JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Rats anksiyete gibi davranış tarafından yükseltilmiş test artı labirent çok test ortamına bağlı olarak değişir. İşte aparat ayarları, özellikle kol yapısı, labirent davranış nasıl etkiler göstermektedir ve anksiyolitik ilaçların etkileri algılamak için güvenilir bir protokolü açıklar. Bu rapor için anksiyete Araştırma katkıda bulunacaktır.

Özet

Yükseltilmiş artı labirent testi kemirgen hayvan kaygı değerlendirmek için davranışsal bir test. Bu test yaygın davranış bilimleri alanında uygulanan rağmen çelişkili sonuçlar kez farklı laboratuvarlar sağlanır. Farklı sonuçlar için nedenleri tanımlamak için biz daha önce laboratuvarlar arasında çoğu özellikle varlığı/çıkıntıları kollarını açarak kenarlarına ve şeffaflık/solukluk kapalı kol duvarların olmaması farklı kol özellikleri üzerinde duruldu. Önceki raporunda, açık ve kapalı kol tasarımlar Aksi takdirde aynı deneysel koşullarda farklı kombinasyonları üzerinde fare davranışı karşılaştırmak için özel tasarlanmış konteyner kullanılan ve kol şekil farklılıkları ile deneysel müdahale gösterdi sonuçlar. Kısacası, şeffaf silah da bu davranış azalmış iken de, fareler, kol çıkıntıları önemli ölçüde artmış anksiyete gibi davranış açın. Ayrıca, bir Hayır ledged açık kol + opak duvarlı kapalı kol ledged açık kol + saydam duvarlı kapalı kol kombinasyonu ile karşılaştırıldığında bir arada bir anksiyolitik ilaç etkisini daha yüksek algılama hassasiyeti doğrulanmadı. Bu raporda, biz bizim yükseltilmiş için iletişim kuralı artı labirent testi, önceki rapor ve deneysel deneyimlerimiz anahtar sonuçları tartışılması ile birlikte tanıtmak. Biz bu raporu kim istihdam veya kim çalışmalarında labirent artı moralin kullanabilirsiniz planlıyoruz araştırmacılar için yararlı bilgiler sağlar inanıyoruz.

Giriş

Hastalarda anksiyete bozukluğu ve depresyon gibi duygudurum bozuklukları sayısı artmaktadır. Bu bozuklukların gelişimi genetik ve çevresel faktörler içerir rağmen detaylı patojenik mekanizmaları henüz tam olarak anlaşılır1değildir. Bu nedenle, araştırma duygudurum bozuklukları temel mekanizmaları yanı sıra daha az yan etkileri vardır etkili ilaçlar gelişimi ortaya çıkarılması üzerinde odaklanmak gerekir.

Davranış testleri için Laboratuvar hayvanlarının beyin daha yüksek işlev, duygu dahil olmak üzere araştırma için yararlıdır. Hayvan davranışları son derece değişken olduğu gibi aynı bir doğuştan zorlanma kullanılan2olsa bile deneysel sonuçlar genellikle laboratuvarlar arasında farklı. Böylece, Araştırmacılar ayrıca laboratuvar güvenilir, kesin sonuçlar sağlamak için evlat edinmek deneysel cihazları temel özellikleri anlamanız gerekir.

Yükseltilmiş artı labirent testi aslında duygusal reaktivite kemirgenler3,4incelemek için kurulmuştur. Tüm cihazlar genellikle 500 mm yerden ve iki açık ve artı bir şekil oluşturmak iki kapalı kolu oluşur. Ölçümleri (süresi ve her kol girişlerde sıklığı dahil), kol keşif mesafe seyahat ve belirtilen davranışları gibi gözlemsel dönemlerde gergin-uzman doktor duruş tabi hayvanların kaydedilir. Bu önlemlerle, hayvan anksiyete deneysel bir sonucu olarak tahmin edilmektedir.

Yükseltilmiş artı labirent testi dünya çapında kullanılan ama tüm laboratuvarlar aynı aparat tasarım5,6kullanın ve bu farklar deneysel sonuçlar etkileyebilir. Örneğin, varlığı veya yokluğu çıkıntıları açık kollar boyunca ve/veya şeffaf veya opak duvarlar kullanıma kapalı silah5,6farklılıklar içerir. Çıkıntıları boyunca açık kollar açık ve şeffaf duvarlar kullanıma kapalı silah aparatı7düşüyor hayvanlar önlemek ve kapalı kollar, sırasıyla8,9içinde davranış gözlemleri kolaylaştırmak için geliştirilmiştir. Orada-si olmak be rağmen tek tek nasıl kol yapısı farklılıklarına incelendiğinde bazı çalışmalarda hayvan anksiyete1,2,5,10,11 algılama yeteneğini etkileyebilir , hayvan davranışları aç (/ kısa çıkıntı olmadan) ve kapalı (şeffaf/opak duvarlar) kol özellikleri kombine etkisi değil henüz araştırıldı.

