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Synthetic Spider Silk Production on a Laboratory Scale

As society progresses and resources become scarcer, it is becoming increasingly important to cultivate new technologies that engineer next generation ...

University of the Pacific

&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x7684;&#x5C55;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x53CA;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x6700;&#x5206;&#x5B50;&#x7814;&#x7A76;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E;&#x4ECE;&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x548C;&#x6355;&#x83B7;&#x4E1D;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x7C7B;&#x578B;&#x6D89;&#x53CA;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; fibroins&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3001; &#x4E09;&#x4E1D;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x9ED1;&#x5BE1;&#x5987;&#x8718;&#x86DB;&#xFF0C;&#x7BA1;&#x7406;&#x8D6B;&#x65AF;&#x73C0;&#x52D2;&#x65AF;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5C0F;&#x548C;&#x5927;&#x76F4;&#x5F84;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53D8;&#x6027;&#x5242; 8 M &#x76D0;&#x9178;&#x80CD;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;-SDS &#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x94F6;&#x67D3;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7EC4;&#x4EF6; 100 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x53CC;&#x4F53;&#x3002;&#x7ED3;&#x5408;&#x57FA;&#x8D28;&#x8F85;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x89E3;&#x5438;&#x7535;&#x79BB;&#x4E32;&#x8054;&#x7684;&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3001; &#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5206;&#x79BB;&#x57FA;&#x56E0;&#x79F0;&#x4E3A; ecp-1&#xFF0C;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x5206;&#x7684; 100 kDa &#x7269;&#x79CD;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;NCBInr &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6570;&#x636E;&#x57FA;&#x4F7F;&#x7528; ECP 1 &#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x9AD8;&#x7089;&#x641C;&#x7D22;&#x4ECE;&#x8718;&#x86DB;&#x548C;&#x8695;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x5185; ECP-1 &#x5411; fibroins &#x900F;&#x9732;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5730;&#x533A;&#x6240;&#x8F7D;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x4E1D;&#x56FE;&#x6848; poly(Ala) &#x548C; poly(Gly-Ala)&#xFF0C;&#x4F46;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x5408;&#x594F;&#x91CD;&#x590D;&#x627E; ECP-1 &#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8868;&#x8FBE; fibroins &#x7684;&#x4E1D;&#x817A;&#x9650;&#x5236;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;ECP 1 &#x88AB;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x751F;&#x4EA7; tubuliform &#x817A;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E3B;&#x8981;&#x548C;&#x6B21;&#x8981;&#x58F6;&#x8179;&#x817A;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x8F83;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;ECP 1 &#x5355;&#x4F53;&#x5355;&#x4F4D;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x5BCC;&#x542B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x88C5;&#x914D;&#x6210;&#x9AD8;&#x805A;&#x5408;&#x7ED3;&#x6784;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x65B0;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E00;&#x7C7B;&#x65B0;&#x7684;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7279;&#x8272;&#x4E0E;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;

&#x86CB;&#x6848;&#x86CB;&#x767D;-1&#x3002;&#x4E00;&#x7C7B;&#x65B0;&#x7684;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x5177;&#x6709;&#x4ECE;&#x7BA1;&#x7406;&#x8D6B;&#x65AF;&#x73C0;&#x52D2;&#x65AF;&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x6837;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

Spiders produce multiple types of silk that exhibit diverse mechanical properties and biological functions. Most molecular studies of spider silk have focused on fibroins from dragline silk and capture silk, two important silk types involved in the survival of the spider. In our studies we have focused on the characterization of egg case silk, a third silk fiber produced by the black widow spider, Latrodectus hesperus. Analysis of the physical structure of egg case silk using scanning electron microscopy demonstrates the presence of small and large diameter fibers. By using the strong protein denaturant 8 M guanidine hydrochloride to solubilize the fibers, we demonstrated by SDS-PAGE and protein silver staining that an abundant component of egg case silk is a 100-kDa protein doublet. Combining matrix-assisted laser desorption ionization tandem time-of-flight mass spectrometry and reverse genetics, we have isolated a novel gene called ecp-1, which encodes for one of the protein components of the 100-kDa species. BLAST searches of the NCBInr protein data base using the primary sequence of ECP-1 revealed similarity to fibroins from spiders and silkworms, which mapped to two distinct regions within the ECP-1. These regions contained the conserved repetitive fibroin motifs poly(Ala) and poly(Gly-Ala), but surprisingly, no larger ensemble repeats could be identified within the primary sequence of ECP-1. Consistent with silk gland-restricted patterns of expression for fibroins, ECP-1 was demonstrated to be predominantly produced in the tubuliform gland, with lower levels detected in the major and minor ampullate glands. ECP-1 monomeric units were also shown to assemble into higher aggregate structures through the formation of disulfide bonds via a unique cysteine-rich N-terminal region. Collectively, our findings provide new insight into the components of egg case silk and identify a new class of silk proteins with distinctive molecular features relative to traditional members of the spider silk gene family.

Egg case protein-1. A new class of silk proteins with fibroin-like properties from the spider Latrodectus hesperus.

Les araign&#xE9;es produisent plusieurs types de soie qui pr&#xE9;sentent diverses propri&#xE9;t&#xE9;s m&#xE9;caniques et les fonctions biologiques. La plupart des &#xE9;tudes mol&#xE9;culaires de la soie d&#x26;#39;araign&#xE9;e ont port&#xE9; sur de la soie fibroins pelle &#xE0; benne tra&#xEE;nante et de la soie de capture, deux types de soie importantes impliqu&#xE9;es dans la survie de l&#x26;#39;araign&#xE9;e. Dans nos &#xE9;tudes nous nous sommes concentr&#xE9;s sur la caract&#xE9;risation de la soie cas oeuf, une fibre de soie produites dans le tiers par l&#x26;#39;araign&#xE9;e veuve noire, Latrodectus hesperus. Analyse de la structure physique de la soie cas oeuf en utilisant la microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage montre la pr&#xE9;sence de fibres d&#x26;#39;un diam&#xE8;tre de petites et grandes. En utilisant la prot&#xE9;ine forte d&#xE9;naturant 8 M de chlorhydrate de guanidine pour solubiliser les fibres, on a d&#xE9;montr&#xE9; par SDS-PAGE et coloration &#xE0; l&#x26;#39;argent prot&#xE9;ine qu &#x26;#39;un composant riche en soie cas oeuf est un doublet de prot&#xE9;ine de 100 kDa. La combinaison de laser assist&#xE9;e par matrice d&#x26;#39;ionisation d&#xE9;sorption spectrom&#xE9;trie de masse tandem temps de vol et de la g&#xE9;n&#xE9;tique inverse, nous avons isol&#xE9; un nouveau g&#xE8;ne appel&#xE9; ecp-1, qui code pour l&#x26;#39;un des composants prot&#xE9;iques des esp&#xE8;ces de 100 kDa. Des recherches BLAST de la base de donn&#xE9;es de prot&#xE9;ines en utilisant NCBInr la s&#xE9;quence primaire de l&#x26;#39;ECP-1 a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une similitude &#xE0; fibroins des araign&#xE9;es et des vers &#xE0; soie, qui mapp&#xE9;s &#xE0; deux r&#xE9;gions distinctes au sein de l&#x26;#39;ECP-1. Ces r&#xE9;gions figurent l&#x26;#39;conserv&#xE9; r&#xE9;p&#xE9;titif fibro&#xEF;ne motifs poly (Ala) et le poly (Gly-Ala), mais &#xE9;tonnamment, pas de r&#xE9;p&#xE9;titions d&#x26;#39;ensemble plus importants pourraient &#xEA;tre identifi&#xE9;s au sein de la s&#xE9;quence primaire de l&#x26;#39;ECP-1. Conform&#xE9;ment &#xE0; la soie glande restriction des modes d&#x26;#39;expression pour fibroins, ECP-1 a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; &#xEA;tre principalement produite par la glande tubuliform, avec des niveaux inf&#xE9;rieurs d&#xE9;tect&#xE9;es dans les glandes ampullaires majeures et mineures. ECP-1 unit&#xE9;s monom&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;galement montr&#xE9; &#xE0; assembler en structures sup&#xE9;rieures agr&#xE9;g&#xE9;s &#xE0; travers la formation de ponts disulfures par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;un unique riche en cyst&#xE9;ine r&#xE9;gion N-terminale. Collectivement, nos r&#xE9;sultats fournissent un nouvel &#xE9;clairage sur les composantes de la soie cas d&#x26;#39;&#x153;ufs et d&#x26;#39;identifier une nouvelle classe de prot&#xE9;ines de soie avec distinctifs caract&#xE9;ristiques mol&#xE9;culaires relatives aux membres traditionnels de la famille araign&#xE9;e g&#xE8;ne de la soie.

