JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Epidermal melanin tenli UV duyarlı insan bir fare modelinde forskolin topik uygulanmasıyla elde edilir. En az eritematöz doz (MED) deneyi ile ölçüldüğü gibi güçlü bir UV aracılı enflamasyonun (güneş yanığı) karşı koruma koyulaşması deri ve epidermal cAMP düzeyleri farmakolojik manipülasyonu.

Özet

Cilt, UV duyarlılığı ve cilt kanseri riskinin Adil tüm melanokortin 1 reseptörünün fizyolojik işlevi, melanosit yüzeyinde bulunan bir G s-bağlanmış bir sinyal gönderme proteini ile ilişkilidir. MC1R da, ciltteki melanin melanositik üretimini düzenler, adenilil siklazı ve cAMP üretimini uyarır. MC1R sinyal UV yaralanmalara karşı korur hangi mekanizma ile incelemek için bu çalışma, kök hücre faktörü (SCF) ve epidermal ifade göre "hümanize deri" ile, bir fare modelinde dayanır. K14-Scf transgenik fareler de melanosit korumak Bu nedenle epidermis ve epidermiste melanin yatırmak yeteneğine sahiptir. Bu hayvan modelinde, siyah eumelanin pigment ve bir UV-korumalı fenotip sağlam birikimi yabani tip MC1R durumu ile sonuçlanır. Bunun aksine, arızalı MC1R sinyal yeteneğini sergilerler bir sarı / kırmızı bir pigmentasyon, deride çok az eumelanin ile K14-Scf hayvanlarBir UV duyarlı fenotip. Bu eumelanin birikmesini akıl MC1R sinyali taklit topik maddeler ile geliştirilmiş olabilir, biz MC1R arızalı tenli farelerin derisine forskolin özü doğrudan uygulama sağlam eumelanin indüksiyon ve UV koruması 1 neden olduğunu bulduk. İşte biz hazırlıyoruz ve K14-Scf tenli farelere bir forskolinle içeren doğal kök ekstresi uygulanması ve minimal eritem dozu (MED) belirlenerek UV duyarlılığını ölçmek için bir yöntem bildirmek için yöntem açıklanmaktadır. Bu hayvan modeli kullanılarak, bu cildin epidermal cAMP indüksiyon ve melanizm UV maruziyeti fizyolojik tepkileri nasıl etkilediğini incelemek mümkündür.

Giriş

Melanom insidansı, cilt kanserinin en ölümcül formu, özellikle açık tenli bireyler arasında, Amerika Birleşik Devletleri'nde son birkaç yılda önemli ölçüde artmıştır. Güçlü ve moleküler epidemiyolojik kanıtlar önemli bir etken çevresel faktör 2-5 gibi UV radyasyonu implicates. Güneşe maruz kalma ve bronzlaşma yatak kullanım şeklinde artan UV ışınlarına maruz kalma melanom insidansında 6-7 artışların çok sorumlu olması muhtemeldir. Melanom riski özellikle güneş yanığı 8, hayatında 9-10 erken özellikle de bağlantılı görünüyor. Güneş yanığı tehlikesi dozu ve UV ışınlarına maruz kalma yoğunluğu, aynı zamanda UV ışınlarına cilt cevabı etkileyen kalıtsal faktörler tarafından sadece bağlantılıdır. Cilt pigmentasyon UV duyarlılığı en önemli belirleyicilerinden biri, güneş yanığı ve kanser riski riskidir. Melanom koyu tenli individua göre açık tenli kişilerde yaklaşık yirmi kat daha sık görülür11-13 ls.

Melanin, epidermis melanositler tarafından üretilen bir pigment, cilt cilt temel belirleyicisidir. (1) eumelanin, UV radyasyon enerjisini emici etkili bir koyu kahverengi / siyah pigment, ve (2) Pheomelanin, deri içine UV foton nüfuz etmesini engelleyen daha az etkili olan bir kırmızı / sarı pigment: Melanin iki ana çeşitleri geliyor. Cilt rengi, UV duyarlılığı ve melanom riski büyük ölçüde epidermal eumelanin içeriği 14-15 tarafından belirlenir. Epidermiste daha eumelanin, daha az UV foton deri içine nüfuz edebilir. Çünkü eumelanin düşük doğuştan düzeyleri, açık tenli bireyler çok daha fazla eğilimli UV radyasyonunun 16-18 akut ve kronik etkileri vardır.