Son raporda, bu kombinasyonlar kol tasarımları anksiyete gibi davranış fareler12etkisini tartıştık. Kısacası, şeffaf silah da bu davranış azalmış iken de, fareler, kol çıkıntıları önemli ölçüde artmış anksiyete gibi davranış açın. Ayrıca, biz daha yüksek algılama hassasiyet Hayır ledged açık kol + opak duvarlı kapalı kol ledged açık kol + saydam duvarlı kapalı kol kombinasyonu ile karşılaştırıldığında bir arada bir anksiyolitik ilaç etkisi doğrulanmadı. Bu raporda, bizim iletişim kuralı için yükseltilmiş tanıtmak artı önceki rapor anahtar sonuçları tartışılması ile birlikte test, labirent. Biz bu raporu kim istihdam veya kim çalışmalarında labirent artı moralin kullanabilirsiniz planlıyoruz olanlar için yararlı bilgiler sağlar inanıyoruz.

Protokol

Burada açıklanan tüm deneysel prosedürler kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Meiji Üniversitesi (IACUC 14-0002(1)). tarafından onaylanmış olan Hayvanlar temsilcisi sonuçlarında kullanılan aşağıdaki gibi hazırlanan: erkek Sprague-Dawley rat bir laboratuvar hayvan şirketten satın ve standart fare kafesi (W200 D410 × × H250 mm) başına 4 hayvan grupları başlamadan önce en az bir hafta için yer alan Davranışsal deney. Hayvan konut oda ışık (12:12 açık/koyu zamanlama ile 10:00 h ışıkları aç), oda sıcaklığında (25,0 ± 0,5 ° C), nem (55 ± % 10) ve havalandırma için standart ortam koşulları, devam edildi (10 kat / s), ve hayvanlar yiyecek (ad libitum erişim vardı Oriental Maya Ltd. Şti., Tokyo, Japonya) ve su. Hayvanlar bir standart fare kafese (W410 x D250 x H200 mm, Toyoriko Co, Ltd, Aichi, Japonya) (Alfa-DRI, LSG Corporatin, Tokyo, Japonya) yatak takımları kağıdına tutuldu.

1. yüksek labirent testi

  1. Yükseltilmiş artı ayarla labirent aparatı (W1, 500 × D1, 500 × H2, 000 mm) özelleştirilmiş bir kapta (Şekil 1A) bir artı şeklindeki metal çerçeve çalışma desteklemek için kat yukarıda 500 mm ile konteyner tavan aydınlatma yolu silah (Şekil 1B), labirent yüzeyine gerekli ışık şiddeti (Şekil 1 c) ve dijital video kamera canlı video davranış testleri (Şekil 1 c) izleme özelliğini etkinleştirme merkezi tavandaki aydınlatmak.
  2. Silah (L500 x W100 mm) artı şeklindeki çerçeve düzeltmek ve kare merkezi platformu (W100 x D100 mm) dört kol merkezinde düzeltin (Şekil 1 d -F).
    Not: açık silah (L500 x W100 mm) iki tür ve iki kapalı silah türleri biz bizim laboratuvar olması (L500 W100 x H450 mm x) (Şekil 1 d). Saydam ya da opak duvarlar (Şekil 1 d) kapalı silah var ve kollarını açarak veya kısa bir çıkıntı (H5 mm, Şekil 1E) olmadan tasarlanmıştır. Kare merkezi platformu (W100 × D100 mm) dört kol ortasına yerleştirilir (Şekil 1 d -F). Bu nedenle, aşağıdaki dört kombinasyonları silah göre deneysel amaçlı hazırlanabilir: açık silah çıkıntıları ile + şeffaf duvarlar (çıkıntıları/şeffaf), çıkıntıları kollarını açarak + (çıkıntıları/opak), opak duvarlı kapalı silah ile kapalı silah silah aç çıkıntıları + şeffaf duvarlar (No-çıkıntıları/saydam) ile kapalı kol ve çıkıntıları olmadan açık silah + opak ile kapalı silah olmadan (No-çıkıntıları/opak) duvarlar. Kol pist daha iyi hayvan tarafından otomatik davranış analiz yazılımı, Bölüm 2, açıklandığı gibi davranış analiz izleme etkinleştirmek için siyah bir yüzeydir.
  3. Her kol ve merkezi platformu distal uç parçası yüzeyi için yaklaşık 100 lüks aydınlatma yoğunluğunu ayarlayın.
  4. Her test önce tüm aparatı % 70 etanol çözüm ile temiz ve distile suyla silin.
  5. "Kayıt" sıçan davranış video bölüm 2'de, davranış analiz açıklanan analiz görüntüleme için kayıt olacak dijital video kamera başlatmak için sabit disk kaydedici düğmesini.
  6. Bir hayvan açık bir kol bakan merkezi platformunda koyun ve 5 min için cihaz üzerindeki ücretsiz keşif yapmasına izin verecek.
  7. Kaydı bitirmek için sabit disk kaydedici "stop butonuna" tıklayın.
  8. Dışkı ve urinations test edilmiş hayvan hayvan muhafaza odasına döndükten sonra sayar.
  9. 1.4 deneme sonuna kadar adımları yineleyin.
    Not: Bir kuru deneme için çalıştırma her zaman önce deneysel hayvan deneysel koşullar için açık olan tüm deneysel ayarları doğru ayarlanıp ayarlanmadığını kontrol etmek için her deney başlamadan önce yapılır. Aksi takdirde, bazı hayvanlar, özellikle ilk hayvan farklı çevre koşulları (Örneğin, büyük olasılıkla muhtemelen daha önce test edilmiş hayvan tarafından yaptı manipülasyon ve/veya hayvan cues sırasında deneyci tarafından indüklenen sesler) karşılaşabilirsiniz.
    Not: bir hayvan test edilirken Denemecileri kapsayıcı vardır. Böylece, fareyi Denemecileri görünmez olsa bile koku ve/veya ses ile onları anlamaya mümkün olabilir.