Caisse d&#x26;#39;oeufs de Protein-1. Une nouvelle classe de prot&#xE9;ines de soie avec Fibro&#xEF;ne-comme Propri&#xE9;t&#xE9;s dans le Hesperus araign&#xE9;e Latrodectus

Egg bei Protein-1. Eine neue Klasse von Seidenproteinen mit Fibroin-&#xE4;hnlichen Eigenschaften aus der Spinne Latrodectus Hesperus.

Ragni producono pi&ugrave; tipi di seta che presentano diverse caratteristiche meccaniche e funzioni biologiche. Studi molecolari pi&ugrave; di seta di ragno sono concentrati su fibroins da dragline seta e seta di cattura, due importanti tipi di seta coinvolti nella sopravvivenza del ragno. Nei nostri studi ci hanno concentrato sulla caratterizzazione di uovo caso seta, un terzo di seta fibra prodotta dal ragno vedova nera, Latrodectus hesperus. Analisi della struttura fisica dell&#39;uovo caso seta mediante scanning electron microscopy dimostra la presenza di fibre di piccolo e grande diametro. Utilizzando il cloridrato della guanidina forte proteina denaturante 8 M per solubilizzare le fibre, abbiamo dimostrato da SDS-PAGE e proteina d&#39;argento colorazione che un&#39;abbondante componente dell&#39;uovo caso seta &egrave; un doppietto di proteina di 100 kDa. Combinando matrix-assisted laser desorption ionizzazione tempo-di-volo in tandem mass spectrometry e reverse genetics, abbiamo isolato un gene romanzo chiamato ecp-1, che codifica per uno dei componenti della specie 100-kDa proteina. Ricerche abbattitori di NCBInr della proteina base-dati utilizzando la sequenza primaria di ECP-1 ha rivelato la somiglianza a fibroins da ragni e bachi da seta, che associati a due regioni distinte all&#39;interno dell&#39;ECP-1. Queste regioni contenevano il conservato fibroin ripetitivi motivi poly(Ala) e poly(Gly-Ala), ma sorprendentemente, ripetizioni di ensemble pi&ugrave; grande non potrebbero essere identificati all&#39;interno della sequenza primaria di ECP-1. Coerente con i modelli limitati da seta ghiandola dell&#39;espressione per fibroins, ECP-1 &egrave; stato dimostrato essere prevalentemente prodotto nella ghiandola tubuliform, con i livelli pi&ugrave; bassi rilevati nelle ghiandole ampullate maggiori e minori. ECP-1 unit&agrave; monomeriche sono stati mostrati anche da assemblare in strutture di aggregazione superiore attraverso la formazione di legami bisolfurico tramite un&#39;unica regione N-terminale ricca di cisteina. Collettivamente, i nostri risultati forniscono nuove nei componenti dell&#39;uovo caso seta e identificano una nuova classe di proteine della seta con caratteristiche distintive molecolare rispetto al tradizionali membri della famiglia genica seta ragno.

Caso Egg protein-1. Una nuova classe di proteine della seta fibroin-come propriet&agrave; da ragno Latrodectus hesperus.

&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30C0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x7CF8;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x7D79;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D79;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x3001;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x5C5E;&#x91D1;&#x661F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B2C;&#x4E09;&#x7D79;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x898F;&#x6A21;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x5F84;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3092;&#x53EF;&#x6EB6;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5909;&#x6027;&#x5264;8 M&#x5869;&#x9178;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;100 kDa&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;SDS-PAGE&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9280;&#x67D3;&#x8272;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x652F;&#x63F4;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8131;&#x96E2;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x578B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3068;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;100-kDa&#x306E;&#x7A2E;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;ECP-1&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002; ECP-1&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;NCBInr&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;BLAST&#x691C;&#x7D22;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ECP-1&#x5185;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30E2;&#x3068;&#x30AB;&#x30A4;&#x30B3;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x53CD;&#x5FA9;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;ALA&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;&#x306E;Gly-Ala&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3066;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x304C;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3055;ECP-1&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x5185;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5F0F;&#x306E;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x817A;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;ECP-1&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x30E1;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;ampullate&#x817A;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4F4E;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x817A;&#x3067;&#x7523;&#x751F;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; ECP-1&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x5358;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5BCC;&#x3080;N&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x7CF8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3078;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5099;&#x3048;&#x305F;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;A-1&#x3002;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30C0;&#x30FC;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x5C5E;&#x91D1;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;

&#xAC70;&#xBBF8; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC131;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC885;&#xB958;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xAC70;&#xBBF8; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBD84;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB7EC;&#xBC84;&#xBC34;&#xB4DC; &#xC2E4;&#xD06C; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC885;&#xB958;&#xB294; &#xAC70;&#xBBF8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xCEA1;&#xCC98; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; fibroins&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD98; &#xC8FC;, &#xC81C; 3 &#xC2E4; Latrodectus &#xAC1C;&#xBC25; &#xAC80;&#xC740; &#xBD80; &#xAC70;&#xBBF8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC12C;&#xC720;. &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xD06C;&#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC758; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC15;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; denaturant 8 M guanidine &#xC5FC; &#xC12C;&#xC720; solubilize&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; SDS &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC758; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; 100 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; doublet &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC870; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD0C8; &#xCC29; &#xC774;&#xC628;&#xD654; &#xD0E0;&#xB364; &#xC2DC;&#xAC04;--&#xBE44;&#xD589;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;, ecp-1, 100 kDa &#xC885;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC774;&#xB77C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. NCBInr &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB370;&#xC774;&#xD130; ECP-1&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xAC70;&#xBBF8; &#xBC0F; &#xB204;&#xC5D0; ECP 1 &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xB450; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; fibroins &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; fibroin &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; poly(Ala) &#xBC0F; poly(Gly-Ala), &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC544;&#xB2C8; &#xB354; &#xD070; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xBC18;&#xBCF5; ECP-1&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Fibroins&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xD328;&#xD134; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC120; &#xC81C;&#xD55C; &#xC77C;&#xCE58;, ECP 1 &#xC8FC; &#xB208;&#xAE08;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC870; ampullate &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; tubuliform &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418; &#xACE0; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. ECP 1 monomeric &#xB2E8;&#xC704; &#xB610;&#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xD669;&#xD654;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC9D1;&#xACC4; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xCE6D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xAC70;&#xBBF8; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC9C4; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD68C;&#xC6D0; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2E4;&#xD06C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACC4;&#xB780;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-1&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC70;&#xBBF8; Latrodectus &#xAC1C;&#xBC25;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; fibroin &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC2E4;&#xD06C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;.

Las ara&#xF1;as producen varios tipos de seda que presentan diversas propiedades mec&#xE1;nicas y funciones biol&#xF3;gicas. Mayor&#xED;a de los estudios moleculares de la seda de ara&#xF1;a se han centrado en fibroins de la seda y la seda Dragline de captura, dos tipos de seda importantes que intervienen en la supervivencia de la ara&#xF1;a. En nuestros estudios nos hemos centrado en la caracterizaci&#xF3;n de la seda el caso del huevo, una fibra de seda tercera producida por la ara&#xF1;a viuda negro, Latrodectus hesperus. An&#xE1;lisis de la estructura f&#xED;sica de seda huevo caso mediante microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido demuestra la presencia de fibras de di&#xE1;metro peque&#xF1;o y grande. Mediante el uso de la prote&#xED;na fuerte desnaturalizante 8 M de hidrocloruro de guanidina para solubilizar las fibras, hemos demostrado por SDS-PAGE y tinci&#xF3;n con plata prote&#xED;na que un componente abundante de seda huevo caso es un doblete prote&#xED;na 100-kDa. La combinaci&#xF3;n de matriz asistida por l&#xE1;ser de ionizaci&#xF3;n de desorci&#xF3;n t&#xE1;ndem tiempo de vuelo espectrometr&#xED;a de masas y la gen&#xE9;tica inversa, hemos aislado un nuevo gen llamado ECP-1, que codifica para uno de los componentes proteicos de la especie 100-kDa. BLAST b&#xFA;squedas de la prote&#xED;na NCBInr base de datos usando la secuencia primaria de la PAC-1 revel&#xF3; similitud con fibroins de las ara&#xF1;as y los gusanos de seda, que se asignan a dos regiones distintas dentro de la PAC-1. Estas regiones conservadas conten&#xED;a el repetitivo fibro&#xED;na motivos poli (Ala) y poli (Gly-Ala), pero, sorprendentemente, no se repite conjunto m&#xE1;s amplio podr&#xED;a ser identificado dentro de la secuencia primaria de la PAC-1. De acuerdo con seda restringidas gl&#xE1;ndula patrones de expresi&#xF3;n de fibroins, ECP-1 se ha demostrado que se produce principalmente en la gl&#xE1;ndula tubuliform, con niveles m&#xE1;s bajos detectados en las gl&#xE1;ndulas ampullate mayores y menores. ECP-1 unidades monom&#xE9;ricas se muestra tambi&#xE9;n para montar en mayores estructuras agregadas a trav&#xE9;s de la formaci&#xF3;n de enlaces disulfuro a trav&#xE9;s de una &#xFA;nica rica en ciste&#xED;na regi&#xF3;n N-terminal. En conjunto, nuestros resultados proporcionan una nueva visi&#xF3;n de los componentes de la seda de huevo caso e identificar una nueva clase de prote&#xED;nas de la seda, con distintas caracter&#xED;sticas moleculares en relaci&#xF3;n con los miembros tradicionales de la familia de genes de seda de ara&#xF1;a.