Cilt pigmentasyon, melanoma risk ve "tan" UV maruz kaldıktan sonra tüm melanokortin reseptörü 1 (MC1R) sinyalleme yeteneği ile ilişkili, bir G s birleştirilmiş yedi transmembran s yeteneğimelanosit 19-22 sert bir yere reseptör. MC1R aynı kökten gelen yüksek afiniteli bir ligandın, α-melanosit uyarıcı hormon (α-MSH) bağlanan, ikinci haberci cAMP'nin 23 adenilil siklaz ve üretim aktivasyonu mevcuttur. UV ışınlarına maruz kalan cilt, normal fizyolojik bir cevap keratinositler 24-29 tarafından α-MSH epidermal üretimi içerir. Biz ve diğerleri keratinosit kaynaklı α-MSH adenilil siklaz 30 aktivasyonu ile cAMP ikinci haberci aşağı üretimini başlatarak, epidermal melanositler MC1R bağlar varsayımında. cAMP seviyeleri hayatta kalma yollar, DNA tamiri ve pigment sentezi gibi melanosit farklılıkların birçok yönünü kontrol. MC1R sinyalizasyon ve cAMP açıkça pigment enzim düzeylerini ve eumelanin üretimini uyarmaktadır. MC1R sinyalizasyon sağlam ve melanositik cAMP düzeyleri sağlam olduğunda, eumelanin üretilen ve cilt karartan. Ancak, MC1R sinyal arızalı olup olmadığını vesitoplazmik cAMP düzeyleri düşük kalması, Pheomelanin 1 yerine üretilmektedir. Eumelanin sentez cAMP düzeylerini yükseltmek 1,14,31-35 ajanları tarafından farmakolojik teşvik edilebilir.

MC1R proteini insanlarda 36-46 melanom riski önemli bir düzenleyici olduğundan, MC1R UV-kaynaklı kanser oluşumuna karşı koruyan melanosit hangi mekanizmalar ilgilendi. Bizim çalışmalar için bir temel olarak, biz saf C57BL / 6 genetik birikimine 1 bir transgenik MC1R-varyant fare modeli oluşturulur. Bu modelde, kurucu bazal epidermis içinde ifade edilir ve epidermal interfolliküler melanosit saç folikülleri dermise lokalize melanosit edildiği transjenik olmayan farelerde aksine, yaşam 47 boyunca deri korunur hücre faktörü (SCF) kaynaklanıyor. K14-Scf transgen dahil ile, epidermis pigmentin özellikle melanin pigmentleri ile pigmentli hale karakteristikhayvanın 1 suşu. vahşi tip MC1R sinyalizasyon ile C57BL / 6 genetik birikimine K14-Scf fareler jet-siyah deri eumelanin pigment çok yüksek düzeylerde olması. Şaşırtıcı olmayan bu hayvanlar yüksek UV ışınlarına dayanıklıdır. Buna karşılık, mutant etkin MC1R barındıran genetik olarak uyumlu K14-Scf C57BL / 6 hayvan epidermiste hemen hemen hiç eumelanin vardır. Bunun yerine, bu "uzantısı" hayvanlar (MC1R e / e) Pheomelanin pigment (Şekil 1A) birikimi neden adil bir cilt cilt var ve çok daha fazla UV-duyarlı 48-49 vardır.

Deri içine nüfuz etmesini kimyasal özelliklere sahip farmakolojik bileşikler, potansiyel olarak doğrudan deri epidermal melanositlerin cAMP seviyelerini işleyerek uzantısı (MC1R e / e) K14-Scf hayvan modeli olarak eumelanin neden olduğu gösterilmiştir. Bu modelde Melanin upregülasyonu r olmuşturadenilat siklaz aktive 1 hem de fosfodiesteraz 4 inhibisyon 35 tarafından görülen EPO kaynaklı. Bu yazıda, uzantısı (MC1R e / e) K14-Scf hayvanlar modeli tenli UV duyarlı insan olarak hazırlanması ve forskolın topikal uygulama göstermektedir. Bu ilacın günde iki kez uygulanması, hızlandırılmış melanization teşvik ettiği cilt koyulaşması melanin pigmentinin epidermal birikimi nedeniyle ve bu neden olduğu epidermal melanin "minimal eritem dozu" (MED) 48 ölçümü ile UV uyarımlı güneş yanığı karşı koruduğunu göstermektedir.

