Fototize edilebilir hidrojel yapıların 3D baskısına başlamak için, hidrojel biyo-mürekkep içeren fibroblastların bulunduğu cam şırıngayı yazıcı kafasına yerleştirin ve baskı için sağlam bir montaj sağlarken yazıcı kafası bileşenlerini takın. Ardından, Pronterface yazılımındaki yön oklarını kullanarak, ekstrüzyon iğnesinin kuyu plakasının kuyusunun ortasındaki destek banyosu bulamacı içindeki konumunu manuel ve dikkatli bir şekilde ayarlayın. İğne ucunun altında en az bir milimetre bulamaç bırakın.
İğne ucu doğru bir şekilde yerleştirildikten sonra, Pronterface yazılımındaki yazdır düğmesine basın ve yazdırmanın tamamlanmasını bekleyin. İstenilen sayıda biyo-baskılı yapı elde edilene kadar daha önce gösterilen adımları tekrarlayın. Baskıyı takiben, yapı kapaklı ocakları oda sıcaklığında biyogüvenlik kabininde bir saat bekletin.
Bu, fototize edilebilir hidrojel biyo-mürekkep ile baz katalizli polimerizasyonun gerçekleşmesine izin verir. Ardından, destek banyosu bulamacını eritmek için 3D biyobaskılı yapılara sahip kuyu plakasını 12 ila 18 saat boyunca 37 santigrat derece steril bir inkübatöre yerleştirin. Ardından, bir biyogüvenlik kabininin içinde, biyo-baskılı yapıları çevreleyen ortamı değiştirin.
Bunu yapmak için, ortamı ve erimiş jelatin destek banyosunu, yapıları bozmadan kuyulardan manuel olarak çıkarın. Daha sonra her bir oyuğa uygun miktarda düşük serum ortamı ekleyin. Yine, istenen sertleşme zaman noktasından 24 saat önce, kuyucuklardaki ortamı 2.2 milimolar steril LAP ile desteklenmiş düşük serumlu ortamla değiştirin.
İstenilen sertleştirme zaman noktasında, sertleştirilecek oyuklardan ortamın yarısını çıkarın ve plakayı kapaksız olarak bir OmniCure'un ultraviyole veya UV ışığının altına yerleştirin. Yapıları beş dakika boyunca sertleştirmek için UV ışığını 365 nanometre bant geçiren filtreyle açın. Sertleştikten sonra, her bir oyuğa taze düşük serumlu ortam eklemeden önce kalan ortamı bu oyuklardan çıkarın.
İstenilen zaman noktasında fibroblast aktivasyon çalışmasını gerçekleştirene kadar plakayı inkübatöre geri koyun, Asidik bir biyo-mürekkep ve bazik destek banyosu bulamacının kombinasyonu, 3D biyo-baskılı yapıların polimerizasyonunu kolaylaştırdı ve silindirik yapıları korudu. Floresan etiketli hidrojelin mikroskobu, destek banyosundaki jelatin mikropartikülleri tarafından indüklenen hidrojel içindeki gözenekleri gösterdi. Konfokal mikroskopi, 3D'de uzamsal kontrolün aşırı sertleştiğini gösterdi.
Fibroblast canlılık deneyleri, 300 mikron et kalınlığına sahip ve mililitrede 4 milyon hücreye sahip yapıların her zaman noktasında diğer tüm koşullardan daha iyi performans gösterdiğini ortaya koydu. Canlılık yedinci günde zirveye ulaştı, hücrelerin yaklaşık% 91'i canlı olarak boyandı ve 14. günde% 85'i hala yaşayabilirdi.
