Kültür kuyucuklarını hazırlamak için, 24 oyuklu bir plakanın kapağını donör kodu A veya B, tarih ve doz ile işaretleyin. İnsan kanı içeren kriyo şişelerini sıvı nitrojenden çıkarın ve küçük buz kristalleri görülene kadar ılık su banyosunda kısmen çözdürün. Daha sonra, laminer bir akış başlığında, hava kabarcıklarının tüpün içine dökülmesini önlemek için şişeyi dikkatlice açın.
Şişenin içeriğini yeniden askıya alın ve 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Tüpü hafifçe döndürürken, damla damla, bir mililitre önceden ısıtılmış PBS ekleyin. PBS ve kanı karıştırmak için bir P-1000 pipeti kullanın.
Seyreltme ve homojen bir yıkama için, 15 mililitrelik tüpe yedi mililitre önceden ısıtılmış PBS ekleyin ve pipetleyerek karıştırın. Kanı sekiz dakika boyunca 180 g'da santrifüjleyin. Bu arada, 24 oyuklu bir plakanın etiketsiz kuyularını 500 mikrolitre PBS ile doldurun ve plakayı 37 santigrat derecede önceden ısıtın.
Santrifüjlemeden sonra, süpernatanı dikkatlice çıkarın ve paleti bozmadan tüpte yaklaşık bir mililitre bırakın. Bir pipet kullanarak, kalan süpernatanttaki paleti yeniden askıya alın. Ardından, daha önce gösterildiği gibi tüpe yavaş yavaş sekiz mililitre ılık PBS ekleyin.
Yeniden askıya alınan kanı santrifüjleyin. Bu arada, işaretli kuyucuklara 200 mikrolitre RPMI kültür ortamı ekleyin ve gösterildiği gibi plakayı önceden ısıtın. Santrifüjlemeden sonra, süpernatanı çıkarın ve yaklaşık 80 mikrolitre süpernatan bırakın.
Ardından 280 mikrolitre fetal buzağı serumu ekleyin ve paleti yeniden süspanse edin. 180 mikrolitre hücre süspansiyonunu işaretli kuyucuklara aktarın. Plakayı bir karbondioksit inkübatörde 37 santigrat derecede 10 dakika inkübe edin.