Protokol

1.. Plectranthus barbatus (Cohleus forskohlii) Fabrikası'nın bir Ham Kök Özü Topikal İdaresi Forskolin hazırlanması

  1. Kemirgen deneyler için Protokoller hayvanların bakımı ve kullanımında etik davranış için yönergeleri takip ve Kentucky Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (Protokol # 00768M2004) tarafından onaylanmıştır. Kök ekstresi% 70 etanol, standart bir dermatolojik bazında,% 30 propilen glikol içinde% 40 ağırlık / hacim olarak oluşur.
  2. Ham forskolin kök ekstresi 200 g tartılır ve bir şişeye aktarın. % 40'lık 500 ml (w / v) solüsyonu, aracın tüm miktar (% 70 etanol,% 30 propilen glikol) en değil eklenerek ham forskolin kök ekstresi, 200 g yapmak ve tekrar süspansiyon için çözüm getirmek için, yaklaşık 450 ml.
  3. Oda sıcaklığında bir saat boyunca karıştırılır. Çözelti, biraz yapışkan olacak ve daha önce çözelti haline "kaldırma" özüt için elle çalkalama gerektirebilirkarıştırma çubuğu devralması mümkün değildir.
  4. Karıştırılarak bir saat sonra, dereceli bir silindir içine dökün ve (kaptan forskolin kurtarma üst düzeye çıkarmak için) bulamacı karışmaya için kullanılan beher "durulama" olarak kullanılmıştır araç kullanarak 500 ml hacim getirmek .
  5. 50 ml polipropilen santrifüj tüplerine bulamacı aktarın. Bir masa üstü santrifüj kullanılarak santrifüj (1500 xg, oda sıcaklığı, 15 dk). Bu noktada, çözünmeyen madde yüzer kolayca dökülerek izin vererek, oldukça yoğun olacaktır.
  6. Ekstreden kalan çözünmez malzemenin çıkarılması için 0.22 um selüloz asetat zarından solüsyonu filtre. Bu kök ekstresi çözünmeyen bileşenlerden zarın erken tıkanmasını önlemek için ünite ile birlikte ön filtrelerin kullanımı ile birlikte, hücre kültürü için tasarlanmış bir şişe-top sistemi kullanırlar. Ekstrenin geniş hacimli yaparken, ön filtre bahis değiştirme, bir seferde yaklaşık olarak 100 ml filtreHer ekledi hacmi arasında bir aracıdır.
  7. Oda sıcaklığında depolandığında, özüt kadar bir yıl için biyolojik faaliyeti tutar.

2. Topikal Tedaviler için C57BI / 6 K14-Scf Farelerin hazırlanması

  1. Elektrik kesme ile hayvanlardan dorsal kürk çıkarın. Kısaca 0.25 mm cerrahi hazırlık kafa (Fisher Scientific) ile donatılmış elektrikli makas ile dorsal kürk kesme kolaylaştırmak için inhalasyon izofluran ile hayvanları uyutmak. Tercihen sadece anestezik doz aşımı riskini en aza indirmek için anestezi bir tür (örneğin, ketamin / ksilizin) kullanın. Doymuş teneffüs odası davlumbaz dışında kullanıldığında mesleki risk taşır ve hayvanlara anestezik bilinmeyen miktarda sunar. İdeal olarak hassas bir buharlaştırıcı kullanılmalıdır.
  2. , Artık saç anız kaldırmak kimyasal bir dökücü olan hayvanları tedavi etmek. Ketamin 40 mg / kg ksilazin ve 4 mg / kg 'lik bir ip enjeksiyonu ile hayvana anesteziklere
  3. Hayvanlar yeterince (ayak tutam tarafından değerlendirilecek gibi) anestezi sonra, eldivenli parmak kullanılarak makaslanmış dorsal deri tüy dökücü krem ​​parmak ucu büyüklüğünde uygulayın. 30-60 saniye için ya da etrafında taşınırken olarak kıllar açık krem ​​görülebileceği kadar, deri içine krem ​​sürün. Uzun süre maruz kalma epidermal bütünlüğü kaybı deri, epidermal arıza ve ölüm kimyasal yakma neden olarak sadece epilasyon için gereken zaman en az miktarda üzerinde krem ​​bırakın.
  4. Tüm krem ​​kaldırıldı kadar tekrar tekrar su ile ıslatılmış gazlı bez ile dorsal cildinizi silin. Yumuşak kağıt havlu kullanarak ve onları sıcak bir tenha bir yerde (örn. temiz kafesler bir ısınma pad yerleştirilen) kurtarmak için izin kuru hayvanlar. Tek-tek hayvanların tüylerini ve işlem boyunca yakından izlemek.

