10 miligram dondurularak kurutulmuş Mycobacterium paratuberculosis'i bir harç ve havane kullanarak ince bir toza öğüterek başlayın. Mililitre stok çözeltisi başına 10 miligram elde etmek için beş mililitre Tamamlanmamış Freund adjuvanı ekleyin. Stoğu eksi dört santigrat derecede saklayın.
Bağışıklamadan önce, stok çözeltisini seyreltin. Daha sonra, MOG 35-55 peptidi mililitre başına iki miligrama seyreltin ve eksi 20 santigrat derecede saklayın. MOG 35-55'in eşit hacimlerinde, kalın bir emülsiyon oluşana kadar bir homojenizatör ile beş mililitrelik bir tüpte adjuvan ile karıştırın.
Her 10 saniyelik karıştırmadan sonra, çözeltiyi 20 saniye boyunca buzun üzerine yerleştirin ve tüm çözeltiyi geri kazanmak için tüpü döndürün. Emülsiyonu bir mililitrelik bir şırıngaya aktarın ve hava kabarcıklarından arındırılmış olmasını sağlayın. Ardından, 27 gauge iğne ile takın.
Subkutan olarak, anestezi uygulanmış bir farenin alt sırtına 200 mikrolitre emülsiyon enjekte edin. Daha sonra, intraperitoneal olarak sıfır günde ve aşılamadan sonra iki günde bir doz boğmaca toksini enjekte edin. Tüm fareler, 14 ila 17 günde gözlenen tek bir sakatlık zirvesi ile karakterize akut monofazik bir hastalık gösterdi ve ardından önümüzdeki 10 gün içinde semptomların kısmen iyileşmesi izledi.
M.paratuberculosis ile aşılanan fareler, bağışıklamadan sonra daha erken bir başlangıç ve akut fazda daha fazla şiddet göstermiştir. Her iki grup da benzer vücut ağırlıkları gösterdi. EAE fareleri dalak hücreleri üzerinde yapılan titre timidin katılımı ile proliferasyon testi, peptid MOG 35-55'e güçlü bir proliferatif yanıt gösterdi, ancak ovalbümine değil.
Sitoflorometrik analiz, M.paratuberculosis ile bağışıklanmış EAE farelerinin dalaklarında CFA ile bağışıklanmış farelere kıyasla artmış T-lenfositleri, dendritik hücreler ve monositler gösterdi. Hematoksilin ve eozin doku analizinde beyin ve omurilikte tipik paravasküler ve meningeal mononükleer inflamatuar infiltrasyon saptandı.
