Dorsal Root Ganglion (DRG) Sample Preparation for Cryosectioning

Anestezi uygulanmış farenin omuriliğinden kesilen DRG dokusunu oda sıcaklığında üç saat boyunca %4 formaldehit içinde sonradan sabitleyerek başlayın. Daha sonra, dokuyu gece boyunca dört santigrat derecede PBS'de% 30 sükroz içinde inkübe edin. Ardından, OCT bileşiğini ekleyerek ve alüminyum bloğun üst yüzeyini kaplayarak temel OCT'yi hazırlayın.

Kaplı alüminyum bloğu eksi 20 santigrat derecede beş ila 10 dakika dondurun. Kriyostatı kullanarak OCT'nin üst kısmını, yüzeyi temel OCT kadar düz olana kadar 30 mikrometre kalınlığında kesin. Alüminyum bloğu kriyostattan çıkarmadan önce taban OCT'nin altını 6:00 konumunda işaretleyin.

DRG'lerin OCT gömülmesini gerçekleştirmek için, DRG dokusunu kuru bir Petri kabına yerleştirerek ve kuru cımbızla iki veya üç kez bir yerden diğerine hareket ettirerek kurutun. Ardından, kuru cımbız kullanarak kuru DRG'yi 12:00 konumunda OCT tabanına yerleştirin. Sırt kısmı 12:00 konumunda ve ventral kısım 6:00 konumunda olacak şekilde, DRG'nin üst kenarı ile taban OCT'nin üst kenarı arasında en az beş milimetre mesafe bıraktığınızdan emin olun.

Ardından, tüm DRG dokusunu merkezde DRG ile gömmek için yuvarlak veya oval bir şekilde OCT ekleyin. Kapak OCT ve DRG örneğini eksi 20 santigrat derecede beş dakika dondurun. Bittiğinde, DRG görünene kadar kapağın üst kısmını 30 mikrometre kalınlığında kesin.