-Cell Hücre makromoleküler Ulaştırma Testi Planta Biyolistik Bombardıman kullanımı

Özet

Bitki hücreleri arasındaki makromoleküler ticareti, geçici bir ilgi floresan etiketli protein ifade ve konfokal mikroskobu ile içi ve hücreler arası dağılımı analiz değerlendirilebilir.

Özet

Burada, planta içinde hücre-hücre makromoleküler taşıma kapsamını tespit etmek ve değerlendirmek için basit ve hızlı bir protokol mevcut. Bu protokol, geçici bir ilgi floresan etiketli protein kodlama DNA Biyolistik teslim inşa aşağıdaki bitki doku ifade edilir. Etiketli protein içi ve hücreler arası dağılımı sonra konfokal mikroskobu ile analiz edilir. Biz detaylı olarak tahlil için adım adım protokoller sağlayarak, bu teknoloji tanımlayan ve üç bitki türlerinin symplastic protein taşıma ölçüde, Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana ve N. değerlendirmek tabacum (tütün).

Protokol

Arkaplan

Bitki hücrelerarası bağlantıları aracılığıyla makromoleküllerin Symplastic ulaşım, plasmodesmata, birçok bitki patologlar ve biyologlar ilgi. Örneğin, bazı viral proteinler, viral ^hareketi 1-3 etkinleştirmek için plasmodesmal boyut dışlama sınırlarını düzenlemek için bilinmektedir . Ayrıca, önemli gelişim düzenleyiciler arasında bazı endojen proteinler, ^4-hücreli olmayan-özerk çalışması için, muhtemelen plasmodesmata aracılığıyla hücreden hücreye geçmek için varsayılır. Bu nedenle, bitki hücreleri arasındaki makromoleküler taşımacılığı tanımlamak ve görselleştirmek için güvenilir bir yöntem çok talep.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Symplastic taşıma testinin başarı için anahtar, yüksek dönüşüm verimliliği, istatistiksel olarak anlamlı ve kolayca detectible sinyal kümeleri üretimini sağlar elde etmektir. Bu, sağlıklı, sağlam bitkiler hasat yapraklar kullanılarak, saf ve yoğun bir DNA hazırlığı ile kaplı altın parçacıkları hazırlanması sağlanabilir.

Aynı büyüme aşamasında yaprakları kullanarak da testin güvenilirliği için hayati önem taşımaktadır. Plasmodesmal diyafram farkl?.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gold microparticles, 1.0 μm in diameter	Bio-Rad	165-2262
Gold microparticles, 0.6 μm in diameter	Bio-Rad	165-2263
Spermidine	Sigma-Aldrich	S0266-1G
Tefzel tubing	Bio-Rad	165-2441
Helios cartridge preparatory station	Bio-Rad	165-2420
Tubing cutter	Bio-Rad	165-2422
Helios gene gun	Bio-Rad	165-2432
Helium gas regulator	Bio-Rad	165-2413