2. davranış analizi

Not: Davranış analiz manuel gözlem tarafından gerçekleştirilir ve analiz yazılımı otomatik.

  1. El ile gözlem
    1. Hayvan çıkıntıya yerleştirildikten sonra aşağıdaki gözlemlemek: sayı (bir giriş bir kol üzerine tanımlı herhangi bir örnek olarak tüm 4 pençeleri kolunda olduğunda) girişlerinin her kol üzerinde harcanan zaman ve gergin katılan sayısı duruşlar açık bir kol karşı karşıya , kapalı bir kol doğru merkezi platformu kapalı yedekleme sırasında.
    2. Kronometre ve ne zaman kapsayıcı kapılar kapalı dan başlayarak 5 min için sayısı tarafından yukarıda tanımlanan davranışlar sıklığını ve süresini ölçmek.
  2. Otomatik Analizi
    1. Mevcut yazılım programı kullanarak aşağıdaki kayıt: seyahat, zaman kullanılmış içinde farklı pozisyonlarda açık silah (merkez platformdan, orta, proksimal ve distal segment) mesafe ve zaman bir dakika dakika Analizi açılışta geçirdim ve kapalı silah.
    2. El ile gözlem başlar gibi "Başlat" otomatik analiz yazılımı aynı anda düğmesini (kayıt süresi ayarlanmışsa, kayıt otomatik olarak durur).
      Not: Bu çalışmada kullanılan davranış analizi yazılım yolu ile onun kontrast arka plan alanıyla hayvan izler; sabit bir boyut atanır, hayvan, parlak nesne olarak tanımlanır ve orta noktasının hareket böylece hayvan izleme için kullanılabilir.

Sonuçlar

Önceki çalışmada, araştırmacı davranışlar labirent12kapalı kol duvarlarda saydamlığını ve açık kol çıkıntıları kombine etkileri karşılaştırıldı. Fareler önemli ölçüde harcanan daha az zaman çıkıntıları ile kollarını açarak üzerinde çıkıntıları olmadan açık silah üzerinde (F [1, 60] 13.49, P = 0.0005 =) (Şekil 2A). Kollarını açarak içine girdi sayısı için de benzer sonuçl...

Tartışmalar

Hastalarda psikiyatrik bozukluklar, anksiyete bozukluğu, dahil olmak üzere sayısı arttıkça, anksiyete temel mekanizması anlayış geliştirmek için üstün çalışmaları geliştirmek önemlidir. Bunu başarmak için bu da deneysel prosedürler optimize etmek önemlidir. Bu nedenle, için yükseltilmiş durumda uygulanması artı labirent testi geliştirmek, kol özellikleri etkisi fare kullanarak deneysel sonuçlar göstermiştir.