Huevo caso la prote&#xED;na-1. Una nueva clase de prote&#xED;nas de seda con la fibro&#xED;na propiedades similares a las de la ara&#xF1;a Latrodectus Hesperus

&#x57FA;&#x672C;&#x87BA;&#x65CB;-&#x73AF;-&#x87BA;&#x65CB; (bHLH) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x90FD;&#x9700;&#x8981;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x9AA8;&#x91CF;&#x3001; &#x6210;&#x808C;&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;&#x6027;&#x522B;&#x51B3;&#x5B9A;&#x3002;&#x7B5B;&#x9009;&#x4ECE;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x751F;&#x4EA7;&#x51C6;&#x5907; cDNA &#x6587;&#x5E93;&#x7684;&#x9ED1;&#x5BE1;&#x5987;&#x8718;&#x86DB;&#x817A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x540D;&#x4E3A; SGSF &#x7684; bHLH &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;BHLH &#x533A;&#x5185;&#xFF0C;SGSF &#x663E;&#x793A;&#x91CD;&#x5927;&#x517B;&#x62A4;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6; HLH &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x679C;&#x8747;&#x679C;&#x8747; achaete &#x548C;&#x6025;&#x8FDB;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E09;&#x79CD; HLH &#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x9884;&#x6D4B;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;SGSF &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC; tubuliform &#x548C;&#x5927;&#x58F6;&#x8179;&#x817A;&#x7684;&#x817A;&#x4F53;&#x3002;SGSF &#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E0E; E &#x86CB;&#x767D;&#x3001; E47&#xFF0C;&#x9ED1;&#x8179;&#x675F;&#x7F1A; E &#x6846;&#x5143;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5374;&#x65E0;&#x6CD5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F5C;&#x4E3A; homodimer &#x8FD9;&#x4E2A;&#x6BCD;&#x9898;&#x3002;SGSF &#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x51CF;&#x8F7B; E47 homodimers &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6838;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;SGSF &#x8868;&#x793A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x793A;&#x4F8B;&#x7684;&#x4E1D;&#x817A;&#x9650;&#x5236; bHLH &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8868;&#x660E; SGSF &#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x8C03;&#x8282;&#x8718;&#x86DB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x63A7;&#x5236;&#x4E1D;&#x817A;&#x5F62;&#x6210;&#x6216;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x4ECE;&#x9ED1;&#x5BE1;&#x5987;&#x8718;&#x86DB;&#xFF0C;&#x8D6B;&#x65AF;&#x73C0;&#x52D2;&#x65AF;&#x7BA1;&#x7406;&#x4E0E;&#x4E1D;&#x817A;&#x7C7B;&#x65B0;&#x578B;&#x4E8C; bHLH &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8868;&#x5F81;&#x9650;&#x5236;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

Members of the basic helix-loop-helix (bHLH) family are required for a number of different developmental pathways, including lymphopoiesis, myogenesis, neurogenesis, and sex determination. Screening a cDNA library prepared from silk-producing glands of the black widow spider, we have identified a new bHLH transcription factor named SGSF. Within the bHLH region, SGSF showed considerable conservation with other HLH proteins, including Drosophila melanogaster achaete and scute, as well as three HLH proteins identified by gene prediction programs. The expression pattern of SGSF was restricted to a subset of silk-producing glands, which include the tubuliform and major ampullate glands. SGSF was capable of binding an E-box element as a heterodimer with the E protein, E47, but was unable to bind this motif as a homodimer. SGSF was demonstrated to be a nuclear transcription factor capable of attenuating the transactivation of E47 homodimers in mammalian cells. SGSF represents the first example of a silk gland-restricted bHLH protein, and its expression pattern suggests that SGSF plays a role in regulating differentiation of cells in the spider that control silk gland formation or egg case silk gene expression.

Characterization of a novel class II bHLH transcription factor from the black widow spider, Latrodectus hesperus, with silk-gland restricted patterns of expression.

Les membres de la base h&#xE9;lice-boucle-h&#xE9;lice (bHLH) de la famille sont n&#xE9;cessaires pour un certain nombre de diff&#xE9;rentes voies de d&#xE9;veloppement, y compris la lymphopo&#xEF;&#xE8;se, myogen&#xE8;se, la neurogen&#xE8;se et la d&#xE9;termination du sexe. Le criblage d&#x26;#39;une banque d&#x26;#39;ADNc pr&#xE9;par&#xE9;e &#xE0; partir de soie des glandes productrices de l&#x26;#39;araign&#xE9;e veuve noire, nous avons identifi&#xE9; un facteur de transcription bHLH nouvelle nomm&#xE9;e SGSF. Dans la r&#xE9;gion bHLH, SGSF montr&#xE9; la conservation consid&#xE9;rable avec des prot&#xE9;ines HLH autres, y compris chez Drosophila melanogaster achaete et &#xE9;caille, ainsi que trois prot&#xE9;ines HLH identifi&#xE9;s par les programmes de pr&#xE9;diction de g&#xE8;nes. Le profil d&#x26;#39;expression de SGSF a &#xE9;t&#xE9; limit&#xE9; &#xE0; un sous-ensemble de la soie des glandes productrices, qui comprennent le tubuliform et les glandes ampullaires majeures. SGSF &#xE9;tait capable de se lier un &#xE9;l&#xE9;ment E-box comme un h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;re avec la prot&#xE9;ine E, E47, mais &#xE9;tait incapable de se lier ce motif comme un homodim&#xE8;re. SGSF a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; &#xEA;tre un facteur de transcription nucl&#xE9;aire capable d&#x26;#39;att&#xE9;nuer la transactivation du E47 homodim&#xE8;res dans les cellules de mammif&#xE8;res. SGSF repr&#xE9;sente le premier exemple d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine bHLH de soie glande restreint, et son profil d&#x26;#39;expression sugg&#xE8;re que SGSF joue un r&#xF4;le dans la r&#xE9;gulation de la diff&#xE9;renciation des cellules dans la glande araign&#xE9;e que la formation de contr&#xF4;le de la soie ou le cas oeuf g&#xE8;ne de soie expression.

Caract&#xE9;risation d&#x26;#39;un nouveau facteur de transcription bHLH de classe II de la veuve noire, Latrodectus Hesperus, avec Silk-glande caract&#xE8;re restreint de l&#x26;#39;expression

Charakterisierung einer neuartigen Klasse II bHLH Transkriptionsfaktors aus der Schwarzen Witwe, Latrodectus Hesperus, mit Seiden-Dr&#xFC;se beschr&#xE4;nkten Muster des Ausdrucks.

Membri della famiglia basic helix-loop-helix (bHLH) sono necessari per un numero di differenti percorsi dello sviluppo, tra cui linfopoiesi myogenesis, neurogenesi e determinazione del sesso. Lo screening di una libreria di cDNA preparata dalla produzione di seta ghiandole del ragno vedova nera, abbiamo identificato un nuovo fattore di trascrizione bHLH denominato SGSF. All&#39;interno della regione di bHLH, SGSF ha mostrato una notevole conservazione con altre proteine HLH, compreso ASCL4 melanogaster della drosofila e scute, cos&igrave; come tre proteine HLH identificate dai programmi di gene prediction. Il pattern di espressione dei SGSF &egrave; stato limitato a un sottoinsieme di produrre seta ghiandole, che comprendono le principali ghiandole ampullate e tubuliform. SGSF &egrave; stato in grado di associazione di un elemento E-box come un eterodimero con la proteina E, E47, ma fu in grado di associare questo motivo come un omodimero. SGSF &egrave; stato dimostrato essere un fattore di trascrizione nucleare in grado di attenuare la transattivazione di omodimeri E47 in cellule di mammifero. SGSF rappresenta il primo esempio di una proteina di seta ghiandola-restricted bHLH, e il pattern di espressione suggerisce che SGSF gioca un ruolo nella regolazione della differenziazione delle cellule nel ragno che controllo seta ghiandola formazione o uovo caso seta gene expression.

