Başlamak için, anestezi uygulanmış bir farenin uzuvlarını yapışkan bantla sabitleyin. Karın derisini yukarı doğru tutun ve tamamen ortaya çıkarmak için göğüs çevresi boyunca dikkatlice kesin. Oftalmik makasla sağ atriyumda küçük bir kesi yapın ve hemen sol ventrikülün tepesine perfüzyon 22 gauge iğne yerleştirin.
Daha sonra şırıngadan 30 ila 50 mililitre kardiyak perfüzyon sıvısı itin. Sağ atriyumdan çıkış sıvısı tamamen berraklaştıktan sonra, eşit hacimde% 4 PFA çözeltisi infüze edin. Dokuları ve organları inceleyin ve gece boyunca dört santigrat derecede% 4 PFA ile sabitleyin.
Doku dekalsifikasyonunu indüklemek için. sabit kalp dokusunu 10 mililitre EDTA çözeltisine 37 santigrat derecede çalkalama masasına yerleştirin. Yaklaşık iki gün inkübe edin ve sıvıyı günlük olarak değiştirin.
Sabit kalvaria kemiklerini, doku renk giderme için 20 mililitre% 25 Quadrol çözeltisine yerleştirin. Bir gün boyunca 37 santigrat derecede çalkalanan bir masada inkübe edin ve sıvıyı bir kez değiştirin. Daha sonra, dokuyu sırayla% 30 Tersiyer-Bütanol veya TB çözeltisine yerleştirin.
Ardından% 50 TB çözeltisi ve ardından gradyan yağ giderme gerçekleştirmek için% 70 TB çözeltisi. Daha sonra, numuneleri ve TB PEG çözeltisini 37 santigrat derecede bir çalkalama masasında altı saat boyunca kurutun. Son olarak, tamamen susuz kalmış dokuyu BB PEG solüsyonuna 37 santigrat derecede bir sallama masasına yerleştirin.
İki ila dört saatlik inkübasyondan sonra doku şeffaflaşacaktır. PEGASOS Doku Temizleme Yöntemi ile şeffaf doku elde edildi. Tüm EDU mount boyama ile temizlenmiş doku, etiketlemenin verimli ve iyi korunmuş olduğunu gösterdi.
Kontrol grubunda, birkaç EDU pozitif hücre sütürler boyunca yaygın olarak dağıldı. Sütür genişlemesinden bir gün sonra, sütürün ortasında ve kenarlarında çoğalan hücreler gözlendi. Sütür genişledikçe, çoğalan hücrelerin sayısı zamanla azaldı.
Yeşil etiketli hücreler, kemik iliğindeki EDU pozitif sütür hücrelerinden farklı olan küçük yuvarlak hücrelerdi.
