Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Many of the antigen targets of adaptive immune response, recognized by B and T cells, have not been defined 1. This is particularly true in autoimmune ...

St. Vincent's Institute of Medical Research

&#x79FB;&#x690D;&#x5230;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA; 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x5BB9;&#x6613;&#x53D7;&#x5230;&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x53CA;&#x81EA;&#x52A8;&#x514D;&#x75AB; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E3A;&#x5F00;&#x53D1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F7F;&#x7528; PBMC &#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x662F;&#x51C6;&#x5907;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x80F0;&#x5C9B;&#x6350;&#x52A9; (&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;) &#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x63D0;&#x53D6; &#xFF08;&#x81EA;&#x52A8;&#x6297;&#x539F;&#xFF09;&#x3002;&#x4EE4;&#x6211;&#x4EEC;&#x5403;&#x60CA;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x5148;&#x5929;&#x6291;&#x5236;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x6297;&#x539F; (&#x7834;&#x4F24;&#x98CE;&#x7C7B;&#x6BD2;&#x7D20;) &#x548C;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x539F; (&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x6297; CD3 OKT3&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C;&#x63D0;&#x53D6;&#x51C6;&#x5907;&#x4ECE;&#x80F0;&#x5C9B;&#x4ECE;&#x540C;&#x4E00;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x5236;&#x6B62;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10R&#x3001; &#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x6216; CD152 &#xFF08;CTLA-4&#xFF09;&#x3002;&#x5B83;&#x4E5F;&#x901A;&#x8FC7;&#x52A0;&#x70ED;&#x3001; &#x66B4;&#x9732;&#x5728;&#x8FD8;&#x539F;&#x5242;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D88;&#x5316;&#x53D8;&#x6027;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6B7B;&#x8005;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x901A;&#x5E38;&#x7531;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5F3A;&#x7684;&#x677E;&#x9F99;&#x7684;&#x6B7B;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x5236;&#x6B62;&#x56E0;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x3002;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x65E0;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5728;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5728;&#x6291;&#x5236; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x7C73;&#x975E;&#x53F8;&#x916E;&#x5F7B;&#x5E95;&#x626D;&#x8F6C;&#x81F4;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x5236;&#x6B62;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4EBA;&#x813E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5C0F;&#x5C9B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6B7B;&#x8005;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x5305;&#x542B;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x904F;&#x6291; T-&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;

&#x6B8B;&#x4F59;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x53D6;&#x6D88;&#x5230;&#x813E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x80F0;&#x5C9B;&#x63D0;&#x53D6;&#x6B7B;&#x8005;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x6350;&#x732E;&#x8005;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Pancreatic islets, transplanted into recipients with type 1 diabetes, are exposed to allogenic and auto-immune T-cell responses. We set out to develop an assay to measure these responses using PBMC. Our approach was to prepare spleen extract from the islet donors (allo-antigen) and islet extracts (auto-antigen). To our surprise, we found that spleen extracts potently inhibited the proliferation of human T cells driven by antigen (tetanus toxoid) and mitogen (anti-CD3 mAb, OKT3), whereas extracts prepared from pancreatic islets from the same donor did not suppress T-cell proliferation. Suppression mediated by spleen extracts was unaffected by blocking mAbs against the IL-10R, transforming growth factor-Î² or CD152 (CTLA-4). It was also unaffected by denaturing the spleen extracts by heating, exposing to reducing agents or protease digestion. Because deceased organ donors are commonly given the immunosuppressive glucocorticoid methylprednisolone prior to death, we hypothesized that suppression was due to residual methylprednisolone in the spleen extracts. Methylprednisolone could be detected by mass spectrometry in spleen extracts at concentrations that suppress T-cell proliferation. Finally, the glucocorticoid receptor antagonist mifepristone completely reversed the suppression caused by the spleen extracts. We conclude that extracts of human spleen, but not islets, from deceased organ donors contain sufficient residual methylprednisolone to suppress the proliferation of T-cells in vitro.

Residual methylprednisolone suppresses human T-cell responses to spleen, but not islet, extracts from deceased organ donors.

