Mekanik Olarak İzole Edilmiş Stromal Vasküler Fraksiyon ve Fibrin Hidrojel Kombinasyonu: Bir İşleme Protokolü

Özet

Mekanik olarak izole edilmiş stromal vasküler fraksiyon (SVF), bir fibrin hidrojel ile kombinasyon halinde, doku mühendisliği ve/veya yara iyileşmesi amaçları dahil olmak üzere çeşitli endikasyonlar için canlı adipoz türevli stromal hücreler için kolay ve verimli bir taşıyıcı sunar. Burada, translasyonel araştırma ve klinik uygulama için mekanik bir SVF (mSVF)-fibrin hidrojel yapısının hazırlanmasını sunuyoruz.

Özet

Adipoz kaynaklı stromal hücrelerin (ASC'ler) rejeneratif potansiyeli, rejeneratif ve translasyonel araştırmalarda önemli ölçüde dikkat çekmiştir. Geçmişte, bu hücrelerin yağ dokusundan ekstraksiyonu, çok aşamalı enzim bazlı bir işlem gerektiriyordu, bu da ACS'ler ve diğer hücrelerden oluşan ve birlikte stromal vasküler fraksiyon (SVF) olarak adlandırılan heterojen bir hücre karışımı ile sonuçlanıyordu. Daha yakın zamanda tanıtılan mekanik SVF (mSVF) izolasyon protokolleri daha az zaman alıcıdır ve düzenleyici endişeleri atlar. Yakın zamanda, emülsifikasyon ve santrifüjleme kombinasyonuna dayalı olarak stromal hücreler açısından zengin mSVF üreten bir protokol önerdik. Yara tedavisi uygulaması için mSVF uygulamasında güncel bir sorun, mekanik manipülasyon ve kurumaya karşı koruma sağlayan bir iskelenin olmamasıdır. Fibrin hidrojellerin geçmişte yara iyileşmesi amacıyla hücre transferinde yararlı bir yardımcı olduğu gösterilmiştir. Buradaki çalışmada, translasyonel araştırma ve klinik uygulama için yeni bir yaklaşım olarak bir mSVF-fibrin hidrojel yapısının hazırlık adımlarını açıklıyoruz.

Giriş

Son birkaç yılda, rejeneratif plastik cerrahi, plastik cerrahinin ek bir ayağı olarak ortaya çıkmıştır¹. Rejeneratif plastik cerrahi, minimal invaziv bir şekilde doku restorasyonunu desteklemek için hastadan toplanan çözünür faktörleri, hücreleri ve dokuyu transfer ederek hasarlı dokuyu restore etmeyi amaçlar². Adipoz kaynaklı kök hücreler (ASC'ler), çoklu mezenkimal soylara farklılaşma yetenekleri nedeniyle dikkat çekmiş ve bu da onları rejeneratif tıp araştırmaları için umut verici bir aday haline getirmiştir³. Sitokin profilleri anjiyojeni....

Protokol

Bu çalışma Helsinki Bildirgesi'ne uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm yetişkin bağışçılar, toplanan doku örneklerinin daha fazla kullanılmasına izin vermek için yazılı bilgilendirilmiş onam verdiler. Protokol, kurumumuzun insan araştırmaları etik komitesinin yönergelerini takip eder.

1. Yağ dokusu hasadı

1. Önceki yayınlarda açıklanan geleneksel bir yağ toplama tekniğinde standart bir liposuction yaparak yağ dokusunu toplayın^26,27. 1: 200.000 oranında düzenli zil laktatı ve epinefrin içeren şişen bir çözelti kullandığınızd....

Tartışmalar

SVF'nin mekanik izolasyonu, geleneksel enzimatik yaklaşıma zarif bir alternatif sunar ve klinik uygulama için geniş erişim sağlar²⁹. Aslında, mSVF, bu makalede önerildiği gibi, yara izlerinin yumuşak doku tedavisi için veya kozmetik prosedürler için bir ek olarak zaten klinik kullanımdadır³⁰. Burada sunulan protokol, canlı mSVF hücrelerinin verimli topikal uygulaması için basit bir yöntem sağlar. Sadece mSVF hücreleri .......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-Wellplate	Sarstedt	83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Biochemica	A1001.0010
50 mL-Falcon	Falcon	352070
Absorbent Towels, Two Pack	Halyard	89701
Alamar blue 25 mL	Invitrogen	DAL1025
Albumin, Bovine (BSA)	VWR	0332-500G
Biotek Cytation 5	Agilent		Cell Imaging Multimode Microplate Reader
CaCl2	Sigma-Aldrich	C5670-500G
Cryostat	Microtome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate	VWR	392-0416
DPBS	Gibco	14190-144
Epinephrin	Sigma-Aldrich	E4250
Fetal Bovine Serum	Biowest	S181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mg	Sigma-Aldrich	341576-100MG
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4
Formalin 4%	Formafix	1308069
FSC 22-Einbettmedium, blau	Biosystems	3801481S
Hematoxylin & Eosin Solution	Sigma-Aldrich	H3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL	B Braun	R5410-01
Mercedes Cannula 4mm	MicroAire	PAL-R404LL
NaCl 0.9%	Bbraun	570160
OCT Embedding Matrix 125 mL	CellPath	KMA-0100-00A
Paraformaldehyde	Fisher Scientific	10342243
PBS 1%	Sigma-Aldrich	P4474
PenStrep	Sigma-Aldrich	P4333-100ML
Petridish 150mm	Sarstedt	83.1803
Phalloidin-iFluor 488 Reagent	Abcam	ab176753
Sterile Syringe 20 mL Luer	HENKE-JECT	5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock	BD	10521
Thrombin from Human Plasma	Sigma-Aldrich	T6884-100UN
Tranexamic acid	Orpha Swiss	6837093
Tulipfilter 1.2	Lencion Surgical	ATLLLL
Tulipfilter 1.4	Lencion Surgical	ATLLLL