#x6BD2;&#x5316;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;MRP4&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D41;&#x51FA;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x767A;&#x764C;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;MRP&#x6392;&#x51FA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x8010;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x591A;&#xFF08;MRP&#xFF09;4&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x6C17;&#x7BA1;&#x652F;H358&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;[a]&#x30D4;&#x30EC;&#x30F3; - &#x5A92;&#x4ECB;DNA&#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;

&#xD6C4;&#xCC9C;&#xC131; &#xC800;&#xD56D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MRP) 4, ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; (ABC) &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB2F4; &#xC999; &#xC18C;&#xAE08; conjugates, &#xD65C;&#xC6A9;&#xB41C; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;, &#xB274; &#xD074;&#xB808; &#xC624; &#xC2DC;&#xB4DC; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;, eicosanoids, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2EC;&#xD608; &#xAD00;&#xACC4; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC218;&#xC1A1;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C;. &#xAC04; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; hepatocytes&#xC5D0; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; MRP4 &#xC2DD; aryl &#xD0C4; &#xD654; &#xC218;&#xC18C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (a h r) &#xD575; &#xC778;&#xC790; e 2 &#xAD00;&#xB828; &#xC694;&#xC778; 2 (Nrf2)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xD588;&#xB2E4;. A h r &#xD3D0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xACE0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; benzo (&#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4; B[a]P) [a] pyrene&#xC758; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P 450 CYP &#xC911;&#xC7AC; &#xB300;&#xC0AC; &#xCD5C;&#xB300; &#xB808; &#xADE4;. H358, &#xC778;&#xAC04; bronchoalveolar, 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-&#xB2E4;&#xC774;&#xC625;&#xC2E0; (&#xC99D;&#xB300;) &#xB610;&#xB294; (-)-benzo[a]pyrene-7,8-dihydro-7,8-diol (B[a]P-7,8-dihydrodiol), MRP4 &#xC2DD; &#xD1B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD600; [a] B p proximate &#xBC1C;&#xC554; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC140;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;. &#xC774; MRP4 &#xC2DD; (+)-7,8-dihydroxy-9,10-epoxy-7,8,9,10-tetrahydrobenzo[a]pyrene-2&#39;-deoxyguanosine ((+)-anti-trans-B[a]PDE-dGuo) &#xC99D;&#xB300; &#xCDE8;&#xAE09; H358 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; DNA &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C; &#xC5ED;&#xC124;&#xC801; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC9C0;&#xAE08; &#xAC10;&#xC18C; MRP4 &#xC2DD; &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA (shRNA) &#xB610;&#xB294; probenecid, &#xC99D;&#xAC00; (+)&#xC640; &#xD654;&#xD559; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xC548;&#xD2F0;-&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-&#xC140;&#xC5D0; B [a] PDE dGuo &#xD615;&#xC131; (-)&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;-[a] B P-7, 8-dihydrodiol, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C;&#xC554; (+)-&#xC548;&#xD2F0;-&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-B [a] PDE. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC5C5;-&#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; mrp4&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; (-)&#xC758; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xACBD;&#xACFC;-DNA adduct &#xD615;&#xC131; &#xAC10;&#xC1E0; B [a] P-7, 8 &#xC6D4; dihydrodiol &#xC77C;. &#xC774;&#xAC83;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD658;&#xACBD; &#xBC1C;&#xC554; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; MRP &#xACBD;&#xACFC; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Multidrug &#xC800;&#xD56D;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MRP) 4 [a] benzo pyrene &#xC911;&#xC7AC; DNA adduct &#xD615;&#xC131; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; bronchoalveolar H358 &#xC140;&#xC758; &#xC57D;&#xD654;.

Multi-resistencia a la prote&#xED;na de drogas (MRP) 4, un ATP-binding cassette (ABC) transportador, tiene una amplia especificidad de sustrato. Facilita el transporte de los conjugados de sales biliares, esteroides conjugados, an&#xE1;logos de los nucle&#xF3;sidos, los eicosanoides, y las drogas cardiovasculares. Estudios recientes en c&#xE9;lulas de carcinoma de h&#xED;gado y hepatocitos mostraron que MRP4 expresi&#xF3;n est&#xE1; regulada por el receptor de aril hidrocarburos (AHR) y el factor nuclear E2 relacionadas con el factor 2 (Nrf2). La AHR tiene particular importancia en el pulm&#xF3;n y es m&#xE1;s com&#xFA;nmente asociado con la regulaci&#xF3;n de la citocromo P-450 (CYP)-mediada por el metabolismo de benzo [a] pireno (B [a] P) a intermediarios reactivos. Tratamiento de la H358, broncoalveolar humana, las c&#xE9;lulas con 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) o (-)-benzo [a] pireno-7 ,8-dihidro-7 ,8-diol (B [ a] P-7 ,8-dihidrodiol), el agente carcin&#xF3;geno pr&#xF3;xima de B [a] P, revel&#xF3; que MRP4 expresi&#xF3;n se increment&#xF3; en comparaci&#xF3;n con el control. Esto sugiere que MRP4 expresi&#xF3;n podr&#xED;a contribuir a la disminuci&#xF3;n parad&#xF3;jica en la (+) -7,8-dihidroxi-9 ,10-epoxi-7 ,8,9,10-tetrahidrobenzo [a] pireno-2&#x26;#39;-desoxiguanosina ((+) anti-trans-B [a] de la PDE-dGuo) aductos de ADN se observan en la TCDD tratados con c&#xE9;lulas H358. Se ha encontrado ahora que la disminuci&#xF3;n de MRP4 expresi&#xF3;n inducida por un corto horquilla RNA (shRNA), o la inhibici&#xF3;n qu&#xED;mica con probenecida, el aumento de (+)-trans-anti-B [a] la PDE-dGuo formaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas tratadas con (-)-B [a] P-7 ,8-dihidrodiol, pero no la &#xFA;ltima carcin&#xF3;geno (+)-trans-anti-B [a] PDE. Por lo tanto, sobre regulaci&#xF3;n de MRP4 mayor flujo de salida de celular de (-)-B [a] P-7 ,8-dihidrodiol, lo que aten&#xFA;a la formaci&#xF3;n de aductos de ADN. Este es el primer informe la identificaci&#xF3;n de un determinado MRP transportadora de salida que reduce el da&#xF1;o en el ADN derivado de un carcin&#xF3;geno ambiental.

La prote&#xED;na de resistencia multidroga (MRP) 4 Aten&#xFA;a el benzo [a] pireno mediada por ADN-aducto de Formaci&#xF3;n en humanos broncoalveolar c&#xE9;lulas H358

Stacy L. Gelhaus

Centers for Cancer Pharmacology and Excellence in Environmental Toxicology,
Department of Pharmacology

University of Pennsylvania

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

Stacy L. Gelhaus

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University of Pennsylvania

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

Centers for Cancer Pharmacology and Excellence in Environmental Toxicology,
Department of Pharmacology