Başlamak için, hastaya numune toplamadan önce gece boyunca oruç tutmasını söyleyin. Ertesi gün, dize test kitini açın. Kapsülü alın ve halkayı ipin sonunda tutun.
İpi hastanın yanağına bantlayın. Daha sonra hastayı kapsülü boğazın arkasına yakın bir yerde dillerine yerleştirmesi ve bir yudum su ile yutması için yönlendirin. Kapsül hastanın midesinde bir saat boyunca çözüldükten sonra, eğitimli bir asistana ipi hastadan dikkatlice çekmesini söyleyin.
Daha sonra mide sıvısına batırılmış ucu bir TSE numune koruma çözeltisine yerleştirin ve ipin alt ucunu kesin. Toplama tüplerini taşıyan etiketli numuneyi 10 saniye boyunca bir test tüpü rafına ve girdabına yerleştirin. Manyetik boncukları, girdabı 10 saniye boyunca yeniden askıya almak için 32 kuyucuk plakasını birkaç kez baş aşağı çevirin.
Ardından alüminyum folyo tavanı plakadan dikkatlice çıkarın. Her bir numuneden 200 mikrolitre mide sıvısı ve helicobacter pylori DNA'sını pozitif kontrol olarak ayrı kuyucuklara aktarın. 32 kuyucuk plakasını, DNA ekstraksiyonu ve onayından sonra otomatik DNA ekstraksiyonu için nükleik asit ekstraksiyon makinesinin ilgili numune yuvasına yerleştirin.
Fazla mide sıvısını ve ekstrakte edilen DNA örneklerini kullanıma kadar eksi 20 santigrat dereceye yerleştirin, qPCR reaksiyon karışımını buz üzerinde çözün ve reaktif kaybını önlemek için hafifçe vurarak ve eğirerek karıştırın Her numune için 32 kuyucuklu bir plakada, PCR reaksiyon karışımının 20 mikrolitresini üre ileri ve geri primerlerle karıştırın, bir üre probu ve çıkarılan DNA'nın beş mikrolitresi. Plakayı qPCR makinesine yerleştirin ve termal döngüleyici programını ayarlayın. Floresan sinyal alımını FAM'a, veri toplamaya, amplifikasyon uzatma periyoduna ayarlayın ve reaksiyonun tamamlanmasının ardından çalıştırmayı başlatın.
Verileri analiz için kaydedin. Cihaz taban çizgisi eşiklerini otomatik olarak seçtiği için qPCR için özel bir yazılımla verileri analiz edin. Test sonuçları ise h.
pylori pozitiftir, reaktif kitini h. pylori kitindeki 23S rRNA geni ve gyrA gen mutasyonu için tespit reaktifleri ile değiştirin ve numune üzerinde ilaç direnci testine başlayın. Bu çalışma h'nin tespitini göstermektedir.
qPCR ile mide sıvısında pylori ve antibiyotik direnci. H. pylori pozitif örnekler arasında.
S2, klaritromisin ve Levofloksasine karşı çift direnci gösteren tespit aralığında BT değerlerine sahipti. S3 BT değerleri, h. pylori enfeksiyonu ve Levofloksasin direnci için tespitteydi, ancak levofloksasin direncini gösteren klaritromisin direnci için değildi.
Benzer şekilde, S4, h. pylori enfeksiyonu ve klaritromisin direnci için saptanabilir BT değerlerine sahipti, ancak klaritromisin direncini düşündüren levofloksasin direnci için saptanmadı. S5 sadece h için saptanabilir BT değerlerine sahipti.
Pilori enfeksiyonu her iki antibiyotiğe duyarlılığı gösterir ve her iki ilaçla tedaviye izin verir.