3. Forskolin veya Araç Kontrol topikal uygulaması

  1. Hayvanlar, her seferinde bir tedavi edilmelidir. Kısaca nefes ile uyutmakaltında bir form takılmış naylon hava geçirgen filtrenin üstüne fare koyarak d izofluran bir davlumbaz izofluran-doymuş kapaklı şeffaf cam kavanozda bir izofluran-doymuş kağıt havlu yerleştirilir olmuştur. Istemli kas hareketleri bastırmak için ama spontan solunumu (genellikle 10-20 sn) korumak için yeterli bir süre için izoflurana fareyi Açığa. Çok uzun izofluran olarak hayvan bırakmak solunum bastırılması ve ölüme neden olur. Bu "ışık olacak" ve uyuşturucu ve risk ölüme hayvan maruz aşırı fazla izofluran yerine kısaca fareyi yeniden ortaya çıkarmak için sahip tarafında err daha iyidir.
  2. Izofluran odasından hayvan çıkarın ve temiz bir tezgah emici ped üzerine yerleştirin.
  3. Bir tek polipropilen ucu ile donatılmış 1.000 ul mikropipet,% 40 ham forskolinle ekstresinin 400 ul çizmek kullanma (araç kontrol hayvanları% 70 etanol, tek başına% 30 propilen glikol alacaksınız).
  4. Üzerine özü aktarınTüm cilt kapalı edildikten sonra tekrar pipet tarafını kullanarak, sonra derinin üzerine damlayan tarafından hayvan, dorsal cilt üzerinde özü smear. Uygulamadan sonra deri leke hiç gerek yoktur.
  5. Kendi kafesine fare dönün, ve anestezi kurtarır kadar dikkatle gözlemlemek.
  6. Non-pigment cAMP etkileri UV duyarlılık deneyleri yıkmak gerektiğini amacıyla, UV ışınlarına maruz kalma (pigment etkisi son topikal tedavi ötesinde birkaç gün sürer) 2 gün önce tüm topikal tedaviler durdurma.

4. Yansıtıcı Kolorimetre Göre Renk Ölçüm Cilt

  1. Kısaca inhale izofluran (yukarıya bakınız) ile fare uyutmak.
  2. Kolorimetresi ile sağlanan standart beyaz bir yüzeye taşınabilir başını koyarak bir Minolta renk ölçer kalibre.
  3. Sağlanması hayvanın sırt deri ile kolorimetre floş portatif ölçüm kafasını yerleştirin bu 1 cm 2 yuvarlak aperture tam olarak deri üzerine bastırılır. Dorsal deri farklı alanlarında, en az üç ayrı ölçüm al.
  4. Hayvan başına ve tedavi grubu başına ortalama ± SD L * puanı hesaplayabilirsiniz. Yansıtıcı kolorimetre deneyde herhangi bir noktasında yapılabilir.