Caratterizzazione di un fattore di trascrizione bHLH romanzo classe II da ragno vedova nera, Latrodectus hesperus, con seta-ghiandola ristretto pattern di espressione.

&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; - &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; - &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;bHLH&#x578B;&#xFF09;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x7523;&#x751F;&#x3001;&#x7B4B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6027;&#x5225;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x306E;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x751F;&#x7523;&#x817A;&#x304B;&#x3089;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;cDNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;SGSF&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;bHLH&#x578B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; bHLH&#x578B;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x3067;&#x3001;SGSF&#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;achaete&#x3068;&#x7A1C;&#x9C57;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4E88;&#x6E2C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;3&#x3064;&#x306E;HLH&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;HLH&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x4FDD;&#x5168;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SGSF&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;ampullate&#x817A;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D79;&#x751F;&#x7523;&#x817A;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SGSF&#x306F;E47&#x3001;E&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;E-box&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30DB;&#x30E2;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SGSF&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;E47&#x30DB;&#x30E2;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6838;&#x5185;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SGSF&#x306F;&#x3001;&#x7D79;&#x7CF8;&#x817A;&#x5236;&#x9650;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;bHLH&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;SGSF&#x304C;&#x5236;&#x5FA1;&#x7D79;&#x7CF8;&#x817A;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3084;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D79;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5F0F;&#x306E;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x817A;&#x5236;&#x9650;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x3001;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x5C5E;&#x91D1;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;II bHLH&#x578B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xAE30;&#xBCF8; &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4;-&#xB8E8;&#xD504;-&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; (bHLH) &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xBA64;&#xBC84;&#xB294; lymphopoiesis, myogenesis, &#xC131;&#xCCB4;, &#xC131; &#xACB0;&#xC815; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xD06C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; cDNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC601; &#xAC80;&#xC740; &#xBD80; &#xAC70;&#xBBF8;&#xC758; &#xB540; &#xC0D8;, SGSF &#xB77C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; bHLH &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. BHLH &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4; SGSF Drosophila melanogaster achaete,&#xC73C;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC608;&#xCE21; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB418;&#xB294; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; HLH &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; HLH &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC808;&#xC57D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. SGSF&#xC758; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; tubuliform &#xB4F1; &#xC8FC;&#xC694; ampullate &#xB540; &#xC0D8; &#xBD84; &#xBE44;. SGSF E &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; E47, heterodimer&#xB85C; &#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xC790; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD560; &#xC218; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; homodimer&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SGSF &#xD575; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xACF5;&#xAC04;&#xC740; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; E47 homodimers transactivation &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. SGSF &#xC2E4;&#xD06C; &#xC120; &#xC81C;&#xD55C; bHLH &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC608;&#xC81C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xADF8; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC740; &#xADF8; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC120; &#xD615;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xB2EC;&#xAC40; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC9C4; &#xC2DD; SGSF &#xAC70;&#xBBF8;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xAC80;&#xC740; &#xBD80; &#xAC70;&#xBBF8; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC120;&#xC73C;&#xB85C; Latrodectus &#xAC1C;&#xBC25;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC124; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II bHLH &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xC2DD;&#xC758; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C;.

Los miembros de la base h&#xE9;lice-loop-h&#xE9;lice (bHLH) de la familia son necesarios para un n&#xFA;mero de diferentes v&#xED;as de desarrollo, incluyendo linfopoyesis, miog&#xE9;nesis, la neurog&#xE9;nesis, y la determinaci&#xF3;n del sexo. La detecci&#xF3;n de una biblioteca de cDNA preparada a partir de las gl&#xE1;ndulas productoras de seda de la ara&#xF1;a viuda negro, hemos identificado un factor de transcripci&#xF3;n bHLH nuevo llamado SGSF. Dentro de la regi&#xF3;n bHLH, SGSF mostr&#xF3; conservaci&#xF3;n considerable con prote&#xED;nas HLH otros, incluyendo Drosophila melanogaster achaete y escudo, as&#xED; como tres prote&#xED;nas HLH identificados por los programas de predicci&#xF3;n de genes. El patr&#xF3;n de expresi&#xF3;n de SGSF estaba restringido a un subconjunto de las gl&#xE1;ndulas productoras de seda, que incluyen la tubuliform y las gl&#xE1;ndulas principales ampullate. SGSF fue capaz de unirse a un elemento E-box como un heterod&#xED;mero con la prote&#xED;na E, E47, pero no pudo enlazar este motivo como un homod&#xED;mero. SGSF se demostr&#xF3; que era un factor de transcripci&#xF3;n nuclear capaz de atenuar la transactivaci&#xF3;n de E47 homod&#xED;meros en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros. SGSF representa el primer ejemplo de una prote&#xED;na de la seda bHLH gl&#xE1;ndula restringido, y su patr&#xF3;n de expresi&#xF3;n sugiere que SGSF juega un papel en la regulaci&#xF3;n de la diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de la ara&#xF1;a que la seda de control de formaci&#xF3;n de la gl&#xE1;ndula o el caso del huevo la expresi&#xF3;n de genes de seda.

Caracterizaci&#xF3;n de un nuevo factor de clase II transcripci&#xF3;n bHLH de la Viuda Negro Ara&#xF1;a, Latrodectus Hesperus, con los patrones de las gl&#xE1;ndulas de seda-restricci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n

Araneoid &#x8718;&#x86DB;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x8179;&#x90E8;&#x817A;&#x4F53;&#x5236;&#x9020;&#x6700;&#x591A;&#x4E03;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x4E1D;&#x7EF8;/&#x80F6;&#x6C34;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x86CB;&#x6848;&#x7EA4;&#x7EF4; &#xFF08;&#x4E3A;&#x86CB;&#x6848;&#x56CA;&#x76D6;&#x4E1D;&#xFF09; &#x548C;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EBF;&#x7A0B;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x4E1D;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E0D;&#x5148;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x8D28;&#x8C31; TOF &#x8D28;&#x8C31; (MS/MS) &#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x7528;&#x4E8E;&#x9694;&#x79BB;&#x7B2C;&#x4E00;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x547D;&#x540D;&#x4E3A; tubuliform &#x86DB;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D; 1 (TuSp1)&#xFF0C;&#x4ECE;&#x9ED1;&#x5BE1;&#x5987;&#x8718;&#x86DB;&#xFF0C;&#x7BA1;&#x7406;&#x8D6B;&#x65AF;&#x73C0;&#x52D2;&#x65AF;&#x3002;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x5206;&#x6790;&#x6F14;&#x793A; TuSp1 tubuliform &#x817A;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x539F;&#x6599;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x5BC6;&#x5207;&#x5BF9;&#x9F50;&#x7684; TuSp1&#xFF0C;&#x5B83;&#x652F;&#x6301; TuSp1 &#x8868;&#x793A;&#x86CB;&#x6848;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8BF4;&#x6CD5;&#x4ECE;&#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;TuSp1 &#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x8D28;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6; 184 &#x4E2D;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x5EF6;&#x7EF5;&#x7684;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; subrepeats&#xFF0C;&#x5360;&#x6B21;&#x8981;&#x58F6;&#x8179;&#x548C;&#x5927;&#x58F6;&#x8179;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5728; TuSp1 &#x4E2D;&#x7684;&#x4EBA;&#x6570;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;polyserine &#x5757;&#x548C;&#x77ED;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x7EF5;&#x5EF6;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x8FDB;&#x884C;&#x8FED;&#x4EE3;&#x5185;&#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x548C; (13) C &#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x5149;&#x8C31;&#x8868;&#x660E;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0; post-spun &#x7684;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x7EF8;&#x5728; beta &#x7248;&#x8868;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x3002;TuSp1 &#x91CD;&#x590D;&#x5355;&#x5143;&#x4E0D;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x91CF;&#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x5230;&#x4EFB;&#x4F55;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x4E1D;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; TuSp1 &#x9AD8;&#x5EA6;&#x5206;&#x6B67;&#x7684;&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x3002;

Araneoid &#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#xFF1A; &#x4E1D;&#x4E0E;&#x65B0;&#x578B;&#x5408;&#x594F;&#x91CD;&#x590D;&#x4ECE;&#x9ED1;&#x5BE1;&#x5987;&#x8718;&#x86DB;&#xFF0C;&#x8D6B;&#x65AF;&#x73C0;&#x52D2;&#x65AF;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;

Araneoid spiders use specialized abdominal glands to manufacture up to seven different protein-based silks/glues that have diverse physical properties. The fibroin sequences that encode egg case fibers (cover silk for the egg case sac) and the secondary structure of these threads have not been previously determined. In this study, MALDI tandem TOF mass spectrometry (MS/MS) and reverse genetics were used to isolate the first egg case fibroin, named tubuliform spidroin 1 (TuSp1), from the black widow spider, Latrodectus hesperus. Real-time quantitative PCR analysis demonstrates TuSp1 is selectively expressed in the tubuliform gland. Analysis of the amino acid composition of raw egg case silk closely aligns with the predicted amino acid composition from the primary sequence of TuSp1, which supports the assertion that TuSp1 represents a major component of egg case fibers. TuSp1 is composed of highly homogeneous repeats that are 184 amino acids in length. The long stretches of polyalanine and glycine-alanine subrepeats, which account for the crystalline regions of minor ampullate and major ampullate fibers, are very poorly represented in TuSp1. However, polyserine blocks and short polyalanine stretches were highly iterated within the primary sequence, and (13)C NMR spectroscopy demonstrated that the majority of alanine was found in a beta-sheet structure in post-spun egg case silk. The TuSp1 repeat unit does not display substantial sequence similarity to any previously described fibroin genes or proteins, suggesting that TuSp1 is a highly divergent member of the spider silk gene family.

Araneoid egg case silk: a fibroin with novel ensemble repeat units from the black widow spider, Latrodectus hesperus.

Araign&#xE9;es Araneoid utiliser sp&#xE9;cialis&#xE9;s glandes abdominales de fabriquer jusqu&#x26;#39;&#xE0; sept diff&#xE9;rents &#xE0; base de prot&#xE9;ines soies et colles qui ont diverses propri&#xE9;t&#xE9;s physiques. Les s&#xE9;quences qui codent pour des fibres de fibro&#xEF;ne de cas d&#x26;#39;&#x153;ufs (de soie de couverture pour le sac &#xE0; oeufs) et la structure secondaire de ces discussions n&#x26;#39;ont pas encore &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e. Dans cette &#xE9;tude, MALDI TOF spectrom&#xE9;trie de masse en tandem (MS / MS) et la g&#xE9;n&#xE9;tique inverse ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour isoler la fibro&#xEF;ne oeuf premier cas, le nom tubuliform spidroin 1 (TuSp1), de l&#x26;#39;araign&#xE9;e veuve noire, Latrodectus hesperus. Analyse en temps r&#xE9;el de PCR quantitative d&#xE9;montre TuSp1 est s&#xE9;lectivement exprim&#xE9; dans la glande tubuliform. Analyse de la composition en acides amin&#xE9;s de la soie brute oeuf cas &#xE9;troitement align&#xE9;e sur la composition en acides amin&#xE9;s pr&#xE9;dite &#xE0; partir de la s&#xE9;quence primaire de TuSp1, qui soutient l&#x26;#39;affirmation selon laquelle TuSp1 repr&#xE9;sente une composante majeure de fibres de cas d&#x26;#39;&#x153;ufs. TuSp1 est compos&#xE9; de r&#xE9;p&#xE9;titions tr&#xE8;s homog&#xE8;nes qui sont 184 acides amin&#xE9;s de longueur. Les longues &#xE9;tendues de polyalanine et de la glycine-alanine subrepeats, qui repr&#xE9;sentent les r&#xE9;gions cristallines de ampullaires mineures et majeures des fibres ampullaires, sont tr&#xE8;s mal repr&#xE9;sent&#xE9;es dans TuSp1. Cependant, les blocs et de courts tron&#xE7;ons polys&#xE9;rine polyalanine ont &#xE9;t&#xE9; fortement r&#xE9;it&#xE9;r&#xE9; au sein de la s&#xE9;quence primaire, et (13) C spectroscopie RMN a d&#xE9;montr&#xE9; que la majorit&#xE9; de l&#x26;#39;alanine a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; dans une structure en feuillets b&#xEA;ta en post-fil&#xE9; de soie cas oeuf. L&#x26;#39;unit&#xE9; de r&#xE9;p&#xE9;tition TuSp1 n&#x26;#39;affiche pas une similarit&#xE9; de s&#xE9;quence importante &#xE0; tous les g&#xE8;nes fibro&#xEF;ne d&#xE9;crits pr&#xE9;c&#xE9;demment ou des prot&#xE9;ines, ce qui sugg&#xE8;re que TuSp1 est un membre tr&#xE8;s divergente de la famille des araign&#xE9;es g&#xE8;ne de la soie.

Araneoid soie Caisse d&#x26;#39;oeufs: une Fibro&#xEF;ne avec nouveaux motifs r&#xE9;p&#xE9;titifs Ensemble de la Veuve noire, Latrodectus Hesperus

Araneoid Eih&#xFC;lle Seide: eine Fibroin mit neuartigen Ensemble wiederholenden Einheiten aus der Schwarzen Witwe, Latrodectus Hesperus.

Araneoid ragni utilizzano speciali ghiandole addominali per produrre fino a sette differenti basati su proteine sete/colle che hanno propriet&agrave; fisiche diverse. Le sequenze fibroin che codificano uovo caso fibre (coperchio seta per il sac dell&#39;uovo caso) e la struttura secondaria di queste discussioni non sono state determinate in precedenza. In questo studio, MALDI TOF massa spettrometria in tandem (MS/MS) e genetica inversa sono stati utilizzati per isolare il primo uovo caso fibroin, denominato tubuliform spidroin 1 (TuSp1), dal ragno vedova nera, Latrodectus hesperus. Analisi in tempo reale di PCR quantitativa dimostra che tusp1 &egrave; espresso in modo selettivo nella ghiandola tubuliform. Analisi della composizione in amminoacidi di seta cruda uovo caso strettamente si allinea con la composizione in amminoacidi previsto dalla sequenza primaria di TuSp1, che supporta l&#39;asserzione che TuSp1 rappresenta una componente importante delle fibre uovo caso. TuSp1 &egrave; composto da altamente omogenee si ripete che sono 184 amminoacidi di lunghezza. I lunghi tratti di polyalanine e glicina-alanina subrepeats, che rappresentano le regioni cristalline di minore ampullate e major ampullate fibre, sono molto scarsamente rappresentati in TuSp1. Tuttavia, polyserine blocchi e polyalanine brevi tratti erano altamente iterati all&#39;interno della sequenza principale, e la spettroscopia NMR C (13) hanno dimostrato che la maggior parte dell&#39;alanina &egrave; stata trovata in una struttura beta-foglio in seta post-spun caso di uovo. L&#39;unit&agrave; di ripetizione TuSp1 non visualizzare somiglianza sostanziale sequenza precedentemente descritte fibroin geni o proteine, suggerendo che TuSp1 &egrave; un membro altamente divergente la famiglia del gene seta di ragno.

Araneoid uovo caso seta: un fibroin con ensemble romanzo ripetere unit&agrave; dal ragno vedova nera, Latrodectus hesperus.

Araneoid&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30C0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;7&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;/&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x307E;&#x3067;&#x88FD;&#x9020;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x8179;&#x90E8;&#x306E;&#x817A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#xFF08;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x56A2;&#x306E;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MALDI TOF&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF08;MS / MS&#xFF09;&#x3068;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x3001;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x5C5E;&#x91D1;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;spidroin 1&#xFF08;TuSp1&#xFF09;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x3001;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x5B9A;&#x91CF;PCR&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;TuSp1&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x817A;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x5375;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;TuSp1&#x306F;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A2;&#x30B5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;TuSp1&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x304B;&#x3089;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7D44;&#x6210;&#x306B;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002; TuSp1&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306F;184&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5747;&#x8CEA;&#x306A;&#x53CD;&#x5FA9;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x30E1;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;ampullate ampullate&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3066;subrepeats&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x60AA;&#x3044;TuSp1&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;polyserine&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x77ED;&#x3044;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x5185;&#x306E;&#x53CD;&#x5FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#xFF08;13&#xFF09;C NMR&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D21;&#x7CF8;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D79;&#x306E;&#x3B2;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TuSp1&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x5358;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;TuSp1&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x7CF8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x5206;&#x5C90;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x914D;&#x5217;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

Araneoid&#x30A8;&#x30C3;&#x30B0;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#xFF1A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x3001;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x5C5E;&#x91D1;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x65B0;&#x898F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;

Araneoid &#xAC70;&#xBBF8; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xBCF5; &#xBD80; &#xB3D9;&#xB9E5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD5C;&#xB300; 7 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xBC18; &#xC2E4;&#xD06C;/&#xC811;&#xCC29;&#xC81C;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC81C;&#xC870;. &#xACC4;&#xB780;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC12C;&#xC720; (&#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; sac&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCEE4;&#xBC84; &#xC2E4;&#xD06C;)&#xC640; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2A4;&#xB808;&#xB4DC;&#xC758; &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD560; fibroin &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; MALDI &#xD0E0;&#xB364; TOF &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS/MS) &#xBC0F; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xAC80;&#xC740; &#xBD80; &#xAC70;&#xBBF8;, Latrodectus &#xAC1C;&#xBC25;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; tubuliform spidroin 1 (TuSp1) &#xB77C;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; fibroin &#xACA9;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC591;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; PCR &#xBD84;&#xC11D; TuSp1 tubuliform &#xC120; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xC2DC; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC9C0;&#xC6D0; TuSp1 &#xACC4;&#xB780;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC8FC;&#xC7A5; Tusp1&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC131;&#xBD84;&#xACFC; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xB82C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. TuSp1 &#xAE38;&#xC774; 184 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xADE0;&#xC9C8; &#xBC18;&#xBCF5; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC18C;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; ampullate ampullate &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; polyalanine&#xC640; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; subrepeats&#xC758; &#xAE34; &#xBED7; &#xAE30;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; Tusp1&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, polyserine &#xBE14;&#xB85D; &#xBC0F; &#xC9E7;&#xC740; polyalanine &#xBED7;&#xC5B4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; (13) C NMR &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; post-spun &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC2DC;&#xD2B8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. TuSp1 &#xBC18;&#xBCF5; &#xB2E8;&#xC704; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; fibroin &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, TuSp1 &#xAC70;&#xBBF8; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC9C4; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBD84;&#xAE30; &#xD68C;&#xC6D0; &#xC81C;&#xC548;.

Araneoid &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;: &#xC18C;&#xC124; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; fibroin &#xAC80;&#xC740; &#xBD80; &#xAC70;&#xBBF8;, Latrodectus &#xAC1C;&#xBC25;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ara&#xF1;as Araneoid uso especializado gl&#xE1;ndulas abdominales para la fabricaci&#xF3;n de hasta siete diferentes basados &#x200B;&#x200B;en prote&#xED;nas sedas o pegamentos que tienen diferentes propiedades f&#xED;sicas. Las secuencias que codifican fibro&#xED;na fibras de huevo de caso (seda cubierta por el saco caso de huevo) y la estructura secundaria de estos hilos no se han determinado previamente. En este estudio, MALDI TOF espectrometr&#xED;a de masas en t&#xE1;ndem (MS / MS) y la gen&#xE9;tica inversa se utiliza para aislar la fibro&#xED;na &#xF3;vulo primer caso, el nombre tubuliform spidroin 1 (TuSp1), de la ara&#xF1;a viuda negro, Latrodectus hesperus. Cuantitativa en tiempo real el an&#xE1;lisis de PCR demuestra TuSp1 se expresa selectivamente en la gl&#xE1;ndula tubuliform. An&#xE1;lisis de la composici&#xF3;n de amino&#xE1;cidos de seda cruda caso huevo estrechamente alinea con la composici&#xF3;n de amino&#xE1;cidos pronosticada a partir de la secuencia primaria de TuSp1, que apoya la afirmaci&#xF3;n de que TuSp1 representa un componente importante de las fibras de casos de huevo. TuSp1 se compone de repeticiones muy homog&#xE9;neos que son 184 amino&#xE1;cidos de longitud. Los largos tramos de polialanina y glicina-alanina subrepeats, que representan las regiones cristalinas de ampullate menores y mayores, las fibras ampullate est&#xE1;n muy poco representadas en TuSp1. Sin embargo, los bloques polyserine y cortos tramos polialanina se itera altamente dentro de la secuencia primaria, y (13) C espectroscop&#xED;a de RMN demuestra que la mayor&#xED;a de alanina se encontr&#xF3; en una estructura de l&#xE1;mina beta en la post-hilado de seda caso del huevo. La unidad de repetici&#xF3;n TuSp1 no muestra similitud de secuencia sustancial a ning&#xFA;n gen fibro&#xED;na anteriormente descritos o prote&#xED;nas, lo que sugiere que TuSp1 es un miembro altamente divergente de la familia de genes de ara&#xF1;a de seda.

Huevo Araneoid Seda de caso: una fibro&#xED;na con nuevas unidades Ensemble repetici&#xF3;n de la ara&#xF1;a Viuda Negro, Latrodectus Hesperus

&#x8718;&#x86DB;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x5176;&#x975E;&#x51E1;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x975E;&#x51E1;&#x7684;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x97E7;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x57FA;&#x8D28;&#x8F85;&#x52A9;&#x6FC0;&#x5149;&#x89E3;&#x5438;&#x7535;&#x79BB; &#xFF08;&#x9A6C;&#x5C14;&#x8FEA;) &#x4E32;&#x8054;&#x7684;&#x98DE;&#x884C;&#x65F6;&#x95F4; (TOF) &#x8D28;&#x8C31; (MS/MS) &#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x627E;&#x51FA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684; cDNA &#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4ECE;&#x9ED1;&#x5BE1;&#x5987;&#x8718;&#x86DB;&#xFF0C;&#x7BA1;&#x7406;&#x8D6B;&#x65AF;&#x73C0;&#x52D2;&#x65AF;&#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x86CB;&#x6848;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x4E3B;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 52%&#x8EAB;&#x4EFD;&#x5230;&#x86CB;&#x6848;&#x86CB;&#x767D; 1 (ECP-1&#xFF09; &#x4E1D;&#x6837;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x547D;&#x540D;&#x6B64;&#x56E0;&#x5B50;&#x86CB;&#x6848;&#x86CB;&#x767D; 2 (ECP-2&#xFF09;&#x3002;ECP-1 &#x548C; ECP 2 &#x8DEF;&#x7EBF;&#x4E0E; 16 Cys &#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x9996;&#x5148; 153 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5185;&#x627E;&#x5230;&#x8BC1;&#x660E;&#x603B;&#x7AD9;&#x3001; N &#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3002;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x5408;&#x594F;&#x91CD;&#x590D;&#x62A5;&#x544A; fibroins &#x5185;&#x53D1;&#x73B0;&#x5DEE;&#x6D3E; ECP-2&#x3001; &#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x4F46;&#x5206;&#x6563;&#x7684;&#x5757;&#x7684;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5728;&#x573A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7B97;&#x6CD5;&#x91CD;&#x590D; C &#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x53CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; ECP 2 &#x4E3B;&#x8981;&#x8868;&#x793A;&#x5728; tubuliform &#x817A;&#x3002;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E; ECP 1&#xFF0C;ECP 2 mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; &gt; 2 &#x6298;&#x9875;&#x66F4;&#x9AD8;&#x3002;&#x9A6C;&#x5C14;&#x8FEA; MS/MS &#x5206;&#x6790;&#x540E;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E09;&#x8054;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B; tubuliform &#x86DB;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D; 1 (TuSp1)&#xFF0C;ECP-1 &#x548C; ECP 2 &#x5B58;&#x5728;&#x9176;&#x6D88;&#x5316;&#x548C;&#x9178;&#x6C34;&#x89E3;&#x751F;&#x6210;&#x4ECE;&#x5927;&#x76F4;&#x5F84;&#x82AF;&#x5149;&#x7EA4;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x62A5;&#x544A;&#x9644;&#x52A0;&#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E3A; TuSp1&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; TuSp1 &#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A; Cys &#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x98DE;&#x673A;&#x573A;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x3002;ECP 1 &#x548C; ECP-2&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5176;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x4E0E; TuSp1 &#x82AF;&#x5149;&#x7EA4;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EC4;&#x5408;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; ECP 1 &#x548C; ECP 2 &#x5728;&#x86CB;&#x6848;&#x8695;&#x4E1D;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x8718;&#x86DB;&#x86CB;&#x6848;&#x4EF6;&#x6838;&#x5FC3;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF1A; &#x4ECE; TuSp1&#x3001; ECP-1 &#x548C; ECP 2 &#x4E09;&#x8054;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7EC4;&#x88C5;&#x3002;

Spider silk proteins are well-known for their extraordinary mechanical properties, displaying remarkable strength and toughness. In this study, matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) tandem time-of-flight (TOF) mass spectrometry (MS/MS) and reverse genetics were used to isolate a new cDNA sequence that encodes for a protein assembled into egg case silk from the black widow spider, Latrodectus hesperus. Analysis of the primary sequence of this protein reveals approximately 52% identity to the egg case protein 1 (ECP-1) fibroin-like family member. On the basis of the similarity in the primary sequence and expression pattern, we have named this factor egg case protein 2 (ECP-2). Alignments of ECP-1 and ECP-2 demonstrate highly conserved N termini, with 16 Cys residues found within the first 153 amino acids. Traditional ensemble repeats found within reported fibroins were poorly represented in the primary sequence of ECP-2, but scattered blocks of polyalanine were present, along with a C terminus rich in GA repeats. Reverse transcription quantitative PCR analysis showed that ECP-2 is predominantly expressed in the tubuliform gland. Relative to ECP-1, ECP-2 mRNA levels were determined to be >2-fold higher. MALDI MS/MS analysis of peptide fragments generated from the large-diameter core fiber after enzymatic digestion and acid hydrolysis demonstrated the presence of a fiber that is trimeric in nature, containing tubuliform spidroin 1 (TuSp1), ECP-1, and ECP-2. We also report an additional primary sequence for TuSp1, demonstrating that TuSp1 contains two Cys residues within a nonrepetitive N-terminal region. In combination with the distinctive protein architectures of ECP-1 and ECP-2, along with their co-localization with TuSp1 in the core fiber, our findings suggest that ECP-1 and ECP-2 play important structural roles in the egg case silk fiber.

