JoVE Journal

Bioengineering

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir.

Assembling Magnet Sets and Conducting Multilayered Cell Patterning Using Magnetic Fields

Transkript

Başlamak için, şerit desenleri için mıknatıs setlerini birleştirmek üzere düz dikdörtgen mıknatıslar seçin. 2 milimetre kalınlığındaki silikon plakaları 2 x 8 x 30 milimetre boyutlarında dikdörtgenler halinde kesin. Ardından, dikdörtgen mıknatısları ve silikon plakaları katman katman birleştirin.

Nokta dizisi desenleri için, her mıknatıs setinin 6 x 6 ızgarada düzenlenmiş 36 silindirik mıknatıstan oluşmasını sağlayarak minyatür silindirik mıknatısları birleştirin. Bir hücre kültürü cihazı hazırlamak için, 2 milimetre kalınlığındaki silikon plakada 1 x 1 santimetre dikdörtgen bir delik oluşturmak için bir zımba kullanın. Delik ortada olacak şekilde yuvarlak bir kalıp oluşturmak için silikon plakayı deliğin etrafına kesin.

Sterilizasyon için kalıpları ultrasonik temizleyiciye yerleştirin. Kalıpları 10 dakika saf suyla sterilize edin. Ardından suyu 10 dakika boyunca %75 etanol ile değiştirin.

Kalıpları sterilizatör kutusunda 65 santigrat derecede 60 dakika kurutun. Ardından, sterilize edilmiş silikon kalıbı 25 milimetrelik yuvarlak bir cam hücre kızağına takın ve silikonun cama yapışması için kalıba hafifçe bastırın. Mıknatıs setlerini 6 kuyulu bir plakaya yerleştirin ve hücre kültürü cihazını mıknatıs setinin üzerine yerleştirin.

30 milimolar Gd-DTPA enjeksiyon çözeltisi hazırlamak için, 30 mikrolitre Gd-DTPA'yı 470 mikrolitre tam hücre kültürü ortamı ile karıştırın. Hücre desenlerini oluşturmak için, HUVEC'lerin süspansiyonunu 200G'de 5 dakika santrifüjleyin. Ve peleti Gd-DTPA içeren ortamda yeniden süspanse edin.

Hücre sayımından sonra, Gd-DTPA içeren bir ortam kullanarak hücre yoğunluğunu mililitrede yaklaşık 2 kez 10 ila 5 hücreye ayarlayın. Hücre süspansiyonunu yavaşça karıştırın ve ağzına kadar dolu bir sıvı yüzey oluşturmak için hücre kültürü kalıbının boşluğuna 200 mikrolitre ekleyin. Hücreler alt tabakaya yapışana kadar plakayı 3-6 saat inkübe edin.

İnkübasyondan sonra, Gd-DTPA içeren ortamı tam bir kültür ortamıyla değiştirin ve hücre kültürü cihazını mıknatıs setinden çıkarın. Çizgili hücre deseni için bir hücre kültürü cihazı hazırlamak için, cihazdaki kalın silikon plakaları ince plakalarla değiştirin. İlk hücre tipini modelledikten sonra, daha önce gösterildiği gibi, hücre kültürü cihazını aşağıdaki mıknatıslardan 1 milimetre sağa doğru hareket ettirin.

Aynı desen oluşturma prosedürünü ikinci tip hücrelere uygulayın. Ve üçüncü hücre kültürü cihazını aşağıdaki mıknatıslardan 1 milimetre sağa doğru hareket ettirin. Gösterildiği gibi üçüncü tip hücreleri modelleyin.

Her tür hücreyi desenledikten sonra, cam slaytları 200 mikrolitre PBS ile iki kez yıkayın. Son olarak, PBS'yi tam bir hücre kültürü ortamıyla değiştirin. 12 saat boyunca Gd-DTPA ile muamele edilen HUVEC'ler üzerinde yapılan canlılık testleri, 50 milimolar Gd-DTPA dışında hücre canlılığında önemli bir azalma göstermedi, bu da istatistiksel bir farkla sonuçlandı, ancak yaklaşık% 90'lık bir yaşam oranını korudu Çok tipli hücre deseninde, yan yana şeritler ve eşmerkezli nokta dizilerinden oluşan üçlü bir hücre modeli üretildi.

Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz

Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.