Başlamak için, toplanan insan spermi örneklerini sıvılaştırın ve bir pastör pipeti kullanarak iyice homojenize edin. Daha sonra 100 mikrolitre semen örneğini bir santrifüj tüpüne aktarın. Bu tüpe 900 mikrolitre boyama solüsyonu ekleyin.
Pipetleme ile tekrar tekrar karıştırın ve reaktanı iyice homojenize edin. Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 200 RPM'de sürekli çalkalama için tüpü iki boyutlu bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin. Boyama reaksiyonunu beklerken, CASA sistemini kullanarak spermatozoa konsantrasyonunun analizine devam edin.
Sistemi açtıktan sonra SCAscope ikonuna çift tıklayarak uygulama yazılımını açınız. Ardından, semen örneğini pipetleyerek iyice karıştırın ve 10 mikrolitreye kadar olan örneği SCA sayım odasına aktarın. Semen örneğinin sürüklenmesinin durması için 60 saniye bekleyin.
Ardından, SCA sayma odasını CASA sisteminin numune tutucusuna yerleştirin. Uygulama yazılımında, diyalog kutusuna hastanın bilgilerini girin. Menideki spermatozoa konsantrasyonunu kaydetmek için başlat düğmesine tıklayın.
Ardından, 30 dakikalık boyama reaksiyonu tamamlandığında çalkalayıcıyı durdurun. Analizden önce, santrifüj tüpünün içeriğini pipetleme ile karıştırın. 10 mikrolitreye kadar reaktanı sperm sayma odasına aktarın ve özel bir cam kapak kılıfı ile örtün.
Sperm sayma odasını mikroskobik sahneye yerleştirin ve optik mikroskobu açın. Ardından, reaktan numunesinin sürüklenmeyi durdurması için 60 saniye bekleyin. 10x objektif lens altında, bir görüş alanı seçmek için rotayı ve ince ayar düğmelerini ayarlayın.
Ardından 40x objektif merceğe geçin ve spermatozoa ve peroksidaz pozitif lökositleri gözlemleyin. En az 200 spermatozoa ve kahverengi peroksidaz pozitif lökosit sayısını saymak için elektronik sayaç sistemini kullanın. Bu teknik kullanılarak, semen örneğinde peroksidaz pozitif lökositler boyandı.
Peroksidaz pozitif lökositler, boyanmamış, sıradan, yuvarlak hücrelerle kontrast oluşturan kahverengi bir renk tonu sergiledi.