Spider egg case core fibers: trimeric complexes assembled from TuSp1, ECP-1, and ECP-2.

Prot&#xE9;ines de soie d&#x26;#39;araign&#xE9;e sont bien connus pour leurs extraordinaires propri&#xE9;t&#xE9;s m&#xE9;caniques, affichant une force remarquable et la t&#xE9;nacit&#xE9;. Dans cette &#xE9;tude, assist&#xE9;e par matrice ionisation par d&#xE9;sorption laser (MALDI) tandem le temps de vol (TOF) spectrom&#xE9;trie de masse (MS / MS) et la g&#xE9;n&#xE9;tique inverse ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour isoler une s&#xE9;quence d&#x26;#39;ADNc nouvelle qui code pour une prot&#xE9;ine de soie assembl&#xE9;s en cas d&#x26;#39;oeuf de l&#x26;#39;araign&#xE9;e veuve noire, Latrodectus hesperus. L&#x26;#39;analyse de la s&#xE9;quence primaire de cette prot&#xE9;ine r&#xE9;v&#xE8;le environ 52% d&#x26;#39;identit&#xE9; avec le cas d&#x26;#39;&#x153;ufs protein 1 (ECP-1) membre de la famille fibro&#xEF;ne-like. Sur la base de la similitude dans la s&#xE9;quence primaire et le mod&#xE8;le d&#x26;#39;expression, nous avons nomm&#xE9; cette prot&#xE9;ine facteur de cas oeuf 2 (ECP-2). Les alignements de ECP-1 et ECP-2 d&#xE9;montrer hautement conserv&#xE9;es terminus N, avec 16 r&#xE9;sidus Cys trouv&#xE9;s dans les 153 premiers acides amin&#xE9;s. R&#xE9;p&#xE8;te ensemble traditionnel trouv&#xE9;s dans fibroins signal&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; mal repr&#xE9;sent&#xE9;e dans la s&#xE9;quence primaire de l&#x26;#39;ECP-2, mais des blocs &#xE9;pars de polyalanine &#xE9;taient pr&#xE9;sents, avec une extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale riche en r&#xE9;p&#xE9;titions GA. Transcription inverse PCR quantitative a montr&#xE9; que l&#x26;#39;analyse ECP-2 est principalement exprim&#xE9; dans la glande tubuliform. Par rapport &#xE0; ECP-1, les niveaux d&#x26;#39;ARNm ECP-2 ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;es pour &#xEA;tre&#x26;gt; 2 fois plus &#xE9;lev&#xE9;e. MALDI MS / MS analyse de fragments peptidiques provenant de la fibre de base de grand diam&#xE8;tre, apr&#xE8;s digestion enzymatique et l&#x26;#39;hydrolyse acide en &#xE9;vidence la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;une fibre qui est de nature trim&#xE9;rique, contenant une tubuliform spidroin (TuSp1), ECP-1, et ECP-2 . Nous rapportons &#xE9;galement une s&#xE9;quence primaire suppl&#xE9;mentaire pour TuSp1, d&#xE9;montrant que TuSp1 contient deux r&#xE9;sidus Cys dans un non r&#xE9;p&#xE9;titif r&#xE9;gion N-terminale. En combinaison avec les architectures de prot&#xE9;ines distinctes de l&#x26;#39;ECP-1 et ECP-2, ainsi que leur co-localisation avec TuSp1 dans le coeur de la fibre, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que ECP-1 et ECP-2 jouent des r&#xF4;les structurels dans la fibre de soie oeuf cas .

Araign&#xE9;e fibres d&#x26;#39;&#x153;ufs de base de cas: Complexes trim&#xE8;res assembl&#xE9;s &#xE0; partir de TuSp1, les ECP-1, et ECP-2

Spinne Seide Proteine sind bekannt f&uuml;r ihre au&szlig;ergew&ouml;hnlichen mechanischen Eigenschaften, Darstellung bemerkenswerte St&auml;rke und Widerstandskraft. In dieser Studie Matrix assisted Laser Desorption Ionisation (MALDI) Zeit-der-Tandemflug (TOF) Massenspektrometrie (MS/MS) und Reverser wurden verwendet, um eine neue cDNA-Sequenz zu isolieren, die codiert f&uuml;r ein Protein, das in ei Fall Seide aus der Black Widow Spider, Latrodectus Hesperus zusammengesetzt. Analyse der prim&auml;ren Sequenz dieses Proteins ergibt etwa 52 % Identit&auml;t zum Fall Egg Protein 1 (ECP-1) Fibroin-artigen Familienmitglied. Aufgrund der &Auml;hnlichkeit in der prim&auml;ren Sequenz und Ausdrucksmuster haben wir diesen Faktor Ei Fall Protein 2 (ECP-2) benannt. Ausrichtungen der ECP-1 und ECP-2 zeigen stark konservierten N Bahnhof Termini, mit 16 Cys-R&uuml;ckst&auml;nde, die innerhalb der ersten 153 Aminos&auml;uren gefunden. Traditionelle Ensemble Wiederholungen innerhalb gemeldete Fibroins in der prim&auml;ren Sequenz der ECP-2 schlecht vertreten waren, aber zerstreuten Bl&ouml;cke von Polyalanine waren anwesend, zusammen mit einem Carboxyl-Terminus, die reich an GA-Wiederholungen. Reverse Transkription quantitativen PCR-Analyse zeigte, dass ECP-2 vorwiegend in der Tubuliform-Dr&uuml;se ausgedr&uuml;ckt wird. Vergleich zu ECP-1, ECP-2 mRNA-Stufen waren entschlossen, sein &gt; 2-fach h&ouml;her. MALDI-MS/MS-Analyse der Peptid-Fragmente aus dem gro&szlig;em Durchmesser Kern-Faser nach enzymatische Verdauung und Saure Hydrolyse das Vorhandensein einer Verbindungslinie, die in der Natur gezeigt, mit Tubuliform Spidroin 1 (TuSp1), ECP-1 und ECP-2 Trimere ist generiert. Wir berichten auch eine weitere prim&auml;re Sequenz f&uuml;r TuSp1, zeigen, dass TuSp1 zwei Cys-R&uuml;ckst&auml;nde innerhalb einer nonrepetitive N-terminalen Region enth&auml;lt. In Kombination mit den unverwechselbaren Protein-Architekturen von ECP-1 und ECP-2, zusammen mit ihren Doppelhybridisierung mit TuSp1 in der Kern-Faser zufolge unsere Einsch&auml;tzungen ECP-1 und ECP-2 in der Ei-Fall Seide Faser wichtige strukturelle Rolle spielen.

Spinne Ei Fall Kern Fasern: Trimere komplexe, die aus TuSp1, ECP-1 und ECP-2 zusammengesetzt werden.

Proteine seta di ragno sono ben note per le loro propriet&agrave; meccaniche straordinarie, visualizzazione di tenacit&agrave; e resistenza notevole. In questo studio, matrix-assisted laser desorption ionizzazione (MALDI) tandem tempo di volo (TOF) mass spectrometry (MS/MS) e genetica inversa sono stati usati per isolare una nuova sequenza di cDNA che codifica per una proteina assemblata in caso uovo seta di ragno vedova nera, Latrodectus hesperus. Analisi della sequenza primaria di questa proteina rivelano circa 52% identit&agrave; alla proteina dell&#39;uovo caso 1 (ECP-1) fibroin-come membro della famiglia. Sulla base della somiglianza nella sequenza primaria e pattern di espressione, abbiamo chiamato questa proteina uovo caso fattore 2 (ECP-2). Gli allineamenti di ECP-1 e 2-ECP dimostrano termini N altamente conservate, con 16 residui Cys trovati all&#39;interno del primo 153 aminoacidi. Ripetizioni ensemble tradizionale trovati all&#39;interno di fibroins segnalati erano scarsamente rappresentate nella sequenza primaria di ECP-2, ma blocchi sparsi di polyalanine erano presenti, insieme a un ricco di ripetizioni GA C terminale. Analisi PCR quantitativa trascrizione d&#39;inversione hanno mostrato che ECP-2 &egrave; espressa principalmente nella ghiandola tubuliform. Relativo a ECP-1, livelli di ECP-2 mRNA sono stati determinati per essere &amp;gt; 2 volte superiore. MALDI-MS/MS analisi dei frammenti del peptide generato dalla fibra di grande diametro nucleo dopo digestione enzimatica e idrolisi acida hanno dimostrato la presenza di una fibra che &egrave; trimeric in natura, contenenti tubuliform spidroin 1 (TuSp1), ECP-1 ed ECP-2. Segnaliamo inoltre un&#39;ulteriore sequenza primaria per TuSp1, dimostrando che il TuSp1 contiene due Cys residui all&#39;interno di una regione N-terminale nonrepetitive. In combinazione con le architetture di proteina distintivo di ECP-1 e 2-ECP, insieme a loro collocazione con TuSp1 in fibra di nucleo, i nostri risultati suggeriscono che ECP-1 ed ECP-2 giocare importanti ruoli strutturali in fibra di seta uovo caso.

