Bölgeye Özgü Desellülarize Akciğer Dokusunun Diseksiyonu ve İzolasyonu

Özet

Burada bölgesel desellülarize akciğer dokusunun izolasyonu için bir protokol sunulmaktadır. Bu protokol, hücre dışı matris ve hücre-matris etkileşimlerindeki karmaşıklıkları incelemek için güçlü bir araç sağlar.

Özet

Akciğer transplantasyonu, şiddetli akciğer hastalığının sonraki aşamalarındaki hastalar için genellikle tek seçenektir, ancak bu hem uygun donör akciğerlerin beslenmesi hem de transplantasyon sonrası hem akut hem de kronik rejeksiyon nedeniyle sınırlıdır. Hastalıklı akciğerlerin replasmanı için yeni biyomühendislik yaklaşımlarının belirlenmesi, hasta sağkalımını iyileştirmek ve mevcut transplantasyon metodolojileriyle ilişkili komplikasyonlardan kaçınmak için zorunludur. Alternatif bir yaklaşım, tipik olarak akut ve kronik rejeksiyonun nedeni olan hücresel bileşenlerden yoksun desellülarize tüm akciğerlerin kullanımını içerir. Akciğer çok karmaşık bir organ olduğundan, vaskülatür, hava yolları ve alveoler doku dahil olmak üzere belirli bölgelerin hücre dışı matriks bileşenlerini incelemek ilgi çekicidir. Bu yaklaşımın amacı, araştırmacıların bölgeye özgü dokuyu tamamen desellülarize akciğerlerden diseke edebilecekleri ve izole edebilecekleri basit ve tekrarlanabilir yöntemler oluşturmaktır. Mevcut protokol domuz ve insan akciğerleri için tasarlanmıştır, ancak diğer türlere de uygulanabilir. Bu protokol için dokunun dört bölgesi belirlendi: hava yolu, vaskülatür, alveoller ve toplu akciğer dokusu. Bu prosedür, geleneksel toplu analiz yöntemlerinin aksine, desellülarize akciğer dokusunun içeriğini daha doğru bir şekilde temsil eden doku örneklerinin elde edilmesini sağlar.

Giriş

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH), idiyopatik pulmoner fibroz (İPF) ve kistik fibroz (KF) dahil olmak üzere akciğer hastalıkları şu anda kürsüz^kalmaktadır 1,2,3,4. Akciğer transplantasyonu genellikle daha sonraki aşamalardaki hastalar için tek seçenektir, ancak bu hem uygun donör akciğerlerin temini hem de transplantasyon sonrası hem akut hem de kronik rejeksiyon nedeniyle sınırlı bir seçenek olmaya devam etmektedir ^3,5,6. Bu nedenle, yeni ....

Protokol

Tüm hayvan çalışmaları, Vermont Üniversitesi IACUC'ye (UVM) uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm insan akciğerleri UVM Otopsi Servislerinden edinilmiş ve ilgili çalışmalar UVM IRB kılavuzlarına göre yapılmıştır.

NOT: Domuz ve insan akciğerlerinin desellülarizasyonu daha önce grubumuz 7,8,9,10,21 tarafından tanımlanmıştır. Kısacası, tüm akciğer lobları, peristaltik bir pompa kullanılarak bir dizi 2 L deterjan ve enzim çözeltisi ile hava yollarının ve vaskülatürün sıralı perfüzyo....

Tartışmalar

İnsanlardan ve diğer türlerden alınan desellülarize dokular, ECM kompozisyonunu incelemek için biyomateryal olarak sıklıkla kullanılır ve 3D hidrojeller^12,13 dahil olmak üzere ex vivo kültür modellerinde hücre-ECM etkileşimlerini inceler. Diğer organlara benzer şekilde, desellülarize akciğerler daha önce sağlıklı ve hastalıklı (yani amfizematöz ve İPF) akciğerlerde ECM kompozisyon farklılıklarını belirlemek için kullanıl.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bonn Scissors	Fine Science Tools	14184-09
Dumont #5 - Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-02
Forceps, Curved, S/S, Blunt, Serrated - 130mm	CellPath	N/A
Hardened Fine Scissors	Fine Science Tools	14090-11
Moria Iris Forceps	Fine Science Tools	11373-22
Pyrex Glass Casserole Dish	Cole-Parmer	3175-10