Bir fare glioblastoma modeli oluşturmak için farelerin yüzeysel beyin bölgelerine C6 glioma hücreleri enjekte ederek başlayın. Ardından kafatası penceresine bir kafa çubuğu sabitleyin ve farelerin iyileşmesine izin verin. Daha sonra, beyinde iki foton görüntüleme yapmak için fareye intravenöz olarak floresan etiketli nanopartiküller enjekte edin.
Hemen Ti: safir lazeri ve ana sistem anahtarını açın. Ardından kır görünümü yazılımını başlatın. Şimdi fareyi özel bir sahnede iki foton mikroskobu altında hareketsiz hale getirin.
Hayvanı ısıtılmış bir ped üzerine yüzüstü pozisyonda yerleştirin ve göğüs kafesi daraltmadan bantla sabitleyin. Kafatası penceresine bir damla su ekleyin ve odağı ayarlayın. Hayvanın kalp atış hızını ve kan oksijenlenmesini izlemek için sensörü arka pençeye yerleştirin.
Baş pozisyonunu ayarlayın. RFP filtresini kullanarak istediğiniz görüntüleme alanını bulun. Numune yönü ve görüntülenecek alan belirlendikten sonra, mikroskobu geniş alan modundan ışık tarama mikroskobu moduna geçirin.
Ti: safir lazerin 920 nanometrede mod kilitli olduğundan emin olun ve tüm panjurları açın. Gaz PMT voltajlarını 500 ila 600 volta ayarlayın. Görüntülemeye başlamak için yazılımda canlı görüntüye basın.
Net bir görüntü elde ettikten sonra, yazılımdaki bir görüntü yığınının üstünü ve altını ayarlamak için yazılımı ve motorlu sahneyi kullanın. Artan derinliklerde karanlığı telafi etmek için pockel'leri veya PMT kazancını yavaşça artırın. Bir kaydetme yolu ayarlayın ve Z serisini başlatın.
Yığın tamamlandıktan sonra, yığını kalite açısından gözden geçirmek için kayıttan yürütmeyi kullanın. Görüntüleme bittiğinde, hayvanı bir kurtarma kafesine taşıyın. Prairie görünümünden çıkın, tüm verilerin kaydedildiğinden ve aktarıldığından emin olun, ardından bilgisayarı ve tüm donanımı kapatın.
Sınırlı sayıda partikül ekstravazasyona uğramıştır ve nanopartikül uygulamasından 10 dakika sonra tümör hücrelerinin yakınında görülebilir. Bununla birlikte, nanopartikül uygulamasından 24 saat sonra, glioblastomda bol miktarda partikül görülür ve bu da ekstravazasyonu düşündürür.