Fibre di ragno uovo caso core: complessi trimeric assemblato da TuSp1, ECP-1 e 2 di ECP.

&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x7CF8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x976D;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7279;&#x5225;&#x306A;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3088;&#x304F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x652F;&#x63F4;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8131;&#x96E2;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5316;&#xFF08;MALDI&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x98DB;&#x884C;&#x6642;&#x9593;&#x578B;&#xFF08;TOF&#xFF09;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF08;MS / MS&#xFF09;&#x3068;&#x9006;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30EB;&#x30AF;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;cDNA&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x3001;&#x30B4;&#x30B1;&#x30B0;&#x30E2;&#x5C5E;&#x91D1;&#x661F;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;1&#xFF08;ECP-1&#xFF09;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x7D04;52&#xFF05;&#x306E;&#x540C;&#x4E00;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x56E0;&#x5B50;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;2&#xFF08;ECP-2&#xFF09;&#x3068;&#x540D;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ECP-1&#x3068;ECP-2&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;153&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5185;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;16&#x306E;Cys&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;N&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306F;&#x3042;&#x307E;&#x308A;ECP-2&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x6563;&#x4E71;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;GA&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x5B9A;&#x91CF;PCR&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ECP-2&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x817A;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; ECP-1&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3001;ECP-2&#x306E;mRNA&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x26;gt; 2&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x6D88;&#x5316;&#x3084;&#x9178;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x5F8C;&#x306E;&#x5927;&#x53E3;&#x5F84;&#x30B3;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;MALDI MS / MS&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;spidroin 1&#xFF08;TuSp1&#xFF09;&#x3001;ECP-1&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;ECP-2&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;TuSp1&#x304C;&#x5B89;&#x5168;&#x52D5;&#x4F5C;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;Cys&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;TuSp1&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x306E;TuSp1&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;ECP-1&#x3068;ECP-2&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;ECP-1&#x3068;ECP-2&#x306F;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D79;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AF;&#x30E2;&#x306E;&#x5375;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30B3;&#x30A2;&#x7E4A;&#x7DAD;&#xFF1A;TuSp1&#x304B;&#x3089;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3001;ECP-1&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;ECP-2

&#xAC70;&#xBBF8; &#xC2E4;&#xD06C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC640; &#xC778; &#xC131; &#xD45C;&#xC2DC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xBA85; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC870; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xD0C8; &#xCC29; &#xC774;&#xC628;&#xD654; (MALDI) &#xC9C1;&#xB82C; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xAC04;-&#xC758;-&#xBE44;&#xD589; (TOF) &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (MS/MS) &#xBC0F; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xAC80;&#xC740; &#xBD80; &#xAC70;&#xBBF8;, Latrodectus &#xAC1C;&#xBC25;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xB780; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC0C8; cDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;. &#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC57D; 52 %id &#xB2EC;&#xAC40;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1 (ECP-1) fibroin &#xAC19;&#xC740; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC21C;&#xC11C;&#xC640; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC5D0; &#xADFC;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC778;&#xC790; &#xB2EC;&#xAC40;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 (ECP-2) &#xB77C;&#xB294; &#xC788;&#xB2E4;. 1 ECP ECP 2&#xC758; &#xB9DE;&#xCDA4; 16 Cys &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xCC98;&#xC74C; 153 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; fibroins &#xB0B4;&#xC758; &#xC804;&#xD1B5; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xBC18;&#xBCF5; ECP 2&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD769;&#xC5B4;&#xC838; &#xBE14;&#xB85D; polyalanine&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC870;&#xC9C0;&#xC544; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD568;&#xAED8; &#xCC38;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xC804; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; PCR &#xBD84;&#xC11D; ECP 2&#xC740; tubuliform &#xC120; &#xD45C;&#xD604; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. ECP 1 &#xC0C1;&#xB300; ECP 2 mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4; &amp;gt; 2-fold &#xB192;&#xC740;. &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C;&#xD654; &#xBC0F; &#xC0B0; &#xC131; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; ECP 1 &#xBC0F; ECP-2 tubuliform spidroin 1 (TuSp1)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC790;&#xC5F0; &#xC18D;&#xC5D0;&#xC11C; trimeric&#xC740; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC99D;&#xBA85; &#xD6C4; &#xD070; &#xC9C1;&#xACBD; &#xCF54;&#xC5B4; &#xAD11;&#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD30C;&#xD3B8;&#xC758; MALDI MS/MS &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; TuSp1 nonrepetitive N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4; &#xB450; Cys&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; TuSp1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCF54;&#xC5B4; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; co-localization Tusp1&#xC640; &#xD568;&#xAED8; 1 ECP ECP 2&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; ECP 1 &#xBC0F; ECP 2 &#xB2EC;&#xAC40; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD06C; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xB354;&#xC5D0; &#xADF8;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC12C;&#xC720;: trimeric &#xB2E8;&#xC9C0; TuSp1, 1 ECP ECP 2&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xB9BD;.

Prote&#xED;nas de seda de ara&#xF1;a son bien conocidos por sus propiedades mec&#xE1;nicas extraordinarias, mostrando una notable fortaleza y tenacidad. En este estudio, l&#xE1;ser asistida por matriz de ionizaci&#xF3;n de desorci&#xF3;n (MALDI) t&#xE1;ndem de tiempo de vuelo (TOF) espectrometr&#xED;a de masas (MS / MS) y la gen&#xE9;tica inversa se utiliza para aislar una nueva secuencia de ADNc que codifica para una prote&#xED;na de huevo montada en seda caso de la ara&#xF1;a viuda negro, Latrodectus hesperus. An&#xE1;lisis de la secuencia primaria de esta prote&#xED;na revela aproximadamente 52% de identidad con el caso de huevo prote&#xED;na 1 (ECP-1)-fibro&#xED;na como miembro de la familia. Sobre la base de la similitud de la secuencia primaria y el patr&#xF3;n de expresi&#xF3;n, que hemos denominado este huevo factor proteico caso 2 (ECP-2). Las alineaciones de ECP-1 y ECP 2-demostrar altamente conservadas extremos N, con 16 residuos de Cys se encuentran dentro de los primeros 153 amino&#xE1;cidos. Repite tradicionales que se encuentran dentro del conjunto fibroins reportados fueron escasamente representadas en la secuencia primaria de ECP-2, pero los bloques dispersos de polialanina estuvieron presentes, junto con un C-terminal rica en repeticiones GA. La transcripci&#xF3;n inversa an&#xE1;lisis de PCR cuantitativa mostr&#xF3; que el PAC-2 se expresa predominantemente en la gl&#xE1;ndula tubuliform. En relaci&#xF3;n con ECP-1, ECP-2 niveles de mRNA se determin&#xF3; que eran&#x26;gt; 2 veces mayor. MALDI MS / MS an&#xE1;lisis de fragmentos de p&#xE9;ptidos generados a partir de la fibra de n&#xFA;cleo de gran di&#xE1;metro despu&#xE9;s de la digesti&#xF3;n enzim&#xE1;tica y la hidr&#xF3;lisis &#xE1;cida demostrado la presencia de una fibra que es trim&#xE9;rica en la naturaleza, que contiene tubuliform spidroin 1 (TuSp1), FEC-1, y ECP 2- . Tambi&#xE9;n reportar una secuencia primaria adicional para TuSp1, demostrando que TuSp1 contiene dos residuos de Cys dentro de un no repetitivo regi&#xF3;n N-terminal. En combinaci&#xF3;n con las arquitecturas de prote&#xED;nas distintivas de la PAC-1 y ECP-2, junto con su co-localizaci&#xF3;n con TuSp1 en el n&#xFA;cleo de la fibra, nuestros hallazgos sugieren que la PAC-1 y ECP-2 juega un importante papel estructural en la fibra de huevos de seda caso .

Kristin Kohler

Department of Biological Sciences

University of the Pacific

Synthetic Spider Silk Production on a Laboratory Scale

Kristin Kohler

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University of the Pacific

Synthetic Spider Silk Production on a Laboratory Scale

Department of Biological Sciences