5. "Minimal eritem Doz" (MED) Hesaplama UV Hassasiyet Belirlenmesi

  1. Araç ya da yukarıda tarif edildiği gibi ya da forskolin ile ön-muamele edilmiş hayvanlar kullanın. Ketamin ve ksilazin (yukarıya bakınız) standart bir karışımın peritoneal içi enjekte hayvanları anestezisi.
  2. MED test için UV-tıkayıcı bir parça bant hazırlayın. , Bant delik oluşturmak bir 1 cm 2 dairesel kesme ile ağır delgi (Şekil 2A ve B) kullanın. Bandın bir tanımlanmış boyut ve simetrik düzeneğinin delikleri sahip ışınlama sonrası cilt değişikliklerinin fark edilmesini kolaylaştırır. Bant her delik üzerinde, bir küçük ama kolayca sökülebilir parça geçerlidir UV farklı dozlarda uygulanmasını sağlamak için UV ışınlarına maruz kalma sırasında belirli zaman aralıkları ile kaldırılabilir bant.
  3. Hayvanlar yeterince sedasyon sonra, dorsal yüzeyinde bant yer. Göz yağ zaman anestezi altında kullanılmalıdır.
  4. İki Westinghouse F15T8UV-B, aşağıdakilerden oluşan UV kaynağı açın 313 nm'lik bir zirve çıkış ve 280-370 nm bir dizi lambalar. (Genellikle ısınmak için lambalar için birkaç dakika sürer) bir UVB sensörü ile UV fotometre ile ölçülen lambası sürekli UV çıkışına gelmesini sağlayın.
  5. UV Fotometresi ile ölçülen UV aktarım oranına göre, arzu edilen her bir doz için UV ışınlarına maruz kalma süresini hesaplamak. Örneğin, lambanın UVB çıkışı önlemleri 2.4 mW / cm 2. Bu yüzden, 5 kJ / m 2 'yönetmek için, cilt altındaki hesaplanan, UVB radyasyon (3 dakika ve 28 saniye olan) 208 saniye maruz kalması gerekir:
    upload/50670/50670eq1.jpg "/>
  6. Hatta UV pozlama sağlamak için ventral yüzeyi aşağı sakinleşmiş hayvanları (yerinde tıkayıcı bant ile her biri) yerleştirin. UV radyasyon seçilmiş dozları uygulama için, ardışık olarak radyasyon doğru doz 1 cm'lik deri 2 alanlarını açığa çıkarmak için küçük bir delik içeren tıkayıcı bantları çıkarın. 40 kJ / m 2 deneyinde en yüksek dozu ise, Bu nedenle, yukarıdaki örneği kullanarak, daha sonra herhangi bir hayvan olurdu 40 kJ / m 2 'bir durumda 27 dakika ile 47 saniye toplam ve cilt için lamba altında olacaktır bantlamayın süre boyunca örten. Maruz kalan 208 saniye olduğu, ancak, 5 kJ / m 2 durum üzerinde uzanan bant çıkarılır. Her koşul aynı anda biter böylece kaset çıkarma zamanlaması yapılmalıdır.
  7. UV ışınlarına maruz kalan, ani ya da aşırı güçlü hareketleri ile cilde rip özen dikkatle dorsal cilt şeridi sıyırın. Izin vermek için bir sıcak, sakin bir yerde hayvanları yerleştirinanestezi kurtarma.
  8. Eritem (kızarıklık) veya ödem gizli alanları aramak için 24-48 saat boyunca fareler Monitör (şişme) UV ışınlama özel doza maruz kalan anatomik sitelerine karşılık gelmektedir. Fotografik cilt bulguları belgelemek.
  9. MED değer eritem ve / veya derinin bütün maruz çemberin ödem ile tanımlanan iltihabı neden UV en az doza karşılık gelir. Cilt pigmentasyon Ancak eritem ve ödem yine genel olarak doğru, kısmen, UV ışınlarına maruz kalma sırasında bant açıklıkların tanımlanan şekli sayesinde değerlendirilebilir, MED belirlenmesi meydan unutmayın.

6. İstatistiksel Analiz

Bonferroni sonrası testinde (Graph Pad PRISM). P değerleri <0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmektedir ile tek yönlü ANOVA ile farelerin kohort arasındaki verileri analiz.

Sonuçlar

C57BL / 6 fareleri, tarif edildiği gibi (Şekil 1A) halinde K14-Scf transgen içeren, eumelanotic pheomelanotic veya amelanotik arka üzerinde elde edildi. Tenli uzatma kohortu (MC1R e / e, Tyr + / +) fareler araç (% 70 etanol,% 30 propilen glikol) veya% 40 ham Coleus forskohlii kök ekstresi (80 uM başına ya da günde iki kez dozları ile topik olarak tedavi edilmiştir 5 gün (Şekil 2B) için) doz. Epidermal pigmentasyon topikal tedavilerin...

Tartışmalar

Tenli insan bir hayvan modeli kullanarak, bir forskolinle zengin ham kök ekstresinin topikal uygulama sağlam deride melanin üretimini uyararak epidermis kararıyor bulabilirsiniz. Epidermal melanizm insan derisinde meydana geldiği gibi, bazal epidermis içinde kök hücre faktörü ifade bağlıdır, ancak genetik olarak modifiye edilmemiş bir fare deri. Genetik olarak modifiye edilmemiş farelerin sırt derisi cilde pigment vermek için interfolliküler melanosit yeterli sayıda yoksundur. Ancak bu tür kök hücr...

