Güney lekelemesi yapmak için, naylon bir zarı 10 x 12 santimetre boyutunda bir segmente keserek başlayın. Jel ile aynı pozisyonda bir çentik yapın. Membranı damıtılmış suya batırarak aktive edin, ardından 20X sodyum salin sitrat tamponu izleyin.
Çift ters çevrilmiş bir tepsiye bir filtre kağıdı fitili yerleştirin, uçları dış tepsinin tabanına temas edecek şekilde ayarlayın. Jeli filtre kağıdının üzerine yerleştirin. Daha sonra aktif naylon zarı jelin üzerine yerleştirin ve çentiklerin üst üste binmesini sağlayın.
Hava kabarcıklarını bir cam çubukla çıkarın. İki santimetrelik 9,5 x 11,5 santimetre boyutunda selüloz filtre kağıdı yığını ve altı santimetrelik normal filtre kağıdı yığını yerleştirin. Eşit ağırlık dağılımı için kurulumun üzerine bir ağırlık yerleştirin.
Dış tepsiyi 20X sodyum salin sitrat tamponu ile doldurun ve verimli aktarım için gece boyunca bırakın. Güney transferinden sonra, transfer edilen DNA'yı bir UV transilluminatörü üzerinde UV çapraz bağlama ile membran üzerine sabitleyin. Membranı 25 mililitre 2X sodyum salin sitrat tamponu ile iki kez yıkayın.
Hibridizasyon gerçekleştirmek için, membranı önceden ısıtılmış ön hibridizasyon tamponunun 10 mililitresinde inkübe edin. Membranı sık aralıklarla manuel olarak nazikçe çalkalayın. Daha sonra lekeyi 10 mililitre hibridizasyon tamponunda 42 santigrat derecede hafif ajitasyonla üç saat boyunca inkübe edin.
Lekeyi 25 mililitre sıkı tamponda iki kez oda sıcaklığında 10 dakika boyunca hafif çalkalama ile yıkayın. Şimdi lekeyi 25 mililitre önceden ısıtılmış sıkı tamponda 50 santigrat derecede iki kez 15 dakika boyunca hafif ajitasyonla yıkayın. Oda sıcaklığında hafif çalkalama ile beş dakika boyunca 15 mililitre yıkama tamponu ile durulayın.
Membranı, 10 mililitre taze hazırlanmış bloke edici çözelti içinde, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca nazik ajitasyonla inkübe edin. Daha sonra bir alkali fosfataz çalışma çözeltisi ile konjuge edilmiş 10 mililitre anti-digoxigenin içine yerleştirin. Lekeyi yıkama tamponunda oda sıcaklığında iki kez 15 dakika boyunca yıkayın.
Şimdi oda sıcaklığında beş dakika boyunca 10 mililitre algılama tamponunda inkübe edin. Fazla tamponu çıkardıktan sonra, zarı DNA tarafı yukarı bakacak şekilde bir asetat tabakasına yerleştirin. Membran üzerine damla damla yaklaşık bir ila 1,5 mililitre substrat çözeltisi ekleyin.
Hemen üzerine başka bir asetat tabakası yerleştirin ve oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin. Görüntülemeden önce fazla substrat çözeltisini sıkın. Bir jel dokümantasyon görüntüleme sistemi kullanarak, analiz için farklı zaman noktalarında birden fazla doymamış görüntü toplayın.
Güney lekelenmesi ve hibridizasyonundan sonra, telomer kısıtlama parçaları bir yayma ile gösterilen açıkça görülebiliyordu.
