Tibet Tıbbında Bileşenlerin Tanımlanması için Moleküler Ağ ile Birleştirilmiş 2D-HPLC-MS Teknolojisi Aconitum sarkacı

Özet

Bu çalışma, Tibet şifalı bitkisi Aconitum sarkacı Busch'un (APB) karmaşık kimyasal bileşimini çözmek için moleküler ağ ile birlikte iki boyutlu yüksek performanslı sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (2D-HPLC-MS) teknolojisini kullanmaktadır. Makale, bitkisel ilaçların karmaşık kimyasal bileşenlerinin sistematik olarak araştırılması ve tanımlanması için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.

Özet

Bu çalışmada, Tibet şifalı bitkisi APB'nin karmaşık kimyasal bileşimini çözmek için moleküler ağ ile birlikte 2D-HPLC-MS teknolojisini kullanan kapsamlı bir yaklaşım kullanılmıştır. 2D-HPLC'nin uygulanmasıyla, karmaşık karışımların gelişmiş bir şekilde ayrılması sağlandı ve bu da sonraki analizler için tek tek bileşiklerin izolasyonunu sağladı. Moleküler ağ yaklaşımı, bu bileşikler arasındaki yapısal ilişkilerin aydınlatılmasına daha fazla yardımcı oldu ve potansiyel biyoaktif moleküllerin belirlenmesine katkıda bulundu. Bu entegre strateji, tesis içinde bulunan çok çeşitli kimyasal bileşenleri verimli bir şekilde tanımladı. Bulgular, diğerlerinin yanı sıra alkaloidler de dahil olmak üzere APB içinde çeşitli kimyasal bileşenler ortaya çıkardı. Bu araştırma, yalnızca bu geleneksel Tibet tıbbının fitokimyasal profilinin anlaşılmasını ilerletmekle kalmıyor, aynı zamanda potansiyel terapötik özellikleri hakkında değerli bilgiler sağlıyor. 2D-HPLC-MS ve moleküler ağın entegrasyonu, bitkisel ilaçlardaki karmaşık kimyasal bileşimleri sistematik olarak araştırmak ve tanımlamak için güçlü bir araç olduğunu kanıtlıyor ve doğal ürün keşfi alanında daha fazla araştırma ve geliştirmenin önünü açıyor.

Giriş

Tibet tıbbı, Tibet tıbbi uygulamalarının ilkelerine bağlı kalarak geleneksel Çin tıbbının ayrılmaz bir parçasıdır ve hastalıkların önlenmesi ve tedavisi için kullanılır¹. Bununla birlikte, Tibet bitkisel tıbbı, içerikte önemli dalgalanmalarla karakterize edilen karmaşık bitki kimyasal bileşenleri içerir. Temel biyoaktif elementlerin sınırlı anlaşılması, Tibet tıbbının modernizasyonunda bir darboğaz haline gelmiştir². Kromatografinin güçlü ayırma gücünü kütle spektrometresinin (MS) yüksek hassasiyeti ile birleştiren sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (LC-MS) uygulaması, doğal tıp analizinde yaygın olarak kullanılmak....

Protokol

1. Hazırlık

1. Numune hazırlama
   1. 3 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde 0,25 g (kuru ağırlık) APB'yi tartmak için 1/10.000 hassasiyet terazisi kullanın, 2,5 mL metanol ekleyin ve ardından 30 dakika boyunca sonikasyon yapın (güç 240 W, frekans 40 kHz).
   2. 5 dakika boyunca 1,2 x g'da santrifüjleme yapın, süpernatanı toplayın ve 0,22 μm gözenek boyutuna sahip bir membran filtreden süzün.
2. Deney materyallerinin hazırlanması
   1. İki boyutlu mobil fazı hazırlayın, organik faz B fazı olarak asetonitril kullanın ve sulu faz A olarak %0.1 formik asit ultra saf suyu yapılandırın.
   2. İki fazlı filtrasyon....

Tartışmalar

Bu deneyin ana odak noktası, iki boyutlu sıvı faz ayrımı çerçevesinde kısmi bir yöntemin optimizasyonuydu. Bunu başarmak için, yeni bir kolon içi seyreltme modülatörü, iki boyutlu sıvı kromatografisi (2D-LC) sistemine sorunsuz bir şekilde entegre edildi. Bu teknik düzenleme, APB olarak bilinen Tibet tıbbında bulunan kimyasal bileşenlerin profilini çıkarma yetkinliğini önemli ölçüde artırdığı için büyük önem taşıyordu. 2D-HPLC-MS teknolojisinin dahil edilmesi, APB'nin karmaşık bile.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Fisher chemical	F22M81203	Mobile phase
Aconitum pendulum	/	/	Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC	Agilent Technologies	G2198-90001	Liquid chromatography
Disposable syringes	Chengdu Keen experimental equipment	/	1ml
EP tube	Chengdu Keen experimental equipment	/	3ml
Liquid phase injection bottle	Chengdu Keen experimental equipment	/	1.5ml
LTQ XL Mass Spectrometer	Thermo Fisher	LTQ21991	Mass Spectrometer
Microporous membranes	Chengdu Keen experimental equipment	/	0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mm	Welch	00201-31015	Reversed-phase column
Ultrasonic Cleaner	GT Sonic	UGT20DEC048Y	Ultrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100A	Dalian Mondi Technology	D2019110601	Hydrophilic column