Yükseltilmiş artı labirent aslında hayvan anksiye...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar engin Akihiro öğretmen özelleştirilmiş cihazları üreten onun yardım için teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar Bay Kosuke Takahashi ve Bay Shingo Nakajima onların teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser Risk kimyasal maddeler, sağlık ve laboratuvar Bilimler Araştırma Hibe, Sağlık Bakanlığı, çalışma ve sosyal yardım, Japonya (H25-KAGAKU-IPPANN-003) ve araştırma proje desteği A Enstitüsü bilim ve teknoloji Meiji tarafından araştırma tarafından desteklenmiştir Üniversitesi, Japonya.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Customized container (W1500 × D1500 × H2000 mm)NANAHandmade by Mr. Akihiro Hirano
LightingNANAHandmade by Mr. Akihiro Hirano
Elevated plus maze apparatusNANAHandmade by Mr. Akihiro Hirano
Digital video cameraWatecWAT-250D2Any suitable video camera can be attached to a hard disk recorder for recording tracking profiles.
Hard disk recorderTOSHIBARD-R200Any suitable hard disk recorder can be attached to the digital video camera.
Sprague-Dawley ratsCharles River Laboratories Japan, Inc.NAAny suitable rats can be used for your study
Standard rat cageToyorikoTP-105Any suitable rat cage be used for your study
Instrument to measure light intensityAS ONE1-5818-02Any suitable instrument to measure light intensity
EthoVision XT version 8.0NoldusNAAny suitable software to measure animal behavior
DiazepamTaiyo Pharmaceutical Industry1124402A2061Any suitable drug can be used for your study
Tween 80Wako Pure Chemical Industries9005-65-6Any suitable drug can be used for your study

Referanslar

  1. Nestler, E. J. Role of the Brain's Reward Circuitry in Depression: Transcriptional Mechanisms. Int Rev Neurobiol. 124, 151-170 (2015).
  2. Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment. Science. 284 (5420), 1670-1672 (1999).
  3. Handley, S. L., Mithani, S. Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 327 (1), 1-5 (1984).
  4. Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat. J Neurosci Methods. 14 (3), 149-167 (1985).
  5. Violle, N., Balandras, F., Le Roux, Y., Desor, D., Schroeder, H. Variations in illumination, closed wall transparency and/or extramaze space influence both baseline anxiety and response to diazepam in the rat elevated plus-maze. Behav Brain Res. 203 (1), 35-42 (2009).
  6. Hogg, S. A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety. Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 21-30 (1996).
  7. Martinez, J. C., Cardenas, F., Lamprea, M., Morato, S. The role of vision and proprioception in the aversion of rats to the open arms of an elevated plus-maze. Behav Processes. 60 (1), 15-26 (2002).
  8. Anseloni, V. Z., Brandao, M. L. Ethopharmacological analysis of behaviour of rats using variations of the elevated plus-maze. Behav Pharmacol. 8 (6-7), 533-540 (1997).
  9. Anseloni, V. Z., Motta, V., Lima, G., Brandao, M. L. Behavioral and pharmacological validation of the elevated plus maze constructed with transparent walls. Braz J Med Biol Res. 28 (5), 597-601 (1995).
  10. Hagenbuch, N., Feldon, J., Yee, B. K. Use of the elevated plus-maze test with opaque or transparent walls in the detection of mouse strain differences and the anxiolytic effects of diazepam. Behav Pharmacol. 17 (1), 31-41 (2006).
  11. Fernandes, C., File, S. E. The influence of open arm ledges and maze experience in the elevated plus-maze. Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 31-40 (1996).
  12. Horii, Y., Kawaguchi, M. Higher detection sensitivity of anxiolytic effects of diazepam by ledge-free open arm with opaque walled closed arm elevated plus maze in male rats. Behav Brain Res. 294, 131-140 (2015).
  13. Santos, R. O., et al. Evaluation of the effect of acute sibutramine in female rats in the elevated T-maze and elevated plus-maze tests. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 114 (2), 181-187 (2014).
  14. Lynn, D. A., Brown, G. R. The ontogeny of anxiety-like behavior in rats from adolescence to adulthood. Dev Psychobiol. 52 (8), 731-739 (2010).
  15. Horii, Y., et al. Male Hatano high-avoidance rats show high avoidance and high anxiety-like behaviors as compared with male low-avoidance rats. Exp Anim. 61 (5), 517-524 (2012).
  16. Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).
  17. Yang, Y., et al. Behavioral and pharmacological investigation of anxiety and maternal responsiveness of postpartum female rats in a pup elevated plus maze. Behav Brain Res. 292, 414-427 (2015).
  18. Albani, S. H., et al. Behavior in the elevated plus maze is differentially affected by testing conditions in rats under and over three weeks of age. Front Behav Neurosci. 9, 31 (2015).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Davransay 136anksiyetedavrandiazepamy kseltilmi labirentdonuk veya saydam duvarl kapal kola k kol k nt ya

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır