Beş mikrolitre elektroporated gece büyüme L döner kültürünü 96 kuyucuklu bir plakadan bir PCR tüpüne aktarın. Hücreleri döndürün ve peleti 20 mikrolitre 20 milimolar sodyum hidroksit içinde yeniden askıya almadan önce süpernatantı atın. Örnekleri 95 santigrat derecede beş dakika kaynatın.
Vorteks ve numuneleri buzun üzerine koymadan önce kaynatmayı bir kez tekrarlayın. Hücreleri aşağı doğru döndürün, daha sonra supra natantın bir mikrolitresini alın ve 99 mikrolitre buz gibi soğuk DNA ve RNA'nın serbest çift damıtılmış suya seyreltin. Standart bir PCR reaksiyonunda şablon DNA olarak 100 kat seyreltmeyi plazmid spesifik primerler kullanarak kullanın ve E coli mini prep'ten türetilen bir plazmid ile pozitif bir kontrol ekleyin.
PCR'den sonra, numuneleri buz üzerine yerleştirin ve bir X konsantrasyonunda uygun bir yükleme boyası ekleyin. Numuneleri TAE tamponunda 110 voltta 30 dakika boyunca %1 Agoraze gell'de çalıştırın. Transforme L Rotary'nin koloni PCR'si hazırlama sıcaklığını değiştirerek farklı oranlarda PCR başarısı ile sonuçlanmıştır.
Buz üzerinde hazırlanan numuneler, oda sıcaklığında hazırlanan veya oda sıcaklığında hazırlanandan daha yüksek bir başarı yüzdesi gösterdi ve daha sonra PCR'den önce 30 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edildi.
