Tekrarlayan İmplantasyon Başarısızlığı Olan Kadınlarda Çoklanmış Floresan İmmünohistokimyasal Boyama Kullanılarak Dört Uterin NK Hücre Alt Tipinin Ölçümü

Özet

Bu çalışma, ileri çoğullanmış floresan immünohistokimyasal boyama teknikleri kullanılarak implantasyon penceresi sırasında uterus doğal öldürücü hücre alt kümelerini ölçmek için öncü bir yöntem sunmaktadır.

Özet

İmmünohistokimya (IHC), biyolojik araştırma ve klinik tanıda çok önemli bir rol oynar ve doku antijenlerini tanımlamak ve görselleştirmek için en yaygın kullanılan yöntem olarak hizmet eder. Bununla birlikte, geleneksel IHC boyama yöntemlerinin, bağışıklık hücrelerinin çeşitli alt tiplerini ayırt etmede sınırlamaları vardır. Bu zorluk, bilim adamlarını bağışıklık hücresi alt tiplerinin kesin olarak tanımlanması ve farklılaştırılması için yeni teknolojiler ve metodolojiler keşfetmeye itmiştir. Son yıllarda, multipleks IHC, birden fazla antijenin aynı anda tespit edilmesini ve aynı doku örneği içinde görselleştirilmesini sağlayan bir çözüm olarak ortaya çıkmıştır. Uterus doğal öldürücü (uNK) hücreler, desidualizasyon, uterus spiral arterlerinin yeniden şekillenmesi ve embriyo implantasyonu dahil olmak üzere erken gebelik süreçlerinde çok önemli bir rol oynar. uNK hücrelerinin farklı alt tipleri, başarılı embriyo gelişimi ve hamilelik için çeşitli biyolojik olayları koordine etmelerine izin veren farklı işlevler sergiler. Bu nedenle, uNK hücre alt tipleri üzerine derinlemesine araştırmalar, hamilelik sırasında immün regülasyon mekanizmalarını aydınlatmak için gereklidir. Bu tür çalışmalar, kısırlık ve tekrarlayan üreme yetmezliği gibi ilgili durumları ele almak için değerli bilgiler ve yeni yaklaşımlar sağlar. Bu makale, implantasyon penceresi (WOI) sırasında endometriyal örneklerde dört alt tip uNK hücresinin yoğunluğunu incelemek için ayrıntılı bir multipleks IHC boyama protokolünü tanıtmaktadır. Protokol, numune hazırlama, alt tip belirteçlerin optimizasyonu, mikroskobik görüntüleme ve veri analizlerini içerir. Bu multipleks IHC boyama protokolü, farklı uNK hücre alt tiplerinin aynı anda tespit edilmesini sağlayan yüksek özgüllük ve hassasiyet sunar, böylece araştırmacılara hamilelik sırasında bağışıklık düzenlemesinin karmaşıklıklarını ve mekanizmalarını keşfetmek için güçlü bir araç sağlar.

Giriş

İn vitro fertilizasyon-embriyo transferinden (IVF-ET) sonra belgelenen ilk canlı doğum 1978'de bildirilmiştir. Son 40 yılda, infertil çiftler arasında IVF-ET yardımı için yüksek bir talep olmuştur¹. 2021'de 238.126 hasta Amerika Birleşik Devletleri'nde toplam 413.776 IVF döngüsü başlattı. Bu, döngülerde 2 yıl öncesine göre %25'lik bir artışa ve 2012'ye göre %135'lik bir artışa işaret ediyor². Bu artış esas olarak infertilite prevalansının artmasına ve hamilelik planlamasının gecikmesine bağlanmaktadır. Embriyo kültürü tekniklerindeki ve süperovulasyon protokollerindeki gelişmele....

Protokol

Çalışma, Hong Kong Ortak Çin Üniversitesi-Yeni Bölgeler Doğu Kümesi Klinik Araştırma Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (CREC ref no.: 2022.581). RIF'li kadınlar, Hong Kong Çin Üniversitesi, Galler Prensi Hastanesi, Yardımcı Üreme Teknolojisi Merkezi'nden işe alındı. RIF, 40 yaşın altındaki bir kadında en az 3 taze veya dondurulmuş siklusta en az 4 iyi kaliteli embriyonun transferinden sonra klinik bir gebelik elde edilememesi olarak tanımlandı¹⁰. Endometriyal biyopsiler alınmadan önce katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alındı.

1. Endometriyal örneklerin alınması ve işle....

Tartışmalar

Embriyo implantasyonu, embriyo ve endometriyum arasında karmaşık bir etkileşimi içerir. Endometriyal homeostazın immünolojik durumu, endometriyal alıcılığın belirlenmesinde çok önemli bir rol oynar. WOI sırasında, endometriyumdaki baskın lökosit popülasyonu NK hücreleridir. uNK hücrelerinin yaklaşık% 90'ı yüksek CD56 ekspresyonu sergiler, ancak CD16'dan yoksundur. Bununla birlikte, uNK hücrelerinin küçük bir alt kümesi, düşük CD56 ekspresyonu ancak poziti.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
CD49a	Novus Biologicals	NBP2-76478	Primary antibodies
CD56	Leica	NCL-L-CD56-504	Primary antibodies
CD16	abcam	ab183354	Primary antibodies
CXCR4	R&D	MAB172	Primary antibodies
Amplification diluent	Akoya Biosciences	FP1498 series	Fluorophore dilution buffer
Antibody diluents	Akoya Biosciences	ARD1001EA	Dilute the antibody
Citrate buffered solution, pH 6.0 /9.0(10x)	Akoya Biosciences	A6001/A9001	Antigen retrieval solution
inForm advanced image analysis software	Akoya Biosciences	inForm Tissue Finder Software 2.2.6	Data analysis software
Mantra Workstations	Akoya Biosciences	CLS140089	Spectral imaging
microwave	Akoya Biosciences	inverter	Microwave stripping
TSA 520	Akoya Biosciences	FP1487001K	Suitable tyramide-based fluorescent reagents
TSA 620	Akoya Biosciences	FP1495001K	Suitable tyramide-based fluorescent reagents
TSA 650	Akoya Biosciences	FP1496001K	Suitable tyramide-based fluorescent reagents
TSA 570	Akoya Biosciences	FP1488001K	Suitable tyramide-based fluorescent reagents
Poly-L-lysine coated slides	Fisher Technologies	120-550-15	Slides for routine histological use
PolyHRP Broad Spectrum	Perkin Elmer	ARH1001EA	Secondary antibodies
Invitrogen™ Fluoromount-G™ Mounting Medium	ThemoFisher Science	495802	Installation
Spectral DAPI	Akoya Biosciences	FP1490A	Nucleic acid staining