Başlamak için eldivenleri, kartuşları ve kültür plakalarını %70 etanol ile temizleyerek steriliteyi koruyun. Ardından, biyoyazıcı için kompresörü açın ve yazıcıyı başlatmak için başlatılan düğmeyi seçin. Yazıcının içindeki yüzeyleri %70 etanol ile silin.
Yazdırma Çalıştır düğmesini kullanarak yazdırma dosyasını yükleyin ve Yazdırma Protokolü PDF'sini açın. Biyomürekkebi, aktivatör sıvılarını ve 50 mililitre tam ortamı oda sıcaklığında çözün. Yazdırma kartuşunu, Yazdırma Protokolü PDF'sinde belirtildiği gibi hazırlayın ve belirtilen bölmelerde doğru hacimlerde reaktif bulunduğundan emin olun.
Ardından, C1'e 1,2 mililitre F3, C2'ye 1,2 mililitre F32 ve C4'e 200 mikrolitre F261 ekleyin. Polietilenimin ve laminin kaplı plakayı inkübatörden çıkarın. Plaka tutucu bölmesini düşük profilli bir plakaya ayarlayın. Plakayı yazıcının sağ plaka tutucu bölmesine yerleştirin.
Kapağı plakadan çıkarın ve kapak tutucusuna yerleştirin. Yazıcı kartuşunu biyoyazıcıya yerleştirin ve yazdırma işlemini başlatmak için Print Inert Base (İnert Taban Yazdır) düğmesini seçin. Çözüldükten sonra, glutamaterjik nöronları ve astrositleri santrifüjleyin, süpernatanı aspire edin ve her iki hücre tipini bir mililitre tam ortamda ayrı ayrı yeniden süspanse edin.
20 mikrolitre hücre süspansiyonunu aynı hacimde tripan mavisi ile karıştırın ve her hücre tipi için canlı hücre konsantrasyonunu belirlemek için hücreleri sayın. Daha sonra, 3 milyon glutamaterjik nöronu 15 mililitrelik bir tüpte 1 milyon astrosit ile birleştirin ve sekiz mililitrelik bir son hacim elde etmek için tam ortam ekleyin. Hücre süspansiyonunu santrifüjleyin ve peleti bozmadan süpernatanı aspire edin.
Peletleri 200 mikrolitre aktivatör sıvısı F299 içinde yukarı ve aşağı pipetleyerek askıya alın. Kapakları kartuş ve kültür plakasına yerleştirin ve biyoyazıcıdan çıkarın. Bir biyogüvenlik kabininde, yazıcı kartuşunun C3 kuyusuna 200 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin.
Kartuşu biyoyazıcıya yeniden takın ve daha önce gösterildiği gibi kapağı çıkarın. Yazdırma çalışmasının yazdırma modelleri aşamasını başlatın. Aynı zamanda, 2D kontrol plakasındaki laminat medyayı komple medyayla değiştirin.
Biyo-baskı hedefleme plakasını biyoyazıcıya yerleştirin ve kapağı çıkarın. Bioprint hedefleme sürecini başlatın. İstendiğinde, hedefleme plakasını biyoyazıcıdan çıkarın.
Plaka üzerinde damlacıkların görülebileceği yerleri belirlemek için kılavuzu kullanın. Damlacık yazdırma ve seçim işlemini tekrarlamak için hedefleme plakasını biyoyazıcıya yeniden takın. İstendiğinde, hedefleme plakasını bir hücre kültürü plakası ile değiştirin.
Yazdırdıktan sonra, tüm 3D ko-kültür kuyucuklarına tam ortam ekleyin ve 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin. Son olarak, kartuşları ve kalan sıvıları atın. laboratuvar protokollerine göre.
Yedi günlük baskıdan sonra, neredeyse hiçbir tek hücre kalmadı ve birbirine bağlanan nörit demetleri ve astrositik projeksiyonlar güçlendirilmiş görünüyordu. Nörit büyümesi 12 ila 156 saat arasında doğrusal olarak arttı. Nörit büyümesi sırasında, hücre gövdesi kümeleri de boyut olarak artmıştır.
Hücre canlılığı analizi, toplam hücrelerin yaklaşık% 72'sinin dördüncü günde yaşadığını,% 29'unun ölü olduğunu gösterdi. İmmün boyama, biyolojik olarak basılmış nöronların ve astrositlerin sağlıklı hücre morfolojisini doğruladı ve her iki hücre tipi de hücresel çıkıntıların büyümesini sergiledi. Nöronların glutamaterjik fenotipi, glutamat reseptörü 2 için immün boyama ile doğrulandı.