Des &icirc;lots pancr&eacute;atiques, transplant&eacute;s dans les b&eacute;n&eacute;ficiaires atteints de diab&egrave;te de type 1, sont expos&eacute;s &agrave; des allog&egrave;nes et auto immune responses de lymphocytes T. Nous avons entrepris de d&eacute;velopper un test permettant de mesurer ces r&eacute;ponses &agrave; l&#39;aide de PBMC. Notre approche &eacute;tait de pr&eacute;parer rate extrait les donateurs de l&#39;&icirc;lot (allo-antig&egrave;nes) et &icirc;lot extraits (auto-antig&egrave;ne). A notre grande surprise, nous avons constat&eacute; que des extraits de rate inhibent fortement la prolif&eacute;ration des cellules T humaines, conduit par l&#39;antig&egrave;ne (t&eacute;tanos) et mitog&egrave;ne (anti-CD3 mAb, OKT3), tandis que les extraits pr&eacute;par&eacute;s &agrave; partir des &icirc;lots pancr&eacute;atiques d&#39;un m&ecirc;me donneur n&#39;a pas supprim&eacute; la prolif&eacute;ration des lymphocytes T. R&eacute;pression m&eacute;di&eacute;e par des extraits de la rate n&#39;est pas affect&eacute;e par le blocage du mAbs contre l&#39;IL-10R, transforming growth factor-&beta; ou CD152 (CTLA-4). Il n&#39;est &eacute;galement pas affect&eacute;e en d&eacute;naturant les extraits de la rate par chauffage, les exposant &agrave; des agents r&eacute;ducteurs ou digestion prot&eacute;asique. Parce que les donneurs d&#39;organes d&eacute;c&eacute;d&eacute;s figurent couramment la m&eacute;thylprednisolone glucocortico&iuml;de immunosuppresseurs avant son d&eacute;c&egrave;s, nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que suppression &eacute;tait due &agrave; la m&eacute;thylprednisolone r&eacute;siduelle dans les extraits de la rate. M&eacute;thylprednisolone pouvait &ecirc;tre d&eacute;tect&eacute;e par spectrom&eacute;trie de masse dans les extraits de la rate &agrave; des concentrations qui inhibent la prolif&eacute;ration des lymphocytes T. Enfin, la mif&eacute;pristone d&#39;antagoniste r&eacute;cepteur glucocortico&iuml;de a compl&egrave;tement invers&eacute; la compression caus&eacute;e par les extraits de la rate. Nous concluons que les extraits de rate humaine, mais pas d&#39;&icirc;lots, de donneurs d&#39;organes d&eacute;c&eacute;d&eacute;e contiennent la m&eacute;thylprednisolone r&eacute;siduelle suffisante pour supprimer la prolif&eacute;ration des lymphocytes T in vitro.

M&eacute;thylprednisolone r&eacute;siduelle supprime les r&eacute;ponses de cellules T humaines aux extraits de rate, mais pas d&#39;&icirc;lot, des donneurs d&#39;organes d&eacute;c&eacute;d&eacute;s.

Pankreas Inselchen, transplantierte in Empf&auml;nger mit Typ 1-Diabetes sind allogene und autoimmune T-Zell-Reaktionen ausgesetzt. Wir uns vorgenommen, um ein Assay zur Messung dieser Antworten mit PBMC zu entwickeln. Unser Ansatz war Milz Auszug aus dem Inselchen Spender (allo-Antigen) vorbereiten und Inselchen extrahiert (Auto-Antigen). Zu unserer &Uuml;berraschung fanden wir, dass die Milz Extrakte stark gehemmt, die Verbreitung von menschlichen T-Zellen, die angetrieben von Antigen (Tetanustoxoid) und Mitogen (Anti-CD3 mAb, OKT3), w&auml;hrend Extrakte aus Pankreas Inseln vom gleichen Spender vorbereitet T-Zellproliferation nicht unterdr&uuml;ckt wurden. Unterdr&uuml;ckung von Milz Extrakte vermittelt verschont von blockieren mAbs gegen den IL-10R, transforming Growth Factor-&beta; oder CD152 (CTLA-4). Es war auch durch Denaturierung der Milz Extrakte von Heizung, Verf&uuml;gbarmachen von Reduktionsmitteln oder Protease Verdauung unber&uuml;hrt. Weil verstorbenen Organspender die immunsuppressive Glukokortikoid-Methylprednisolon vor Tod h&auml;ufig gegeben sind, Hypothese wir, dass verbleibende Methylprednisolon in der Milz Extrakte Unterdr&uuml;ckung zur&uuml;ckzuf&uuml;hren. Methylprednisolon konnte durch Massenspektrometrie in Milz Extrakte bei Konzentrationen erkannt werden, die T-Zellproliferation zu unterdr&uuml;cken. Die Glukokortikoid-Rezeptor-Antagonist Mifepriston umgekehrt schlie&szlig;lich vollst&auml;ndig die Unterdr&uuml;ckung durch die Milz Extrakte verursacht. Wir schlie&szlig;en, dass Ausz&uuml;ge der menschlichen Milz, aber nicht Inselchen aus verstorbenen Organspender ausreichend verbleibende Methylprednisolon enthalten um die Vermehrung von T-Zellen in vitro zu unterdr&uuml;cken.

