Başlamak için, tıbbi malzemeler Pheretima, Periplaneta americana ve Hirudo'yu bitkisel bir öğütücü ile ezin. Tıbbi tozu iki ve dört numaralı standart ilaç eleklerinden geçirin. Gerekli numune tozunu elde etmek için tozu iki elek arasında toplayın.
50 mililitrelik plastik santrifüj tüpüne bir gram toz alın. 20 mililitre% 5 trikloroasetik asit çözeltisi ekleyin ve yüksek hızlı dispersiyon homojenizatörü ile bir dakika boyunca 1.000 RPM'de homojenize edin. Homojenizasyondan sonra, homojenatı oda sıcaklığında beş dakika boyunca 1.717 G'de santrifüjleyin ve süpernatantı emici bir pamuğa batırılmış cam huniden 50 mililitrelik hacimsel bir şişeye süzün.
Ekstraksiyon işlemini 15 ve 10 mililitre% 5 trikloroasetik asit çözeltisi ile iki kez tekrarladıktan sonra, filtratları birleştirin ve% 5 trikloroasetik asit çözeltisi ile hacmi 50 mililitreye kadar tamamlayın. Daha sonra, 20 mililitrelik üst boşluk şişelerine iki mililitre sodyum hidroksit çözeltisi ve 0.5 gram katı parafin ekleyin. Daha sonra yaklaşık 30 dakika boyunca 70 santigrat derecelik bir fırına koyun.
Şişeleri çıkarın ve parafinin katılaşması için oda sıcaklığına soğumaya bırakın. Numune üst boşluğunu işlemek için, katılaşmış parafin içeren şişelere her numune ekstraksiyon çözeltisinden iki mililitre ekleyin. Kapağa bastırın ve şişeyi kapatın.
Ölçüm için kapalı üst boşluk şişelerini GCMS'ye koyun. Standart eğriyi elde etmek için, katılaşmış parafin tabakasının üzerine bir dizi iki mililitre trimetilamin standart çözeltisi aspire edin. Trimetilamin ölçümü için kapalı üst boşluk şişelerini makineye koyun.
Hassasiyet testini gerçekleştirmek için, katılaşmış parafin tabakasının üzerine mililitre başına iki mililitre 0.1 mikrogram trimetilamin standart çözeltisi aspire edin. Üreticinin talimatlarını izleyerek makinede altı paralel test gerçekleştirin. Geri kazanım oranı deneyi için, daha önce gösterildiği gibi GCMS'de trietilamin tespit edilmeyene kadar bir fırında birkaç parti numune tozu pişirin.
Daha sonra, her bir gram fırında pişmiş ve inceltilebilir tozu ayrı 50 mililitrelik plastik santrifüj tüplerine alın. Tüm tüplere 50 mikrolitre trimetilamin standart çözeltisi ekleyin ve daha önce gösterildiği gibi% 5 trikloroasetik asit çözeltisi ile ekstrakte edin. Trimetilaminin alıkonma süresinin, keskin bir tepe noktası ile 2.3 dakika olduğu ve diğer safsızlıklardan etkilenmediği bulundu.
Bitkilerde trietilamini azaltmak için kurutularak çivili geri kazanım testlerine tabi tutulan Pheretima, Periplaneta americana ve Hirudo örnekleri sırasıyla %84.49, %94.66 ve %85.67 ortalama geri kazanım oranları göstermiştir. Trietilamin, kilogram başına 13.23 ila 271.63 miligram arasında değişen konsantrasyonlara sahip dokuz bitki grubunda tespit edildi.
