Güve Koku Sistemi Elektrofizyolojik Ölçümler

Özet

Böcek koku alma sistemleri electroantennograms (EAG) ve anteni bulunan tüm odorant reseptör nöronları (ORNs) ve bireysel ev sahipliği bu yanıtları toplanır tek sensillum kayıtları (SSR), formları kayıt odorant indüklenen yanıtları için eşsiz fırsatlar sunmaya sırasıyla sensilla.

Özet

Böcek koku alma sistemleri electroantennograms (EAG) ve anteni bulunan tüm odorant reseptör nöronları (ORNs) ve bireysel ev sahipliği bu yanıtları toplanır tek sensillum kayıtları (SSR), formları kayıt odorant indüklenen yanıtları için eşsiz fırsatlar sunmaya sırasıyla sensilla. Bu yaklaşımlar, böcek kimyasal iletişimin daha iyi bir anlayış elde etmek için istismar edilmiştir. Belirlenen uyaranlara sonra böcek zararlıları için yönetim stratejileri cezbedicilerde ve kovucularda olarak kullanılabilir.

Protokol

1. Haşarat

1. Göbek orangeworm, Amyelois transitella (Paul Walker) (Lepidoptera: Pyralidae) Fresno, CA badem ağaçlarından toplanan kelebekler kaynaklanan laboratuvar koloni. Bizim böceklerin koloni 28 çevre odaları (Percival A.Ş., IA) korunur ± 2 ° C, 75 ±% 10 bağıl nem ve 16:08 saat altında (ışık: karanlık) fotoğraf rejimi.
2. Gelişmekte olan kelebekler cinsiyetli, günlük toplanan ve plastik kutular (669 ml beslenme çantası, 13 x 13 cm boy, 4.5 cm, Rubbermaid) transfer suda ıslatılmış kağıt havlu 10 katmanları (sağlanan Thirsty Ultra Emici, 27.9 x 27.9 cm. ; Safeway). Kutu kapakları, hava sirkülasyonu sağlamak için delikli. Bu düzenleme ~ 100% RH sağlar.
3. Elektrofizyolojik ölçümler için 2-4 gün sonra ortaya çıkması, yüksek nem altında tutulur eski kelebekler.

2. Elektrofizyolojik Hazırlık

1. Güveler (erkek veya kadın) büyük (yaklaşık 2 mm) bir ucu çapı üstten kesilmiş bir pipet (200 mcL, ABD Bilimsel Inc) yavaşça içine itilir. Antenleri ve baş ucu dışarıya kadar güve hafifçe nemlendirilmiş bir kağıt mendil saplama ile sonuna kadar itilir.
2. Maruz kalan baş, küçük bir parçası, bir gözü ve iki anten maruz bırakarak olmayan bir kuruyan kil (Claytoon, Van Aken International, CA) ile başını örten immobilize. Bu hazırlık, iki elektrot tutucu arasındaki EAG Mikromanipülatör MP-12 (Syntech Almanya) bir platform üzerine yerleştirilir.
3. Biz filament ile 1.0 mm borosilikat kılcal boru (TEFE Inc, FL) yapılmış ve bir mikrometre ucu daha az Mikroelektronlar elde etmek için Bir Model P-97 mikropipet çektirmesi (Sutter Instruments, CA) çekti cam elektrot kullanın. Elektrotlar sensillum lenf zil sesi (Kaissling ve Thorson 1980) ile doldurulur. Bir elektrot, kayıt elektrodu iki antenler barındıran göz açıkta kalan alanı (Leica MZ75) mikroskop altında impales ve referans olarak hizmet vermektedir. Kişi kolaylaştırmak için, distal 1-2 antennal bölümleri kayıt elektrot yerleştirilir önce kesilir. Bireysel sensilla kayıtları sinyalleri için, kayıt elektrodu mikroskobu (Olympus BX51WI 800x büyütme) altında neyin kazığa Bu kurulum biraz değiştirin. Aksiyon potansiyelleri bir sensillum tabanı cam elektrot takarak kayıt altına alınır. Sinyaller AUTOSPIKE yazılımı (Syntech Almanya) ile analiz edilecek UB-IDAC off-line yüksek empedanslı bir ön-amplifikatör (Syntech Almanya) ve beslenen tarafından güçlendirilir. AC sinyaller, 100 -10.000 Hz ve aksiyon potansiyelleri arasında filtre bant geçiren gürültüden tepeden-çukur genlikleri ayıran bir AUTOSPIKE algoritması kullanılarak bilgisayar tarafından ayıklanır. Bireysel nöronların cevaplar, spontan frekans üzerinden aksiyon potansiyeli sıklığında artış (veya düşüş) (saniyede ani) olarak hesaplanır.