Residual Methylprednisolon unterdr&uuml;ckt menschliche T-Zell-Antworten f&uuml;r Milz, aber nicht Inselchen, Extrakte von verstorbenen Organspender.

Isole pancreatiche, trapiantati in destinatari con diabete di tipo 1, sono esposti a trapianto allogenico e auto-immune risposte delle cellule T. Abbiamo deciso di sviluppare un test per misurare queste risposte utilizzando PBMC. Il nostro approccio era quello di preparare la milza Estratto da donatori isolotto (allo-antigeni) e isolotto estratti (auto-antigene). Con nostra sorpresa, abbiamo scoperto che gli estratti della milza inibiscono potentemente la proliferazione delle cellule T umane guidato da antigene (Toxoide di tetano) e mitogeno (mAb anti-CD3, OKT3), considerando che estratti preparati da isole pancreatiche da donatore stesso non sopprimere la proliferazione delle cellule T. Soppressione mediata da estratti di milza era influenzata dal blocco mAbs contro IL-10R, trasformando il fattore di crescita-&beta; o CD152 (CTLA-4). &Egrave; stato anche influenzato da denaturare il milza estratti da riscaldamento, esposizione ad agenti riducenti o digestione della proteasi. Perch&eacute; i donatori deceduti organo sono comunemente dato il metilprednisolone glucocorticoidi immunosoppressori prima della morte, abbiamo ipotizzato che soppressione era dovuta al residuo metilprednisolone in estratti della milza. Metilprednisolone potrebbe essere rilevato da spettrometria di massa nella milza estratti a concentrazioni che sopprimono la proliferazione delle cellule T. Infine, i glucocorticoidi recettore antagonista mifepristone completamente rovesciato la repressione causata da estratti della milza. Possiamo concludere che gli estratti della milza umana, ma non isolotti, da donatori deceduti organo contengano metilprednisolone residua sufficiente per sopprimere la proliferazione delle cellule T in vitro.

Metilprednisolone residua elimina risposte delle cellule T umane alla milza, ma non isolotto, estratti da donatori deceduti organo.

