Başlamak için, RCAS(A)retrovirüs stoğunu buz üzerinde çözün. Mikropipetin tıkanmasını önlemek için, çözeltiyi 10.000 G'de 10 saniye boyunca dört santigrat derecede santrifüjleyin ve çözeltileri buz üzerinde tutarken süpernatanı yeni bir tüpe aktarın. 35 x 10 milimetrelik bir hücre kültürü kabına gerilmiş bir laboratuvar parafilmi yerleştirin ve parafilme bir mikrolitre steril PBS ekleyin.
Hazırlanmış bir cam mikropipeti otomatik bir Pico enjektörüne bağlayın. PBS'yi bir mikropipete doldurmak için doldurma moduna basın ve ardından tahsis edilen bir mikrolitre sıvıyı test etmek için enjeksiyon moduna basın. Yeni bir hücre kültürü kabına ikinci bir gerilmiş laboratuvar parafilmi parçası yerleştirin ve filme bir mikrolitre hızlı yeşil lekeli viral stok ekleyin.
Mikropipetin ucunu viral stoğa indirin ve mikropipeti bir mikrolitre viral stokla doldurmak için doldurma moduna basın. Diseksiyon mikroskobu altında, otomatik bir enjektöre bağlı doldurulmuş mikropipeti tavuk embriyo merceğinin hedef bölgesine indirin. Ardından, lens vezikülünün net bir görüntüsünü sağlamak için ışık kaynağını ayarlayın.
Mikropipetin lens lümeni içinde doğru yerde olduğundan emin olduktan sonra, viral stoğun beş ila 40 nanolitresini enjekte edin. Enjeksiyondan sonra, mikropipeti nazikçe çıkarmadan önce 45 saniye bekleyin. Ardından, lensin boş lümenindeki hızlı yeşil boyayı sızıntı olmadan inceleyerek başarılı mikroenjeksiyonu kontrol edin.
Muayenenin ardından yumurta kabuğu ağzını bantla kapatın ve yumurtaları 37 santigrat derece nemlendirilmiş statik inkübatöre koyun. Bu çalışma, kimerik connexon 50 ve 43 döngülerinin immünofloresan yoluyla histolojik değerlendirmesini göstermektedir. Anti-Flag etiketlemesi kullanılarak, eksojen konneksonlar endojen olanlardan ayırt edildi.
Çalışma ayrıca connexon 50 ve Aquaporin zero'nun hücre içi döngü alanı arasındaki etkileşimi de değerlendiriyor.