Açıklamalar

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Teşekkürler

Yazarlar, teknik yardım için Malinda SPRY teşekkür etmek istiyorum. Biz de mevcut ve geçmiş finansman kaynaklarını kabul: Ulusal Kanser Enstitüsü (R01 CA131075, R01 CA131075-02S1), Wendy Will Vaka Kanser Araştırma Fonu, Markey Kanseri Vakfı, Çocuk Miracle Ağ ve Jennifer ve David Dickens Melanom Araştırma Vakfı.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Reagents
Coleus Forskoli extract 20%Buckton Scott USA Inc.n/aPrinceton, NJ
Isothesia, Isoflurane , USPButler ScheinNCD 11695-6776-1Dublin, OH, USA
XylazineAnased InjectionLA04612Shenandoah, Iowa, USA
Ketamine HCl, USPPutneyNDC 26637-411-01St. Joseph, MO, USA
EthanolDecon Labs.2705
Propylene glycolAdesco05751LSolon, OH, USA
Depilatory cream, NairChurch DwightJF-11 4381322Priceton, NJ
EQUIPMENT
Germicidal Hg Lamp UV-BWestinghouseF15T8UV-B
Radiometer photometerInternational light1LT400APeabody, MA,USA
ChromameterKonica MinoltaCR-400Ramsey, NJ, USA
Data Processor for Chromameter CR-400Konica MoniltaDR-400Ramsey, NJ, USA