1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306B;&#x79FB;&#x690D;&#x3001;&#x81B5;&#x5CF6;&#x306F;&#x540C;&#x7A2E;&#x3068;&#x81EA;&#x52D5;&#x514D;&#x75AB; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; PBMC &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x7740;&#x624B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x813E;&#x81D3;&#x81B5;&#x5CF6;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; &#xFF08;&#x540C;&#x7A2E;&#x6297;&#x539F;&#xFF09; &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x81B5;&#x5CF6; (&#x81EA;&#x52D5;&#x6297;&#x539F;) &#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x813E;&#x81D3;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x5F37;&#x529B;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x3067;&#x540C;&#x4E00;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x81B5;&#x5CF6;&#x304B;&#x3089;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x6297;&#x539F; &#xFF08;&#x7834;&#x50B7;&#x98A8;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF09; &#x3068; mitogen (OKT3 &#x6297; CD3 mAb) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x813E;&#x81D3;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x3060;&#x3063;&#x305F; IL 10R &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066; Mab &#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x307E;&#x305F;&#x306F; CD152 &#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B; (CTLA-4)&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3082;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6696;&#x623F;, &#x9084;&#x5143;&#x5264;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D88;&#x5316;&#x306B;&#x516C;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6B7B;&#x4F53;&#x81D3;&#x5668;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x6B7B;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x6B8B;&#x7559;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x30DF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306F;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6291;&#x5727;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x9006;&#x8EE2;&#x3002;&#x6B7B;&#x4F53;&#x81D3;&#x5668;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x813E;&#x81D3;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x5C0F;&#x5CF6;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306B; in vitro &#x3067;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x6B8B;&#x7559;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x542B;&#x3080;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6B8B;&#x7559;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x6B7B;&#x4F53;&#x81D3;&#x5668;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x813E;&#x81D3;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x81B5;&#x5CF6;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3092;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD0C0;&#xC785;-1 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB3C5;&#xB3C4; allogenic &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; PBMC&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xCC29;&#xC218;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xC900;&#xBE44; &#xBE44;&#xC7A5; &#xC12C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; (&#xC5EC; &#xBCF4;&#xC138;&#xC694;-&#xD56D; &#xC6D0;)&#xC744; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xACE0; &#xC12C; (&#xC790;&#xB3D9;-&#xD56D; &#xC6D0;)&#xC744; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; potently &#xAC19;&#xC740; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB3C5;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0; (&#xD30C;&#xC0C1;&#xD48D; toxoid)&#xACFC; &#xBB3C;&#xC9C8; (&#xC548;&#xD2F0;-CD3 mAb, OKT3)&#xC5D0; &#xD798;&#xC785;&#xC5B4; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; IL-10r&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; mAbs &#xCC28;&#xB2E8;, &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&beta; &#xB610;&#xB294; cd152&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; (CTLA-4). &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xC5F4;, &#xAC10;&#xC18C; &#xC694;&#xC6D0; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD654;&#xB97C; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xBCC0;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. &#xACE0; &#xC778;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC8FD;&#xC74C; &#xBA74;&#xC5ED; glucocorticoid methylprednisolone &#xC81C;&#xACF5;, &#xC5B5;&#xC81C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC794;&#xC5EC; methylprednisolone &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. Methylprednisolone T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; mifepristone&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC18;&#xB300; &#xD558; &#xACE0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACE0; &#xC778;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBE44;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB3C4;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC794;&#xC5EC; methylprednisolone &#xACB0;&#xB860;.

&#xC794;&#xC5EC; methylprednisolone &#xBE44;&#xC7A5;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC12C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xACE0; &#xC778;&#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; T&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Islotes pancre&aacute;ticos, trasplantados en recipientes con diabetes tipo 1, est&aacute;n expuestos a las respuestas de c&eacute;lulas T de al&oacute;genos y autoinmunes. Nos propusimos para desarrollar un ensayo para medir estas respuestas usando PBMC. Nuestro enfoque deb&iacute;a preparar bazo Extracto de los donantes del islote (allo-ant&iacute;geno) y extractos de islote (auto-ant&iacute;geno). Para nuestra sorpresa, encontramos que los extractos de bazo potentemente inhibici&oacute;n la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T humanas impulsado por el ant&iacute;geno (toxoide tet&aacute;nico) y mit&oacute;geno (mAb anti-CD3, OKT3), mientras que los extractos preparados a partir de islotes pancre&aacute;ticos de la misma donante no suprimi&oacute; a la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T. Supresi&oacute;n mediada por extractos de bazo era inafectada por bloqueo mAbs contra el IL-10R, transformar el factor de crecimiento-&beta; o CD152 (CTLA-4). Tambi&eacute;n era inafectada por la desnaturalizaci&oacute;n de los extractos de bazo por calefacci&oacute;n, exponiendo a agentes reductores o digesti&oacute;n de la proteasa. Porque los donantes fallecidos reciben com&uacute;nmente la metilprednisolona glucocorticoides inmunosupresores antes de la muerte, presumimos que la supresi&oacute;n obedece a metilprednisolona residual en los extractos de bazo. Metilprednisolona podr&iacute;a ser detectada por espectrometr&iacute;a de masas en los extractos de bazo en concentraciones que inhiben la proliferaci&oacute;n del T-cell. Finalmente, la mifepristona de antagonista del receptor de glucocorticoides revirti&oacute; completamente la represi&oacute;n causada por los extractos de bazo. Concluimos que los extractos de bazo humano, pero no de islotes, de donantes fallecidos contienen metilprednisolona residual suficiente para suprimir la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T in vitro.

Andra Necula

Immunology and Diabetes Unit

St. Vincent's Institute of Medical Research

Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Andra Necula

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Immunology and Diabetes Unit

St. Vincent's Institute of Medical Research

Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Immunology and Diabetes Unit