3. Kimyasal Uyarılar ve Uyarım Protokolü

1. Yüksek saflıkta kimyasallar kullanılır. Göbek orangeworm kadın feromon karışımı önemli bir bileşen, (Z, Z) -11,13-hexadecadienal Bedoukian Araştırma A.Ş., CT elde edilmiştir. Kimyasallar seyreltilmiş, w / v, 10 mikrogram / mcL ve onlu dilüsyonları stok çözümleri yapmak için cam distile hekzan ile yapılır. Solvent, hekzan içinde çözünmüş bir uyarıcı kimyasal bir kısım (10 mcL) Whatman filtre kağıt şerit (8x40 mm) yüklenir, yavaşça davlumbaz altında 10 s sallayarak buharlaştırılır ve 5 ml polipropilen şerit yerleştirilir. şırınga (BD Şırınga, NJ) çeşitli birimler çıkarılır. Hekzan yalnız ve boş bir şırınga kontrol olarak hizmet vermektedir.
2. Hazırlık Syntech Stimulus denetleyicisi (CS-55 modeli; Syntech, Almanya) tarafından teslim nemlendirilmiş bir hava akımı düzenlenen 20 ml / sn 4 ml / s 500 ms eklenir bir uyarıcı darbe. Sinyaller uyaran darbe başlamasından önce başlayarak, 10 s 2 s kaydedilir. 500 ms darbe ile hangi ca içinde Antennal hazırlık uyarılır. 2 mL, uyaran içeren 5 ml polipropilen şırınga saflaştırılmış hava, ana hava akımı üzerine eklenir. Yüksek yanıtları takip eden en az 1 dakika veya daha fazla bir boşluk, uyarılar arasında izin verilir.

4. Temsilcisi Sonuçlar

Kadın feromon bileşeni ile uyarılır ölçülü güveler Anten (Şekil 1), (Z, Z) -11,13-hexadecadienal sağlam doza bağımlı cevaplar (Şekil 2) oluşturmak. Bu büyük feromon bileşeni olarak tek bir birim kayıtları (Şekil 3B) izleri görüntülenir uzun trichodea sensilla (Şekil 3A) doza bağımlı eksitatör tepkiler ortaya çıkarır.

Şekil 1. maruz göbek orangeworm güve ölçülü ve anten Canlı

load/2489/2489fig2.jpg "alt =" Şekil 2 "/>
Şekil 2 doz bağımlı EAG yanıtlar yanıt olarak ortaya çıkardı (Z, Z) -11,13-hexadecadienal, büyük bir kadın feromon kurucu.

Şekil 3 erkek göbek orangeworm güve Sensilla trichoid cevap (Z, Z) doza bağımlı bir şekilde -11,13 hexadecadienal. (A) erkek göbek orangeworm güve Anten çok parçalı ve her segmentin saç yapıları gibi çok sayıda sensilla süslüdür. Ayrıntıları gösteren bir tarama elektron mikrografı, içeride (Ölçekli Barlar sırasıyla 200 ve 50 mcM). (B) trichoid sensillum Ekstrasellüler tek birim kayıtları.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Koku alma sinyalleri ölçmek için canlı bir göbek orangeworm güve frenleyici için geliştirilen bu romanı yöntem, sağlam ve son derece güvenilir olduğu kanıtlanmıştır. Biz rutin olarak, badem ve fıstık gibi doğal ev sahibi substratlar roman cezbedicilerde izole edilip tanımlanması için bu yöntemi kullanırlar.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Malzeme Adı	Katalog # / Model	Şirket	Yorum
Mikroskop	BX51WI modeli	Olympus, ABD
Stereo mikroskop	MZ75	Leica Microsystems Inc ABD
1.0 mm borosilikat kılcal boru filament	1B100F-3	TEFE A.Ş., FL
Mikropipet çektirmesi	P-97	Sutter Instruments, CA
Stimulus denetleyicisi	CS-55 model	Syntech, Almanya
Yüksek Empedans pre-amplifikatörler (Evrensel Tek sona erdi prob)		Syntech, Almanya
Amfi / veri toplama sistemi (USB IDAC)		Syntech, Almanya
EAG Mikromanipülatör MP-12		Syntech, Almanya
(Z, Z) -11,13-hexadecadienal		Bedoukian Research Inc, CT.
Whatman filtre kağıdı	1001070	Whatman ABD
5 ml polipropilen şırınga	309633	BD Şırınga, NJ
pipet ucu (200 mcL)	1111-0806	ABD Bilimsel Inc.
669 ml beslenme çantası, 13 x 13 cm boy, 4.5 cm,		Rubbermaid
Thirsty Ultra Emici, 27,9 x 27,9 cm		Safeway
Sigara kuruyan kil	18150	Claytoon, Van Aken International, CA
Çevre haznesi	I-30BLL modeli