Referanslar

  1. D'Orazio, J. A., et al. Topical drug rescue strategy and skin protection based on the role of Mc1r in UV-induced tanning. Nature. 443, 340-344 (2006).
  2. Gallagher, R. P., et al. Suntan, sunburn, and pigmentation factors and the frequency of acquired melanocytic nevi in children. Similarities to melanoma: the Vancouver Mole Study. Arch Dermatol. , 126-770 (1990).
  3. Kraemer, K. H., Lee, M. M., Andrews, A. D., Lambert, W. C. The role of sunlight and DNA repair in melanoma and nonmelanoma skin cancer. The xeroderma pigmentosum paradigm. Arch Dermatol. 130, 1018-1021 (1994).
  4. Wang, Y., et al. Evidence of ultraviolet type mutations in xeroderma pigmentosum melanomas. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 6279-6284 (2009).
  5. Pleasance, E. D., et al. A comprehensive catalogue of somatic mutations from a human cancer genome. Nature. 463, 191-196 (2009).
  6. Weinstock, M. A., Fisher, D. E. Indoor ultraviolet tanning: what the data do and do not show regarding risk of melanoma and keratinocyte malignancies. J. Natl. Compr. Canc. Netw. 8, 867-873 (2010).
  7. Fisher, D. E., James, W. D. Indoor tanning--science, behavior, and policy. N. Engl. J. Med. 363, 901-903 (2010).
  8. Pfahlberg, A., Kolmel, K. F., Gefeller, O. Timing of excessive ultraviolet radiation and melanoma: epidemiology does not support the existence of a critical period of high susceptibility to solar ultraviolet radiation- induced melanoma. Br. J. Dermatol. 144, 471-475 (2001).
  9. Lew, R. A., Sober, A. J., Cook, N., Marvell, R., Fitzpatrick, T. B. Sun exposure habits in patients with cutaneous melanoma: a case control study. J. Dermatol. Surg. Oncol. 9, 981-986 (1983).
  10. Autier, P., Dore, J. F. Influence of sun exposures during childhood and during adulthood on melanoma risk. EPIMEL and EORTC Melanoma Cooperative Group. European Organisation for Research and Treatment of Cancer. Int. J. Cancer. 77, 533-537 (1998).
  11. Udayakumar, D., Mahato, B., Gabree, M., Tsao, H. Genetic determinants of cutaneous melanoma predisposition. Semin. Cutan. Med. Surg. 29, 190-195 (2010).
  12. Psaty, E. L., Scope, A., Halpern, A. C., Marghoob, A. A. Defining the patient at high risk for melanoma. Int. J. Dermatol. 49, 362-376 (2010).
  13. Tucker, M. A. Melanoma epidemiology. Hematol. Oncol. Clin. North Am. 23, 383-395 (2009).
  14. Abdel-Malek, Z. A., Knittel, J., Kadekaro, A. L., Swope, V. B., Starner, R. The melanocortin 1 receptor and the UV response of human melanocytes--a shift in paradigm. Photochem. Photobiol. 84, 501-508 (2008).
  15. Suzuki, I., et al. Participation of the melanocortin-1 receptor in the UV control of pigmentation. J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 4, 29-34 (1999).
  16. Gibson, G. E., Codd, M. B., Murphy, G. M. Skin type distribution and skin disease in Ireland. Ir. J. Med. Sci. 166, 72-74 (1997).
  17. Evans, R. D., et al. Risk factors for the development of malignant melanoma--I: Review of case-control studies. J. Dermatol. Surg. Oncol. 14, 393-408 (1988).
  18. Pack, G. T., Davis, J., Oppenheim, A. The relation of race and complexion to the incidence of moles and melanomas. Ann. N.Y. Acad. Sci. 100, 719-742 (1963).
  19. Valverde, P., Healy, E., Jackson, I., Rees, J. L., Thody, A. J. Variants of the melanocyte-stimulating hormone receptor gene are associated with red hair and fair skin in humans. Nat. Genet. 11, 328-330 (1995).
  20. Rees, J. L., Healy, E. Melanocortin receptors, red hair, and skin cancer. J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2, 94-98 (1997).
  21. Beaumont, K. A., et al. Melanocortin MC(1) receptor in human genetics and model systems. Eur. J. Pharmacol. 660, 103-110 (2011).
  22. Palmer, J. S., et al. Melanocortin-1 receptor polymorphisms and risk of melanoma: is the association explained solely by pigmentation phenotype?. Am. J. Hum. Genet. 66, 176-186 (2000).
  23. Haskell-Luevano, C., et al. Compounds that activate the mouse melanocortin-1 receptor identified by screening a small molecule library based upon the beta-turn. J. Med. Chem. 42, 4380-4387 (1999).
  24. Yamaguchi, Y., Hearing, V. J. Physiological factors that regulate skin pigmentation. Biofactors. 35, 193-199 (2009).
  25. Eves, P. C., MacNeil, S., Haycock, J. W. alpha-Melanocyte stimulating hormone, inflammation and human melanoma. Peptides. 27, 444-452 (2006).
  26. Slominski, A., Wortsman, J., Luger, T., Paus, R., Solomon, S. Corticotropin releasing hormone and proopiomelanocortin involvement in the cutaneous response to stress. Physiol. Rev. 80, 979-1020 (2000).
  27. Slominski, A., Wortsman, J. Neuroendocrinology of the skin. Endocr. Rev. 21, 457-487 (2000).
  28. Luger, T. A., et al. Role of epidermal cell-derived alpha-melanocyte stimulating hormone in ultraviolet light mediated local immunosuppression. Ann. N.Y. Acad. Sci. 885, 209-216 (1999).
  29. Chakraborty, A. K., et al. UV light and MSH receptors. Ann. N.Y. Acad. Sci. 885, 100-116 (1999).
  30. Cui, R., et al. Central Role of p53 in the Suntan Response and Pathologic Hyperpigmentation. Cell. 128, 853-864 (2007).
  31. Imokawa, G., Yada, Y., Hori, Y. Induction of melanization within hair bulb melanocytes in chinchilla mutant by melanogenic stimulants. J Invest Dermatol. 91, 106-113 (1988).
  32. Siegrist, W., et al. Interactions of alpha-melanotropin and agouti on B16 melanoma cells: evidence for inverse agonism of agouti. J. Recept. Signal Transduct Res. 17, 75-98 (1997).
  33. Abdel-Malek, Z., et al. The melanocortin-1 receptor is a key regulator of human cutaneous pigmentation. Pigment Cell Res. 13, 156-162 (2000).
  34. Wood, J. M., Gibbons, N. C., Schallreuter, K. U. Melanocortins in human melanocytes. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 52, 75-78 (2006).
  35. Khaled, M., Levy, C., Fisher, D. E. Control of melanocyte differentiation by a MITF-PDE4D3 homeostatic circuit. Genes Dev. 24, 2276-2281 (2010).
  36. Ghiorzo, P., et al. MC1R variation and melanoma risk in relation to host/clinical and environmental factors in CDKN2A positive and negative melanoma patients. Exp. Dermatol. , (2012).
  37. Cust, A. E., et al. MC1R genotypes and risk of melanoma before age 40 years: a population-based case-control-family study. Int. J. Cancer. 131, E269-E281 (2012).
  38. Ibarrola-Villava, M., et al. Genetic analysis of three important genes in pigmentation and melanoma susceptibility: CDKN2A, MC1R and HERC2/OCA2. Exp Dermatol. 19, 836-844 (2010).
  39. Scherer, D., et al. Melanocortin receptor 1 variants and melanoma risk: A study of 2 European populations. Int. J. Cancer. , (2009).
  40. Hoiom, V., et al. MC1R variation and melanoma risk in the Swedish population in relation to clinical and pathological parameters. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 196-204 (2009).
  41. Galore-Haskel, G., et al. MC1R variant alleles and malignant melanoma risk in Israel. Eur. J. Cancer. 45, 2015-2022 (2009).
  42. Sturm, R. A. Skin colour and skin cancer - MC1R, the genetic link. Melanoma Res. 12, 405-416 (2002).
  43. Kennedy, C., et al. Melanocortin 1 receptor (MC1R) gene variants are associated with an increased risk for cutaneous melanoma which is largely independent of skin type and hair color. J. Invest. Dermatol. 117, 294-300 (2001).
  44. Box, N. F., et al. MC1R genotype modifies risk of melanoma in families segregating CDKN2A mutations. Am. J. Hum. Genet. 69, 765-773 (2001).
  45. Rees, J. L. The melanocortin 1 receptor (MC1R): more than just red hair. Pigment Cell Res. 13, 135-140 (2000).
  46. Valverde, P., et al. The Asp84Glu variant of the melanocortin 1 receptor (MC1R) is associated with melanoma. Hum. Mol. Genet. 5, 1663-1666 (1996).
  47. Kunisada, T., et al. Transgene expression of steel factor in the basal layer of epidermis promotes survival, proliferation, differentiation and migration of melanocyte precursors. Development. 125, 2915-2923 (1998).
  48. Vanover, J. C., et al. Stem cell factor rescues tyrosinase expression and pigmentation in discreet anatomic locations in albino mice. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 827-838 (2009).
  49. Spry, M. L., et al. Prolonged treatment of fair-skinned mice with topical forskolin causes persistent tanning and UV protection. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 219-229 (2009).
  50. Takayama, H., La Rochelle, W. J., Anver, M., Bockman, D. E., Merlino, G. Scatter factor/hepatocyte growth factor as a regulator of skeletal muscle and neural crest development. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 5866-5871 (1996).
  51. Kunisada, T., et al. Murine cutaneous mastocytosis and epidermal melanocytosis induced by keratinocyte expression of transgenic stem cell factor. J. Exp. Med. , 187-1565 (1998).
  52. Takeuchi, T., Kobunai, T., Yamamoto, H. Genetic control of signal transduction in mouse melanocytes. J. Invest. Dermatol. 92, 239S-242S (1989).
  53. Ozeki, H., Ito, S., Wakamatsu, K., Hirobe, T. Chemical characterization of hair melanins in various coat-color mutants of mice. J. Invest. Dermatol. 105, 361-366 (1995).
  54. Lamoreux, M. L., Wakamatsu, K., Ito, S. Interaction of major coat color gene functions in mice as studied by chemical analysis of eumelanin and pheomelanin. Pigment Cell Res. 14, 23-31 (2001).
  55. Barbini, P., et al. Instrumental measurement of skin colour and skin type as risk factors for melanoma: a statistical classification procedure. Melanoma Res. 8, 439-447 (1998).
  56. Takiwaki, H. Measurement of skin color: practical application and theoretical considerations. J. Med. Invest. 44, 121-126 (1998).
  57. Anderson, R. R., Parrish, J. A. The optics of human skin. J. Invest. Dermatol. 77, 13-19 (1981).
  58. Rubegni, P., et al. Relationship between skin color and sun exposure history: a statistical classification approach. Photochem. Photobiol. 65, 347-351 (1997).
  59. Chen, J., Hammell, D. C., Spry, M., D'Orazio, J. A., Stinchcomb, A. L. In vitro skin diffusion study of pure forskolin versus a forskolin-containing Plectranthus barbatus root extract. J. Nat. Prod. 72, 769-771 (2009).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 79CiltiltihapFotometriUltraviyole I nlarCilt Pigmentasyonmelanokortin 1 resept rMC1R forskolinlecAMPortalama eritemat z dozderi pigmentasyonumelanositmelaning ne yanUVinflamasyon

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır